一、Effects of Tiao-Xin-Fang on long-term potentiation in rat hippocampal slices（论文文献综述）
张丹丹[1]（2020）在《通络化痰胶囊治疗中风恢复期的临床疗效及对VD大鼠Clathrin介导的NMDAR胞吞动态变化研究》文中提出脑梗死又称缺血性脑卒中,是指因脑部供血障碍,缺血、缺氧所导致的局限性脑组织缺血性坏死或软化,属中医“中风病”范畴。通络化痰胶囊（Tongluo Huatan Capsule,THC）有活血通络、化痰熄风的功效,用于治疗中风病中经络痰瘀阻络证。团队课题组前期已完成该药Ⅳ期临床试验资料采集,但未对数据进行总结,现基于前期收集的临床数据进行系统性总结及分析,进一步评价通THC治疗中风恢复期的疗效和安全性。同时,基于中医“异病同治”思想,痰瘀阻络证也是缺血性卒中后引发血管性痴呆（Vescular Dementia,VD）常见证型,由此提出假设:THC对VD是否也会有效?据最新研究显示,上调网格蛋白（clathrin）及其内吞标记物Rab5B能够促进神经元表面N-甲基D-天冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR）的内吞,减少神经元膜表面的NMDAR分布,从而减轻兴奋性氨基酸毒性造成的神经元损伤,改善VD大鼠学习记忆能力,但是clathrin和NMDA受体在这一过程中各个时点的变化还未明确。故本研究拟针对VD大鼠模型,早期给药干预后造模,取海马组织,按照造模后3h/1d/3d/7d/14d不同时点,采用动物行为学及Western blotting（WB）、RT-PCR检测clathrin及其内吞标记物Rab5B、NMDAR1（NMDAR功能亚单位）的表达,探索脑缺血再灌注海马神经元clathrin介导的NMDA受体胞吞过程动态变化特点,同时探讨THC在VD早期干预中可能存在的作用,从而从微观表征层面证明中药异病同治的疗效。临床研究目的:进一步评价THC治疗中风病中经络恢复期痰瘀阻络证患者的疗效和安全性,为临床用药提供参考。方法:采用多中心、前瞻性、单臂队列临床研究,纳入34家二级甲等以上医院中符合西医脑梗死恢复期及中医中风病中经络痰瘀阻络证诊断标准的病例,予THC治疗4周。运用统计学方法对课题组前期采集的临床试验数据进行分析。以美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评定神经功能缺损,中医证候评分及改良Rankin量表（Modified Rankin Scale,mRS）为疗效评价指标;以血常规、肝功能、肾功能为安全性评价指标。结果:（1）2012年01月-2016年12月于34家二级甲等以上的医院纳入的受试者共2169例,THC治疗后神经功能缺损综合疗效、中医证候疗效总有效率分别为84.09%、81.01%;mRS总分减少50%及以上者817例（37.67%）,总分下降至0-1者1187例（54.73%）;（2）影响NIHSS综合疗效的多因素分析显示年龄（OR=1.024,95%CI 1.009-1.039,P=0.002）、基线合并高血压（OR=4.720,95%CI 3.513-6.341,PP=0.000）、冠心病（OR=2.601,95%CI 1.530-4.421,P=0.000）、高脂血症（OR=2.234,95%CI1.234-4.407,P=0.008）、基线 NIHSS 评分（OR=0.902,95%CI 0.849-0.957,P=0.001）影响临床神经功能缺损程度综合疗效。（3）影响中医证候疗效的多因素分析显示基线中医证候评分对中医证候疗效有影响（OR=62.023,95%CI 37.407-113.026,P=0.000）;（4）影响mRS改善的多因素分析显示年龄（OR=1.019,95%CI 1.007-1.031,P=0.001）、基线合并高血压（OR=2.898,95%CI 2.144-3.917,P=0.000）冠心病（OR=3.625,95%CI 1.516-8.673,P=0.004）对 mRS 的改善有影响;（5）THC不良反应总体发生率为0.00%。结论:（1）THC在中风恢复期的治疗中单用或联用其他西医基础治疗对于改善患者神经功能缺损程度、减轻残障及中医症状均有较好的疗效及安全性。（2）THC在中风恢复期的治疗中,年龄小、基线病情轻、没有基础疾病的患者疗效越好。实验研究目的:（1）探索VD大鼠海马区神经元clathrin介导的NMDA受体胞吞过程动态变化特点;（2）探索THC在VD早期干预中可能存在的作用。方法:大鼠适应性饲养7天后随机分为假手术组、模型组、THC组、美金刚组（MH组）、参知健脑方组（SZJN组）,分别予相应药物灌胃,假手术组、模型组予等量的蒸馏水灌胃,1次/日,连续7日。采用2VO+腹腔注射硝普纳的方法制备VD大鼠模型,假手术组大鼠分离双侧颈总动脉但不夹闭血管,不注射硝普钠。造模后进行跳台实验、新物体识别实验、Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力;造模后3h、1d、3d、7d、14d分别取大鼠海马组织通过RT-PCR、WB检测海马clathrin、NMDAR1、Rab5B在造模后不同时间点的表达水平。结果:（1）行为学①跳台试验（模型评价）结果显示:假手术组大鼠与正常组大鼠相比潜伏期以及错误次数无统计学差异;VD大鼠与正常组、假手术组相比,潜伏期缩短,错误次数增加（P<0.05）;②新物识别实验,模型组与假手术组比较,新物辨别指数下降（P<0.01）;THC组、SZJN组、MH组辨别指数均比模型组高（P<0.01）;③水迷宫:各组大鼠逃避潜伏期均有不同程度缩短（P<0.01）。不同分组对逃避潜伏期的影响有差异（P<0.05）,模型组与其他四组大鼠相比逃避潜伏期延长;撤去平台后,模型组与其他四组大鼠相比在目标限停留时间缩短（P<0.01）。和模型组相比,假手术组、SZJN组穿越平台次数增加（P<0.01）。（2）病理学HE染色显示,假手术组海马CA1区结构形态未见异常,神经元形态完整,排列整齐,胞核与胞质界限清晰可见无坏死。VD大鼠海马CA1区神经元形态不完整,排列紊乱,间隙增大,胞质稀少,神经元胞核深染,固缩呈三角形或不规则形,核仁不明显。造模后随着时间延长,VD大鼠海马CA1区神经元形态排列紊乱程度加重,间隙增加明显。与模型组比较,THC组、SZJN组大鼠海马CA1区整体组织损伤情况均有明显改善,神经元排列较为整齐,细胞形态结构较完整,胞质较均匀,胞核与胞质界限较清晰,少数细胞核深染、固缩,呈三角形或不规则形,核仁不明显。MH组大鼠海马CA1区细胞层次减少,神经元排列稀松,形态较模型组有明显改善,部分细胞核深染、固缩,呈三角形或不规则形。尼氏染色显示,假手术组大鼠海马CA1区神经元细胞排列整齐紧凑,染色后呈现为颗粒或状块状,染色浓密且规则。VD大鼠海马CA1区神经元排列散乱,造模后随着时间延长,细胞带出现了断裂,细胞凋亡数量增加,大量神经细胞出现尼氏体碎裂。THC组、SZJN组海马CA1区神经细胞排列较为整齐,少数细胞间隙增宽,细胞带稍有变薄,少量的神经细胞可见到有尼氏体碎裂、胞质中央尼氏小体消失。MH组海马CA1区神经元细胞形态和排列较模型组有所改善,部分神经元细胞凋亡,细胞带变薄。RT-PCR结果①与假手术组相比,造模后3h、1d、3d、7d、14dVD大鼠clathrin mRNA表达均减少（P<0.01）。与模型组相比,MHG组（P<0.01）、THC组（P<0.01）、SZJN组（P<0.01）大鼠海马clathrin mRNA相对表达量增加;②与假手术组相比,术后3h、7d、14d模型组大鼠NMDAR1 mRNA表达增加（P<0.01）,术后1d NMDAR1 mRNA表达下降（P<0.01）;与模型组相比,术后3h SZJN组NMDAR1 mRNA 表达降低（P<0.01）,术后 7d、14dMH 组（P<0.01）、THC 组（P<0.01）、SZJN组（P<0.01）NMDAR1 mRNA 表达降低;③与假手术组相比,术后3h、1d、3d、7d、14d VD大鼠Rab5B mRNA表达均减少（P<0.01）。与模型组相比,术后 3h、1d、3d、7d、14dMH 组（P<0.01）、THC 组（P<0.01）、SZJN组（P<0.01）大鼠海马Rab5B mRNA相对表达量增加。（3）WB结果①与假手术组相比,术后3h、1d、3d、7d、14d模型组大鼠clathrin蛋白表达均减少（P<0.01）。与模型组相比,THC组大鼠在术后3h（P<0.01）、1d（P<0.05）clathrin 蛋白表达升高,SZJN 组在术后 3h（P<0.01）、1d（P<0.05）、7d（P<0.05）、14d（P<0.05）clathrin蛋白表达升高,MH组在术后3h（P<0.01）clathrin蛋白表达增加。②与假手术组相比,术后3h（P<0.01）、7d（P<0.01）、14d（P<0.01）模型组大鼠的膜蛋白NMDAR1表达增加,术后1d表达减少（P<0.01）;与模型组相比,THC组大鼠术后3h（P<0.05）、7d（P<0.01）NMDAR1表达减少,1d时表达增多（P<0.01）,SZJN组、MH组大鼠术后3h、7d NMDAR1表达减少（P<0.01）。结论:（1）THC早期干预可减轻VD大鼠海马CA1区的病理损伤,提高学习及记忆能力,具有脑保护作用;（2）VD大鼠在脑缺血再灌注损伤后,海马神经元NMDAR1表达的动态演变在造模后先升后降再上升。clathrin及Rab5B表达降低导致神经元表面NMDAR内吞减少加重了兴奋性氨基酸毒性,导致学习记忆能力降低。（3）THC早期干预VD大鼠,可通过上调clathrin表达使神经元表面的NMDAR内吞增加,或下调NMDAR表达来减少兴奋性毒性作用对神经元的损伤,从而起到脑保护作用。
姜梅[2]（2020）在《五脏温阳化瘀法调节血管性痴呆大鼠海马突触前膜蛋白表达的实验研究》文中提出目的:从突触可塑性角度探讨五脏温阳化瘀汤保护、修复血管性痴呆大鼠学习记忆能力的分子机制,阐释唐农教授关于血管性痴呆阳虚血瘀痰阻病机理论及其临床意义。方法:本文采用理论探讨与实验研究相结合的方法。1.理论研究:通过梳理血管性痴呆的现代医学研究概况、中医学研究概况,复习唐农教授的学派传承、学术观点,阐释唐农教授对血管性痴呆病因病机的认识及其对治疗的指导意义。2.实验研究:采用双侧颈总动脉永久性结扎法制作SD大鼠慢性脑缺血血管性痴呆模型,以术后1周Morris水迷宫得分为模型成功判断标准,并进行分组。以假手术为阴性对照、尼莫地平为阳性对照,连续4周给予五脏温阳化瘀汤进行干预。观察五脏温阳化瘀汤对血管性痴呆大鼠生理状况、定位航行和空间探索行为的影响,分析其学习记忆和空间辨认的能力;利用免疫组织化学染色法和蛋白质免疫印迹法检测海马部位与突触可塑性相关突触前膜蛋白Syn、GAP-43的表达水平,酶联免疫吸附测定法检测五脏温阳化瘀汤对突触可塑性相关血清分子VEGF、BDNF、NGF浓度的变化,探讨五脏温阳化瘀汤保护血管性痴呆大鼠突触可塑性的作用机制。结果:血管性痴呆病性本虚标实,以阳气不足、神机失用为本,痰瘀阻滞脑络为标,治疗当以温阳为主、化瘀祛痰为辅。通过气体麻醉下的双侧颈总动脉永久性结扎法制备血管性痴呆模型,可以降低造模过程大鼠死亡率。术后1周采用Morris水迷宫定位航行实验检测,双侧颈总动脉永久性结扎法所造模型可出现定位航行行为障碍。术后一月中模型组整体表现出胆怯易惊,蜷缩少动,自主活动少,灌胃配合度偏低,易激怒。五脏温阳化瘀汤组给予药物治疗后较模型组明显改善,精神状态较好,目光较有神,自主活动较多,灌胃较配合。在Morris水迷宫实验中,对比模型组,五脏温阳化瘀汤组和尼莫地平组均缩短了寻找平台的逃避潜伏期和总路程,减少了首次跨越第三象限的时间,增加了空间探索实验中在目标象限停留的时间,表明五脏温阳化瘀汤和尼莫地平可以改善VD大鼠定位航行和空间探索能力,且五脏温阳化瘀汤改善作用更为明显。在免疫组织化学染色法和蛋白质免疫印迹实验中,对比模型组,五脏温阳化瘀汤组和尼莫地平组海马CA1区Syn、GAP-43蛋白表达均增强,提示五脏温阳化瘀汤和尼莫地平可通过上调Syn、GAP-43蛋白的表达,从而对神经元突触可塑性起改善作用,且五脏温阳化瘀汤改善作用更为明显。酶联免疫吸附法实验结果显示,对比模型组,五脏温阳化瘀汤组和尼莫地平组均提高了 VD模型大鼠血清VEGF水平,提示五脏温阳化瘀汤和尼莫地平对神经元突触微环境确有改善,五脏温阳化瘀汤组和尼莫地平组均提高了 VD模型大鼠血清BDNF、NGF水平,表明五脏温养化瘀汤和尼莫地平可对术后脑区慢性缺血缺氧状况下的神经元突触受损情况有所改善,且五脏温阳化瘀汤改善作用更为明显。以上结果表明,五脏温阳化瘀汤组相比模型组能够改善血管性痴呆大鼠的学习记忆行为和海马组织突触可塑性的病理,提高突触前膜相关蛋白Syn、GAP-43的表达,以及改善与突触可塑性相关血清分子VEGF、BDNF、NGF的水平。结论:（1）血管性痴呆病机以阳气不足、神机失用为本,以阳化不足、瘀血痰浊阻滞脑络为标,温阳活血化痰是治疗血管性痴呆的基本治法之一,五脏温阳化瘀汤温阳化气养神、活血祛痰以除标邪,治疗血管性痴呆具有较好的效果。（2）五脏温阳化瘀汤具有提高血管性痴呆大鼠学习记忆能力的作用,突出了阳气与神之间的关系,与阳气“精则养神”理论一致。（3）五脏温阳化瘀汤能够改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力,可能与其对血管性痴呆大鼠海马区神经元突触可塑性的调节有关,具体表现在提高突触前膜蛋白Syn、GAP-43表达,以及上调与突触可塑性相关血清分子VEGF、BDNF和NGF水平上。
刘珍洪[3]（2020）在《基于髓鞘及少突胶质细胞损伤探讨参枝苓口服液对AD的保护作用》文中认为目的本课题从中医心脑相关理论出发,选用“从心论治”代表方参枝苓口服液,基于髓鞘及少突胶质细胞损伤探讨其干预阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）的作用机制。AD是老年痴呆症最常见的类型。临床可表现为记忆、情志和行为障碍,对患者家庭、护理人员造成了沉重的经济和精神负担。近年来研究表明,髓鞘损伤与AD、帕金森疾病（Parkinson’sdisease,PD）和中风等神经退行性疾病相关。其中发现AD与髓鞘的破坏和丢失关系密切。研究发现髓鞘损伤早于认知障碍、老年斑（Senileplaque,SPs）和神经纤维缠结（Neurofibrillary tangles,NFTs）等病理改变,髓鞘损伤可能在AD早期认知障碍中发挥关键作用。PI3K/Akt-mTOR通路是髓鞘形成的强大驱动力,是CNS髓鞘蛋白表达的主要驱动因素。一些研究显示神经元PI3K/Akt-mTOR信号传导的异常和持续激活是AD的早期特征。mTOR在构成髓鞘的少突胶质细胞中对脂质合成,转录因子调节,和细胞骨架具有显着作用,这是少突胶质细胞发育不可或缺的过程。除外,表观遗传阻滞、脂质代谢异常皆与AD的病理密切相关。本研究通过体内实验探索参枝苓口服液是否有改善损伤髓鞘的作用,同时观察体外是否能通过保护Aβ42损伤的少突胶质细胞进而维持髓鞘完整性而防治早期AD。并基于PI3K/Akt-mTOR信号通路、表观遗传调控及脂质代谢探讨其可能机制,为参枝苓口服液保护髓鞘提供可能的证据。方法1.36只3月龄雄性APPswe/PS1dE9双转基因小鼠随机分为模型组,多奈哌齐组,参枝苓口服液组,每组12只。同背景、同月龄野生型C57BL/6J小鼠12只作为正常组。多奈哌齐组给予多奈哌齐（0.92mg.kg-1·d-1）灌胃给药,参枝苓口服液组给予参枝苓口服液（2.9ml·kg-1·d-1）灌胃给药。正常组和模型组灌予等体积的0.5%CMC。2.利用Y迷宫实验研究参枝苓口服液灌胃3个月后对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠空间识别和记忆能力的影响。3.利用透射电镜研究参枝苓口服液灌胃3个月后对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠海马中淀粉样斑块、髓鞘及少突胶质细胞超微结构的影响。4.利用免疫组化和Western blot方法研究参枝苓口服液灌胃3个月后对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠海马中髓鞘相关蛋白MBP、PLP和MAG与Aβ42蛋白的表达变化影响。5.40只雄性SD成年大鼠（200±20g）随机分为正常组和参枝苓口服液组,参枝苓口服液组以成人（70kg）等效剂量的2倍量进行灌胃,正常组灌服等体积0.5%CMC,每天1次,连续7d,制备参枝苓口服液含药血清。6.UHPLC-MRM-MS/MS方法检测参枝苓口服液含药血清主要有效成分。7.Aβ42损伤OLN-93少突胶质细胞,建立拟AD体外细胞模型。8.利用CCK-8法筛选参枝苓口服液含药血清及阳性药多奈哌齐对OLN-93少突胶质细胞的安全剂量和有效剂量。9.利用Western blot、RT-qRCR法、免疫荧光研究参枝苓口服液含药血清对Aβ42损伤OLN-93少突胶质细胞髓鞘相关蛋白和PI3K/Akt-mTOR信号通路蛋白及mRNA表达影响。10.利用PI3K/Akt-mTOR信号通路抑制剂LY294002（PI3K抑制剂）及Rapamycin（mTOR抑制剂）进一步确认PI3K/Akt-mTOR信号通路在参枝苓口服液髓鞘保护中的参与作用。11.利用染色质免疫共沉淀（CHIP）实验观察参枝苓口服液对Aβ42损伤少突胶质细胞OLN-93的乙酰化组蛋白与MBP基因相互作用。12.利用LC-MS/MS法观察参枝苓口服液对Aβ42损伤少突胶质细胞OLN-93脂质代谢的影响。结果1.体内动物实验参枝苓口服液和阳性对照药多奈哌齐连续灌胃3个月后可以明显延长APPswe/PS1dE9双转基因小鼠在新异臂中活动的路程和持续时间。透射电镜下可观察到在损伤的少突胶质细胞附近淀粉样斑块的沉积,而正常组和治疗组未观察到。同时,透射电镜下观察到参枝苓口服液和多奈哌齐可以明显改善髓鞘板层的结构、髓磷脂的崩解以及少突胶质细胞的结构破坏。在此基础上,对各组小鼠海马进行免疫组化及Western blot实验结果也显示,参枝苓口服液和多奈哌齐可以明显上调APPswe/PS1dE9双转基因小鼠海马中髓鞘相关蛋白MBP、PLP和MAG的蛋白表达。同时,APPswe/PS1dE9双转基因模型小鼠海马中观察到Aβ42的蛋白表达上调,参枝苓口服液和多奈哌齐可以明显下调小鼠海马中Aβ42的蛋白表达。2.UHPLC-MRM-MS/MS方法检测参枝苓口服液及参枝苓含药血清主要有效成分参枝苓口服液中,芍药内酯苷、肉桂酸、甘草酸、甘草苷和芍药苷这5种代谢物都能检测到。且浓度含量:甘草酸>芍药苷>芍药内酯苷>肉桂酸>甘草苷。参枝苓口服液大鼠含药血清中,可以检测到肉桂酸、甘草酸、甘草苷和芍药苷这4种代谢物。浓度含量:甘草酸>肉桂酸>芍药苷>甘草苷。芍药内酯苷虽然在质谱中可以检测到峰,但是信号可能与噪音相似,定量检测未检测出含量。提示,参枝苓口服液确实可以经过灌胃入血发挥作用,参枝苓口服液髓鞘保护作用可能与肉桂酸、甘草酸、甘草苷和芍药苷这4种成分密切相关。3.体外细胞实验Aβ42可以诱导OLN-93少突胶质细胞引起损伤,100μMAβ42孵育细胞16h以及1μM、10μM和100μM的Aβ42孵育细胞24h和48h后可以明显降低细胞活力。同时,1～100μM的Aβ42孵育细胞24h,细胞的损伤率明显增加。1～100μM的Aβ42孵育24h可以对细胞形态造成破坏,引起细胞固缩,碎裂,死亡。并且,Aβ42孵育24h可以显着升高OLN-93细胞的凋亡水平。用CCK-8法筛选参枝苓口服液含药血清和多奈哌齐的安全剂量、给药时间范围结果显示,1%～20%浓度的参枝苓口服液含药血清孵育3～48h对正常OLN-93细胞不具有细胞毒性,甚至16%和20%浓度的参枝苓口服液含药血清孵育24h和48h可以显着提高正常OLN-93细胞的细胞活力。多奈哌齐对正常OLN-93细胞的安全剂量及时间为:孵育 3h（0.01μM,0.1μM,1 μM,10μM,100μM）;孵育 24h（0.01 μM,0.1 μM,1μM,10μM,100μM）;孵育 48h（0.01 μM,0.1μM,1 μM,10μM）。CCK-8法筛选参枝苓口服液含药血清和多奈哌齐的有效剂量、给药时间范围,16%,20%参枝苓口服液含药血清孵育24h及48h。1 μM,10μM和100μM多奈哌齐孵育3h或24h;0.1μM,1μM和10μM多奈哌齐孵育48h。Aβ42损伤OLN-93少突胶质细胞,与体内动物实验一致,表现为Aβ42明显下调少突胶质细胞髓鞘相关蛋白MBP、PLP、MAG和MOG的表达,并且下调MBP和PLP的mRNA表达水平,而参枝苓口服液含药血清和多奈哌齐干预后可以明显逆转这些蛋白和mRNA的表达水平。另一方面,Aβ42损伤OLN-93少突胶质细胞还表现为引起PI3K/Akt-mTOR信号通路的异常。Aβ42不仅可以下调PI3K,Akt及mTOR的蛋白和mRNA表达水平,还可以明显下调p-PI3K,p-Akt及p-mTOR的蛋白表达水平,而参枝苓口服液含药血清和多奈哌齐干预后可以明显逆转这些蛋白和mRNA的表达水平。参枝苓口服液含药血清和多奈哌齐对Aβ42损伤OLN-93少突胶质细胞的保护作用可以被PI3K/Akt-mTOR信号通路的抑制剂完全逆转,具体表现为,无论是使用LY294002,Rapamycin还是联合使用LY294002与Rapamycin都可以完全逆转参枝苓口服液含药血清和多奈哌齐上调MBP的能力。CHIP实验显示:Aβ42损伤OLN-93少突胶质细胞后组蛋白H3乙酰化水平升高。多奈哌齐和参枝苓口服液含药血清下调组蛋白H3乙酰化水平。同时,Aβ42损伤OLN-93少突胶质细胞后,更多的基因MBP发生了组蛋白H3乙酰化。多奈哌齐和参枝苓口服液含药血清可以下调组蛋白H3乙酰化的MBP基因水平。脂质代谢结果显示:正常组的CL、PA、PC、PE、PG、PI、PS显着高于模型组。模型组的Cer、DG、SM和TG显着高于正常组。两组Cerp、Hex2Cer、HexCer和Sphingosine含量均等。多奈哌齐的Cer、CL、PA、PC、PE、PG、PI、PS显着高于模型组。模型组的SM和TG明显高于多奈哌齐组。参枝苓口服液的Cer、DG、CL、PA、PC、PE、PG、PI、PS、SM显着高于模型组。模型组的TG明显高于参枝苓口服液组。结论参枝苓口服液具有改善损伤髓鞘的作用,同时参枝苓口服液含药血清能保护Aβ42损伤的少突胶质细胞进而维持髓鞘完整性而防治早期AD。参枝苓口服液的髓鞘保护作用与PI3K/Akt-mTOR信号通路、表观遗传调控及脂质代谢密切相关。首先,参枝苓口服液可能通过上调PI3K,Akt及mTOR mRNA的水平,引起PI3K,Akt及mTOR蛋白的表达水平上调,增加PI3K,Akt及mTOR的磷酸化,增强PI3K/Akt-mTOR信号通路的活性,从而发挥少突胶质细胞及髓鞘保护作用。其次,参枝苓口服液通过下调组蛋白H3乙酰化水平、下调组蛋白H3乙酰化的MBP基因水平从而保护少突胶质细胞。再者,参枝苓口服液通过上调CL、PA、PC、PE、PG、PI、PS的含量,下调TG含量,调整脂质代谢紊乱从而保护少突胶质细胞。最后,参枝苓口服液髓鞘保护作用的物质基础则可能与肉桂酸、甘草酸、甘草苷和芍药苷这4种成分密切相关。
王亚晗[4]（2020）在《参枝苓口服液对拟SAD小鼠的髓鞘保护作用机制研究》文中研究说明目的伴随社会老龄化,阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease,AD）发病率逐年飙升,其中散发性阿尔茨海默病（Sporadic Alzheimer’s Disease,SAD）占95%以上,且病因病机复杂。SAD患者存在中枢神经系统胰岛素抵抗和葡萄糖代谢异常,且不伴外周血糖升高,又被称为“Ⅲ型糖尿病”。“从心论治”代表方参枝苓口服液具有益气温阳,化痰安神的功效,对早中期AD有一定疗效,但机制有待探讨。白质损伤存在于AD全过程,早于淀粉样蛋白（amyloid P-protein,Aβ）沉积和神经纤维缠结（neurofibirilary tangles,NFTs）引起的早期认知障碍。PI3 K/Akt-mTOR信号通路是调控髓鞘相关蛋白,维护髓鞘完整的重要通路。为了从动物整体水平研究参枝苓口服液对SAD的髓鞘保护作用机制,本研究通过双侧侧脑室注射链脲佐菌素（Streptozocin,STZ）（icv-STZ）拟SAD模型,观察参枝苓口服液对SAD小鼠学习和记忆保持能力的影响,并基于PI3K/Akt-mTOR通路,在髓鞘厚度、形态完整性和髓鞘相关蛋白形成的功能性脑回路中,探讨参枝苓口服液对于SAD早期的认知保护作用,从中医药角度为阿尔茨海默病早期干预提供实验基础。方法1.30只雄性3月龄C57BL/6J野生型小鼠随机选取15只双侧侧脑室注射人工脑脊液作为对照组,另外15只双侧icv-STZ制备SAD模型。分别于造模1、2、3、4个月后对两组小鼠进行跳台实验,观察小鼠学习和记忆保持能力变化;免疫组化和Western-blot观察AD特征性病理相关蛋白（Aβ42、phospho-tau）以及中枢糖代谢相关蛋白（IR、IRS-1、GSK3β、p-GSK3β、GLUT1、GLUT3）的表达水平,评价AD相关病理改变;透射电镜观察髓鞘超微结构,免疫组化和Western-blot观察髓鞘碱性蛋白（MBP）表达水平,评价模型的髓鞘损伤情况。2.90只雄性3月龄C57BL/6J野生型小鼠随机抽取15只双侧侧脑室注射人工脑脊液作为对照组,另外75只双侧icv-STZ制备SAD模型,适应性饲养一个月后随机分为模型组（蒸馏水）,多奈哌齐组（0.92mg/kg/d）,参枝苓大、中、小剂量组（49.67g/kg/d、24.83 g/kg/d、12.42g/kg/d）每组15只,所有小鼠按0.1ml/10g小鼠体重给药,每日灌胃1次,连续灌胃3个月。3.Morris水迷宫观察干预3个月后各组小鼠行为学表现,评价参枝苓口服液对SAD小鼠学习和记忆保持能力的影响。4.以牢固蓝（Luxol Fast Blue,LFB）染色法和透射电镜观察灌胃后各组小鼠的髓鞘超微结构和形态;免疫组化、Western-blot和RT-PCR观察髓鞘特异性蛋白MAG、MBP、MOG、PLP的蛋白表达和基因调控水平,评价参枝苓口服液对SAD小鼠的髓鞘保护作用。5.以免疫组化、Western-blot和RT-PCR观察PI3K/Akt-mTOR通路相关蛋白表达和基因调控水平,评价参枝苓口服液在髓鞘形成相关通路中发挥的作用。结果1.双侧icv-STZ拟SAD小鼠模型的AD相关病理改变跳台实验示:造模1、2、3、4个月后,双侧icv-STZ小鼠平均潜伏期较对照组缩短、平均错误次数较对照组增加（P<0.05,P<0.01）。免疫组化和Western-blot示:双侧icv-STZ小鼠Aβ42和p-tau表达较对照组增加（P<0.05,P<0.01）;双侧icv-STZ小鼠IR表达较对照组减少（P<0.05）,而IRS-1表达较对照组增加（P<0.01）,GSK-3β表达较对照组增加,而p-GSK-3β表达较对照组减少（P<0.05）;双侧icv-STZ小鼠GLUT1、GLUT3表达均较对照组减少（P<0.05,P<0.01）。透射电镜观察两组小鼠海马CA1区髓鞘超微结构,对照组髓鞘板层结构清晰完整,少突胶质细胞形态基本正常,双侧icv-STZ小鼠髓鞘崩解或严重膨出,少突胶质细胞形态不规则,染色质可见浓缩、边集（×2.5k）;对照组髓鞘和突触数量较多,双侧icv-STZ小鼠髓鞘和突触数量减少（×2.0k）;免疫组化和Western-blot与电镜结果一致,双侧icv-STZ小鼠MBP表达较对照组减少（P<0.05,P<0.01）。2.参枝苓口服液对拟SAD小鼠行为学的影响Morris 水迷宫示:第2～5天,各组小鼠平均潜伏期均缩短、平均游泳距离均减少,模型组平均潜伏期较对照组持续延长（P<0.01）、平均游泳距离较对照组增加（P<0.01）;第4天,多奈哌齐组和参枝苓大、中剂量组平均潜伏期较模型组缩短、平均游泳距离较模型组减少（P<0.05,P<0.01）;第5天,各治疗组小鼠平均潜伏期较模型组均缩短（P<0.05）,仅参枝苓大剂量组平均游泳距离较模型组减少（P<0.05）;撤台后,模型组较对照组穿越平台次数减少（P<0.01）,目标象限停留时间缩短（P<0.05）,多奈哌齐组和参枝苓大、中剂量组的穿越平台次数较模型组增加（P<0.05）,多奈哌齐组和参枝苓大、中剂量组的目标象限停留时间较模型组增加（P<0.05,P<0.01）。3.参枝苓口服液对拟SAD小鼠髓鞘结构和轴突直径/有髓纤维直径（g-ratio）的影响LFB染色示:对照组可见髓鞘纤维分布稠密,呈深蓝染色;模型组髓鞘纤维明显脱失,染色浅;各药物治疗组髓鞘纤维分布较模型组更紧密,蓝染色加深。透射电镜观察各组小鼠海马CA1区髓鞘板层结构,对照组髓鞘结构清晰完整,模型组髓鞘严重崩解,各治疗组的髓鞘结构较模型组明显修复（×12.0k）;随机选取5个视野计算g-ratio,模型组小鼠g-ratio较对照组增加（P<0.01）,各治疗组（参枝苓小剂量组除外）g-ratio值较模型组均减少（P<0.01）（×1.2k）;观察各组单个髓鞘,对照组轴突直径小,髓鞘较厚,模型组轴突直径较对照组增大,髓鞘变薄,多奈哌齐和参枝苓大、中剂量组轴突直径较模型组均减小,髓鞘厚度增加（×8.0k）。Western-blot示:模型组MAG表达较对照组降低（P<0.05）,各治疗组（除参枝苓小剂量组）MAG表达较模型组增加（P<0.05）。免疫组化示:除模型组外,各组均见MAG 阳性染色,其中对照组和参枝苓大剂量组MAG染色较深且分布稠密,模型组偶见MAG 阳性染色。Western-blot示:模型组MBP表达较对照组降低（P<0.05）,多奈哌齐组和参枝苓大、中剂量组MBP表达较模型组增加（P<0.01）;模型组MOG表达较对照组降低（P<0.01）,参枝苓大、小剂量组MOG表达较模型组增加（P<0.05）;模型组PLP表达较对照组降低（P<0.01）,除参枝苓小剂量组外的各治疗组PLP表达较模型组均增高（P<0.05）。4.参枝苓口服液对拟SAD小鼠MAG、MBP、MOG、PLP mRNA表达的影响RT-PCR显示,模型组MAG、MBP、MOG、PLP mRNA表达较对照组减少（P<0.05,P<0.01）,多奈哌齐和参枝苓大剂量组MAG、MBP、MOG mRNA表达较模型组增加（P<0.05,P<0.01）,各药物治疗组PLP mRNA表达较模型组均增加（P<0.05）。5.参枝苓口服液对拟SAD小鼠PI3K/Akt-mTOR通路相关蛋白表达的影响免疫组化示:模型组PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR阳性细胞数较对照组均减少（P<0.05,P<0.01）;与模型组相比,多奈哌齐组和参枝苓大、中剂量组PI3K、p-Akt阳性细胞数增加（P<0.05）,多奈哌齐组和参枝苓大剂量组Akt、mTOR和p-mTOR阳性细胞数增加（P<0.05,P<0.01）。PI3K和p-PI3K Westen-blot示:模型组PI3K表达较对照组降低（P<0.05）,参枝苓大、中剂量组PI3K表达较模型组均增加（P<0.05,P<0.01）;模型组p-PI3K表达较对照组降低（P<0.01）,多奈哌齐和参枝苓大剂量组p-P13K表达较模型组均增加（P<0.05）。Akt和p-Akt Westen-blot示:模型组Akt、p-Akt表达较对照组降低（P<0.05）,多奈哌齐和参枝苓大剂量组Akt、p-Akt表达较模型组增加（P<0.05）。mTOR和p-mTORWesten-blot示:模型组mTOR表达较对照组降低（P<0.01）,各治疗组mTOR表达较模型组均增加（P<0.05,P<0.01）;模型组p-mTOR表达较对照组降低（P<0.05）,多奈哌齐和参枝苓大剂量组p-mTOR表达较模型组增高（P<0.05,P<0.01）。p-S6K1 Westen-blot示:模型组p-S6K1表达较对照组降低（P<0.01）,多奈哌齐和参枝苓大剂量组p-S6K1表达较模型组增高（P<0.05）。6.参枝苓口服液对拟SAD小鼠PI3K/Akt-mTOR通路及下游S6K mRNA表达的影响模型组PI3K mRNA表达较对照组减少,无统计学差异（P>0.05）;各治疗组PI3K mRNA表达较模型组增加,无统计学差异（P>0.05）。模型组Akt、mTOR mRNA表达较对照组减少（P<0.05）;多奈哌齐和参枝苓大剂量组Akt、mTOR mRNA表达较模型组增加（P<0.05,P<0.01）,参枝苓中剂量组Akt mRNA表达较模型组增加（P<0.05）。模型组S6K mRNA表达较对照组减少（P<0.01）;多奈哌齐和参枝苓大剂量组S6K mRNA表达较模型组增加（P<0.05）。结论1.双侧icv-STZ拟SAD小鼠不仅行为学认知障碍持续存在4个月,并存在AD相应病理改变及髓鞘损伤;2.参枝苓口服液改善拟SAD小鼠早期认知损伤,与其促进髓鞘损伤后修复、增加髓鞘特异性蛋白表达,调节PI3K/Akt-mTOR通路相关蛋白表达有关。
张宁[5]（2020）在《基于脾胃与肠道菌群的相关性从记忆角度研究“脾藏意”》文中提出研究背景:“脾藏意”出自《素问·宣明五气》,是五脏藏神理论的重要内容,为中医辨治神志病证奠定了丰厚理论基础,具有重要的理论意义和实践价值。目前“脾藏意”实验研究较少,对其科学内涵缺乏深入了解。“脾”何以藏“意”,如何更好地运用“脾藏意”相关理论指导临床实践成为了中医理论现代科学研究中面临的重要任务。研究目的:整理相关文献,研究“脾藏意”的理论内涵,分析“脾藏意”相关理论在健忘诊疗中的应用;并基于脾胃与肠道菌群的相关性设计实验,观察肠道菌群变化对脾胃功能状态和空间记忆能力的影响,从记忆角度研究“脾藏意”的现代科学内涵。内容与方法:本项研究主要涉及文献研究和实验研究两部分内容:第一部分为文献研究。采用文献研究法对脾藏意相关理论进行系统研究,分别从生理基础和病理表现的特点来阐释脾藏意的理论内涵;基于脾藏意主记忆的认识,从中医对健忘的认识和从脾胃论治健忘的理论基础进行理论探讨,并基于肠道微生态学研究前沿提出科学假说,为实验研究部分提供切入点和落脚点;第二部分为实验研究。基于脾胃与肠道菌群的相关性设计动物实验,从记忆角度对脾藏意的内涵进行初步探索。我们以高脂饮食暴露法建立aMCI大鼠模型,研究高指饮食暴露法建立aMCI大鼠模型所需的实验条件。分别以益生茵管理和温肌汤来调节高脂饮食诱发的aMCI大鼠的肠道菌群和脾胃功能状态,观察各组大鼠痰湿中阻证证候评分和空间记忆能力的差异性变化,研究肠道菌群变化对脾胃功能状态和空间记忆能力的影响,并根据大鼠海马组织/神经元的病理改变、LTP变化和神经调节因子表达差异研究其作用机制,通过分析温胆汤组和益生菌管理组肠道菌群的变化情况来分析温胆汤能否通过调节肠道菌群发挥对高脂饮食诱发aMCI的防治作用。研究结果:1.文献研究脾藏意之“脾”是结构和功能的高度统一,脾藏意之“意”是对记忆、思维、注意和意志等神志活动中具有土象生化、承载等特性的心理过程的概括。脾胃为人体气血生化之源,气机升降之枢,具土象“中和”之德,司职“谏议”,故脾胃能够主持并调节神志活动。健忘是一类以记忆力减退,遇事善忘为主要临床表现的病证。脾藏意主记忆,脾胃主司记忆的形成过程,记忆失常当责之于脾胃。健忘与衰老相关,人之衰老始于脾胃,健忘的发生发展与脾胃功能衰退之间存在必然的因果联系。此外,脏腑失调、气血失和也是导致健忘的重要因素,脾胃与其密切相关,因此“重中”思想贯穿于健忘治疗的各个环节。肠道菌群具有复杂的生化特性,广泛参与了宿主的各项心生理活动,记忆活动是其中之一。由于肠道菌群与中医脾胃密切相关,可以从一定程度上反映脾胃的功能状态,我们认为“肠道菌群可能是脾藏意的生物学基础之一”,并设计实验进行初步验证。2.实验研究2.1高脂饮食暴露法建立痰湿中阻型aMCI大鼠模型研究:A.痰湿中阻证中医证候评分:与标准饲料暴露相比,45%中高脂饲料暴露60天大鼠的痰湿中阻证中医证候评分升高（p<0.05）;60%超高脂饲料暴露30天和60天大鼠的痰湿中阻证中医证候评分均显着升高（p<0.01）。B.空间记忆能力:与AIN93标准饲料暴露相比,60%超高脂饲料暴露60天目标象限游泳时间显着降低（p<0.05）。2.2益生菌管理/温胆汤对痰湿中阻型aMCI大鼠的影响及机制研究:A.痰湿证中医证候评分:与标准对照组相比,高脂对照组大鼠的痰湿证中医证候评分升高（p<0.01）;与高脂对照组相比,低剂量组和中剂量组痰湿中阻证中医证候评分无显着差异（p>0.05）,高剂量组大鼠的痰湿中阻证中医证候评分降低（P<0.05）,温胆汤组大鼠的痰湿中阻证中医证候评分显着下降（p<0.01）。B.空间记忆能力:与标准对照组相比,高脂对照大鼠目标象限游泳时间减少（p<0.05）;与高脂对照组相比,低剂量组和中剂量组目标象限游泳时间无显着差异（p>0.05）,高剂量组大鼠目标象限游泳时间增加（p<0.05）,温胆汤组大鼠目标象限游泳时间显着增加（p<0.01）。C.病理学观察:a.HE染色:各组大鼠海马CA1区与DG区神经元数量丰富、形态结构基本正常、排列规则,HE染色未见明显异常,各组之间无显着差异。b.甲苯胺蓝染色:标准对照组大鼠海马组织中尼氏小体数量丰富,深染,呈斑块状分布。高脂对照组大鼠海马组织中尼氏小体数量较少,染色变浅。高剂量组和温胆汤组大鼠海马组织中尼氏小体数量较丰富,染色加深。c.海马组织神经元超微结构:标准对照组大鼠海马组织神经元形态基本正常,结构基本完整,细胞器丰富,细胞质基质未见明显异常。高脂对照组大鼠海马组织神经元呈重度水肿,细胞质基质和细胞器数量明显减少,多呈坏死、崩解状态。高剂量组大鼠海马组织神经元细胞呈中度水肿状态,胞内细胞器丰富,但不同程度肿胀。温胆汤组大鼠海马组织神经元呈中度水肿,细胞器较丰富,并呈不同程度肿胀。d.海马组织突触超微结构:标准对照组大鼠突触突触结构完整,致密区相对较厚,突触间隙狭窄,突触小泡丰富;高脂对照组大鼠突触重度水肿,结构不清晰,突触间隙增宽,突触小泡较少;高剂量组大鼠突触呈中度水肿,突触间隙略增宽,突触小泡丰富;温胆汤组大鼠突触中度水肿,突触间隙略增宽,突触小泡较丰富。D.海马CA3-CA1区LTP:与标准对照组相比,高脂对照组大鼠在HFS诱导后fEPSP斜率降低（p<0.05）;与高脂对照相比,高剂量组益生菌大鼠在HFS诱导后fEPSP斜率显着升高（p<0.01）,温胆汤组大鼠在HFS诱导后fEPSP斜率升高（p<0.05）。E.神经调节因子表达情况:与标准对照组相比,高脂对照组大鼠海马组织BDNF、CREB和SYP的表达水平均降低（p<0.01或pp<0.05）;高剂量组BDNF和CREB的表达水平升高（p<0.05）,SYP无显着变化（p>0.05）;温胆汤组大鼠海马组织BDNF（p<0.01）、CREB和SYP（p<0.05）的表达水平均升高。F.肠道菌群变化情况:与标准对照组相比,高脂对照组Chaol指数和Observed species指数显着下降（p<0.01）;与高脂对照组相比,高剂量组Chaol指数和Observed species指数显着升高,温胆汤组Chaol指数和Observed species指数升高（p<0.05或p<0.01）。物种相对丰度分析显示,与标准对照组相比,高脂对照组大鼠Bacteroides菌属相对丰度降低,而Blautia菌属和Clostridium XlVb菌属和Paraprevotella菌属相对丰度升高;高剂量组和温胆汤组Bacteroides菌属相对丰度升高,Blautia菌属、Clostridium XlVb菌属和Collinsella菌属等相对丰度降低,变化趋势相似。OTU分析显示,与标准对照组,高脂对照组大鼠肠道菌群菌群物种组成存在明显差异;高剂量组和温胆汤组大鼠肠道菌群物种组成与标准对照组接近。结论:1.文献研究脾藏意是指脾胃对神志活动中记忆、思维等心理过程的主持和调节作用。脾胃纳运水谷,斡旋气机,能为神志活动提供必要的生理基础;脾胃又具土象“中和”之德,司职“谏议”,可助心君成其神明之用,故脾能藏意。脾藏意是五脏藏神理论的重要内容,是中医从脾胃论治健忘等神志病证的理论基础。2.实验研究（1）60%超高脂饲料暴露60天能够引起脾胃损伤,学习记忆障碍,成功建立痰湿中阻型aMCI大鼠病证结合模型。（2）高剂量益生菌管理可以调节肠道菌群,显着降低高脂饮食大鼠的痰湿中阻证中医证候评分,改善其脾胃功能状态,并能通过调节BDNF和CREB的表达,促进神经元修复和生长,提高长时程突触可塑性等方式改善高脂饮食大鼠的空间记忆能力。可见肠道菌群与脾胃密切相关,能够从一定程度反映脾胃的功能状态,是脾藏意的生物学基础之一。（3）温胆汤可以调理脾胃,降低高脂饮食大鼠的痰湿中阻证中医证候评分,并通过调节BDNF、CREB和SYP的表达,促进神经元细胞修复和生长,提高海马组织长时程突触可塑性,进而改善高脂饮食大鼠的空间记忆能力。温胆汤组大鼠肠道菌群的变化趋势与高剂量益生菌管理组接近,说明调节肠道菌群是温胆汤防治高脂饮食诱发的aMCI药效机制的关键环节之一。
赵俊[6]（2020）在《电针对CUMS诱导的抑郁模型大鼠海马miRNA-16及5-HT再摄取的实验研究》文中提出1目的和意义抑郁症（depression）被归类为一种常见的情感障碍性精神疾病。具有较高自杀率、自残率和复发率的特点,严重影响患病人群的生活质量,给患者家庭和社会带来沉重的经济负担。研究认为抑郁症的发病主要由社会环境及遗传学因素、单胺类神经递质失衡等原因引起。选择性5-HT再摄取抑制剂（SSRIs）如氟西汀用于治疗抑郁症,但约有50%的患者没有明显疗效。大量研究显示,在传统中医理论指导下,电针干预在改善抑郁症患者临床症状和在抑郁模型动物实验研究中均显现出一定的优势。本研究建立慢性不可预见性温和应激（CUMS）抑郁模型,探讨氟西汀、电针的抗抑郁疗效及可能相同的作用机制,旨在筛选替代疗法以达到优化治疗抑郁症的目的。2研究方法选用基线一致的SD大鼠72只,采用随机数字表将大鼠随机分为4组:空白组（C组）、模型组（M组）、氟西汀组（F组）和电针组（E组）,每组18只,各组大鼠均在实验前适应性饲养一周。参考既往文献,稍作修改制备CUMS抑郁模型,除C组大鼠群养,自由摄食、饮水,不接受任何刺激以外。其余各组大鼠均独笼孤养,M组、F组和E组大鼠每日随机接受一种应激刺激方式（即28天内分别以7种不同的应激方式刺激大鼠）,且同一种刺激不连续采用,刺激顺序抽签产生:包括禁水或禁食24h;昼夜颠倒24h;笼位倾斜24h;潮湿环境24h;束缚3h;夹尾3min;4℃冷水游泳5min,持续4周。M组大鼠每日10 am随机接受不可预见性的慢性应激造模刺激后,不接受治疗。F组大鼠每日10am接受应激,刺激方式同当日模型组,刺激1小时后,用氟西汀药液（生理盐水1mg/mL稀释）按照2mg/kg灌胃给药。E组大鼠每日10am接受应激,刺激方式同当日模型组,刺激1小时后,进行电针干预百会（GV20）、印堂（GV 29）穴,选用一次性针灸针,针刺深度约为5mm-10mm,小幅度轻提插捻转后,针柄连接韩氏电针仪,电流强度1mA,连续波,频率为2Hz,刺激强度维持在大鼠头部肌肉微微颤动为宜,留针20min,每日1次,持续4周（28）天。3研究结果3.1糖水偏好试验结果实验前（应激前）,各组大鼠糖水偏好率基线水平具有一致性、各组均值差异无统计学意义（P>0.05）。在接受4W应激刺激后,与C组比较,M组大鼠糖水偏好率明显下降,具有统计学意义（P<0.01）。与M组比较,氟西汀、电针干预均能使大鼠出现逆转效应,其糖水偏好率均值较模型大鼠升高,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.05）。3.2旷场试验结果实验前（应激前）,各组大鼠水平运动得分和垂直运动得分基线水平具有一致性,各组均值差异无统计学意义（P>0.05;P>0.05）。在接受4W应激刺激后,与C组比较,M组大鼠水平穿越方格数及垂直运动次数均显着减少（P<0.01,P<0.01）。与M组比较,F组大鼠水平穿越方格数和垂直运动次数出现逆转,呈上升趋势。而E组大鼠水平穿越方格数和垂直运动次数较M组增加,差异具有统计学意义（P<0.05;P<0.05）。3.3各组大鼠海马神经元形态结构、尼氏小体数量从苏木精—伊红（HE）染色和尼氏染色结果来看,CUMS应激刺激结合孤养可明显导致M组大鼠海马内神经元的数量减少、神经元形态破坏,尼氏体浅染,部分尼氏小体模糊不清。提示氟西汀、电针干预均可改善慢性应激刺激导致的大鼠海马神经元丢失,逆转细胞溶解、缺失现象,维持细胞形态,对尼氏体结构功能有一定的保护作用。3.4各组大鼠海马和血清中miRNA-16的表达水平与C组相比,M组大鼠海马中miRNA-16表达显着升高（P<0.01）;M组大鼠血清中miRNA-16表达有升高趋势,但无统计学意义（P>0.05）。与M组相比,氟西汀、电针干预均对CUMS应激诱导海马中miRNA-16高表达有逆转趋势,E组海马中miRNA-16表达低于M组（P<0.01）;E组海马中miRNA-16表达显着低于F组（P<0.01）;F组和E组相比较无显着性差异（P>0.05）。3.5基于海马miRNA-16异常表达探讨电针对5-HT及再摄取的影响RT-PCR和WB结果显示,M组海马区SERT mRNA,SERT蛋白表达显着升高（P<0.01;P<0.01）;较之M组,氟西汀、电针干预均对CUMS应激诱导海马中SERT mmRNA、SERT蛋白高表达有逆转趋势,且E组海马中SERT mRNA、SERT蛋白表达低于M组（P<0.05;P<0.05）。免疫荧光检测结果显示,M组大鼠海马CA1区中SERT阳性细胞数显着升高（P<0.01）;较之M组,氟西汀、电针干预均对CUMS应激诱导海马CA1区SERT阳性细胞高表达有逆转趋势,差异有统计学意义（P<0.01;P<0.01）。高效液相色谱法检测结果提示,M组大鼠海马5-HT含量水平显着下调（P<0.05）;较之M组,氟西汀、电针干预均显着逆转了 CUMS应激导致海马5-HT减少,F组和E组海马中5-HT含量高于M组（P<0.05;P<0.05）,接近正常大鼠水平;F组和E组相比较无显着性差异（P>0.05）。4结论（1）本研究结果显示,在4W应激刺激负荷后,CUMS应激可诱发模型大鼠部分抑郁核心症状。大鼠应激过程接受氟西汀、电针干预均表现出明显的抗抑郁效应,可一定程度上逆转慢性应激诱导的大鼠抑郁样行为。（2）长期CUMS刺激可导致模型大鼠海马内神经元损害。氟西汀、电针干预均可改善慢性应激刺激对大鼠海马神经元的损害作用,逆转神经元细胞溶解、缺失现象,维持细胞形态,对尼氏体结构功能有一定的保护作用。（3）表观遗传学的提出,可能综合了环境因素和病理遗传因素对抑郁症的影响。本研究结果表明长期慢性应激可诱导模型大鼠海马miRNA-16表达水平升高,而对血清miRNA-16表达无显着性影响。研究确定与抑郁症相关miRNA异常表达的脑区,对抑郁症的防治可能有其特殊意义,但具体临床价值有待进一步研究。（4）电针、氟西汀均可能是通过调控miRNA-16抑制相应SERT蛋白的表达,进一步抑制5-HT的再摄取,从而上调海马5-HT含量使其接近正常大鼠水平。由于不同抑郁模型研究差异,其特异性将是我们后续研究的重要方向。
吴东南[7]（2020）在《基于突触可塑性与神经炎症研究酸枣仁汤改善睡眠剥夺大鼠学习记忆的机制》文中提出目的:本课题理论研究部分通过总结中医对失眠、学习记忆障碍与酸枣仁汤的认识,旨在为酸枣仁汤防治失眠引起的学习记忆障碍提供理论依据;实验研究部分通过构建慢性睡眠剥夺大鼠模型,并予酸枣仁汤干预,观察干预前后大鼠学习记忆功能、突触可塑性、NLRP3炎性小体等的变化,旨在明确酸枣仁汤介导突触可塑性与神经炎症改善大鼠学习记忆的作用机制。方法:1.理论部分:基于中医古籍与近年来的文献资料,总结中医对失眠病症、学习记忆障碍病名、病因、病机的认识,对失眠与学习记忆障碍之间的关联进行阐述,并结合酸枣仁汤的组方分析和临床实验研究,为酸枣仁汤防治失眠引起的学习记忆障碍提供理论依据。2.实验部分:将60只SD雄性大鼠随机分为5组,即正常对照组（Normal control Group,NG）、模型组（Model Group,MOD）、艾司唑仑组（ESTazolam Group,EST）、酸枣仁汤低剂量组（Suanzaoren Decoction Low-dose Group,SZRDL）和酸枣仁汤高剂量组（Suanzaoren Decoction High-dose Group,SZRDH）,每组12只。NG组常规饲养,不造模,其他4组通过多平台水环境法建立慢性睡眠剥夺模型。除NG组外,其他4组每天连续睡眠剥夺12h,持续剥夺30d。造模和给药同时进行,NG组和MOD组按照10mL·kg-1·d-1的剂量灌胃纯水,EST组按照0.54mg·kg-1·d-1,10mL·kg-1·d-1的剂量灌胃艾司唑仑药液,SZRDL组按照4.59g·kg-1·d-1,10mL·kg-1·d-1的剂量灌胃酸枣仁汤药液,SZRDH组按照18.36mg·kg-1·d-1,10mL·kg-1·d-1的剂量灌胃酸枣仁汤药液。观察造模及给药期间各组大鼠的精神、饮食、摄水及体重等一般情况。灌胃结束之后进行以下的实验:通过Morris水迷宫实验与跳台实验评价各组大鼠的学习记忆能力;采用自主活动箱观察各组大鼠的自主活动的能力;采用尼氏染色法和高尔基染色法观察各组大鼠海马CA3区神经元突触的病理形态变化;通过免疫荧光和免疫组化观察突触可塑性关键蛋白PSD95、SYP及突触信号传递的关键蛋白NMDAR1（NR1）、NMDAR2A（NR2A）、NMDAR2B（NR2B）的表达水平;采用ELISA检测血清和海马中IL-1β和TNF-α的表达水平;采用Real time-PCR检测海马中IL-1β、TNF-αmRNA表达水平;采用Real time-PCR、免疫组化和western bolt检测NLRP3炎症小体通路中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18关键因子的蛋白和mRNA表达水平。结果:1.理论研究结果失眠属于中医“不寐”病症范畴,失眠的中医病因复杂繁多,以情志异常、饮食不节、外淫邪气等多见,这些病因引起阴阳失调、脏腑功能失调、气血亏虚进而导致失眠病症。学习记忆障碍属于中医“健忘”范畴,失眠与学习记忆障碍关系密切,一方面,阴血亏虚,神失所养是两者重要的共同病机;另一方面,失眠可引起学习记忆损害。因此,养血安神法是防治失眠与学习记忆损害重要的治法。酸枣仁汤作为养血安神法的代表方剂,近年来研究显示酸枣仁汤不仅能改善睡眠,减轻焦虑抑郁,还能改善学习记忆,为酸枣仁汤防治失眠引起的学习记忆损害提供理论依据。2.实验一结果2.1各组大鼠一般情况:睡眠剥夺及给药期间,NG组大鼠一般情况良好,毛发致密有光泽,尾巴、爪子颜色色红有光泽,精神良好,反应灵敏,摄食、饮水和二便无明显异常。与NG组比较,MOD组大鼠在睡眠剥夺前3天,摄食稍有增加,烦躁易激怒,但此后出现摄食和饮水明显减少,毛发无光泽易脱落,尾巴、爪子色泽偏淡无光泽,精神萎靡,神情呆滞,反应迟钝,时有落水现象。与MOD组比较,SZRDL组和SZRTH组大鼠摄食和饮水明显增加,毛发脱落较少,精神较振奋,警觉力增加。但EST组大鼠表现有精神萎靡、反映迟钝、嗜睡等趋向。2.2各组大鼠体重变化:睡眠剥夺及给药期间,NG组大鼠体重迅速增加。MOD组大鼠体重略有增加,但其增幅明显低于NG组大鼠。EST组、SZRDL组和SZRTH组大鼠体重也有增加,但其增幅明显低于NG组大鼠。与NG组大鼠比较,MOD组大鼠体重偏低,但差异没有统计学意义（P>0.05）。与MOD组大鼠比较,EST组、SZRDL组和SZRTH组大鼠体重有所增加,差异也没有统计学意义（P>0.05）2.3 Morris水迷宫实验结果:定位航行试验结果:与NG组比较,MOD组大鼠上平台潜伏期和游泳总路程明显增加（P<0.01）。与MOD比较,SZRDL组和SZRDH组大鼠上平台潜伏期和游泳总路程均有不同程度减少（P<0.01,P<0.05）,EST组大鼠上平台潜伏期和游泳总路程也有减少,但差异没有统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠上平台潜伏期和游泳总路程均有减少,但差异没有统计学意义（P>0.05）。空间探查试验:与NG组比较,MOD组大鼠穿越平台的次数与目标象限时间显着减少（P<0.01）,而第1次抵原平台时间则明显增加（P<0.01）。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组大鼠穿越平台次数和目标象限时间有所增加（P<0.01,P<0.05）,而第1次抵原平台时间则有所减少（P<0.05）;与MOD组比较,EST组大鼠大鼠穿越平台次数和目标象限时间增加、第1次抵原平台时间则减少,但差异无统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠穿越平台次数、目标象限时间和第1次抵原平台时间均有变化,但差异没有统计学意义（P>0.05）。2.4跳台实验结果:与NG组比较,MOD组大鼠出错次数明显增加（P<0.01）,而潜伏期则明显减少（P<0.01）。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组大鼠出错次数均有不同程度减少（P<0.01,P<0.05）,而潜伏期则有不同程度增加（P<0.01,P<0.05）,EST组大鼠大鼠出错次数减少、潜伏期增加,但差异没有统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠出错次数和潜伏期均有变化,但差异没有统计学意义（P>0.05）。2.5自主活动实验结果:与NG组比较,MOD组大鼠活动时间和运动距离显着增加（P<0.01）,静止时间有所减少（P<0.05）。与MOD组比较,EST组、SZRDL组和SZRDH组大鼠活动时间和运动距离减少（P<0.01,P<0.05）,静止时间增加（P<0.01,P<0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠运动距离、活动时间和静止时间均有变化,但差异没有统计学意义（P>0.05）。3.实验二结果3.1尼氏染色结果:NG组大鼠海马CA3区神经元清晰完整,排列紧密,细胞结构完整,细胞内核仁清晰,胞质内可见丰富的尼氏小体。MOD组大鼠神经元排列欠规则,细胞周围间隙增宽,胞质内尼氏小体明显减少。而给予睡眠剥夺大鼠酸枣仁汤后,SZRDL组和SZRDH组大鼠海马CA3区神经元排列好转,尼氏体减少得以改善。但给予睡眠剥夺大鼠艾司唑仑,EST组大鼠海马CA3区神经元排列紊乱和尼氏体数量减少情况改善不明显。通过对各组大鼠海马CA3区神经元数量统计,我们发现MOD组大鼠海马CA3区神经元数量明显减少（P<0.01）。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组海马CA3区神经元数量有所增加（P<0.01,P<0.05）,EST组大鼠海马CA3区神经元数量变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠海马CA3区神经元数量变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。3.2高尔基染色结果:NG组大鼠海马CA3区神经元树突棘数量丰富且密度较高。与NG组比较,MOD组大鼠CA3区神经元树突棘密度明显减少（P<0.01）。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组海马CA3区神经元树突棘密度有所增加（P<0.01,P<0.05）,EST组大鼠海马CA3区神经元树突棘密度也有所增加,但差异没有统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠海马CA3区神经元树突棘密度变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。3.3免疫组化实验结果:与NG组比较,MOD组大鼠海马CA3区NR1、NR2A和NR2B的IOD值明显减少（P<0.01）。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组大鼠海马CA3区NR1、NR2A和NR2B的IOD值有所增加（P<0.01,P<0.05）,EST组大鼠海马CA3区NR1、NR2A和NR2B的IOD值变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠海马CA3区NR1、NR2A和NR2B的IOD值变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。3.4免疫荧光实验结果:与NG组比较,MOD组大鼠海马CA3区PSD95和SYP的绿色荧光强度和荧光数量明显减少。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组大鼠海马CA3区PSD95和SYP的绿色荧光强度和荧光数量有所增加,而EST组大鼠海马CA3区PSD95和SYP的绿色荧光强度和荧光数量变化不明显。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠海马CA3区PSD95和SYP的绿色荧光强度和荧光数量变化不明显。4.实验三结果4.1ELISA实验结果:与NG组比较,MOD组大鼠血清和海马中IL-1β、TNF-α表达量明显升高（P<0.01）。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组大鼠血清和海马中IL-1β、TNF-α表达量均有不同程度降低（P<0.01,P<0.05）,EST组大鼠血清和海马中IL-1β、TNF-α表达量变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠血清和海马中IL-1β、TNF-α的表达量变化也不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。4.2Real time-PCR实验结果:与NG组比较,MOD组大鼠海马中IL-1β、TNF-αmRNA表达量明显升高（P<0.01）。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组大鼠海马中IL-1β、TNF-αmRNA表达量均有不同程度降低（P<0.01,P<0.05）,EST组大鼠海马中IL-1β、TNF-αmRNA表达量变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠海马中IL-1β、TNF-αmRNA的表达量变化也不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。5.实验四结果5.1Real time-PCR实验结果:与NG组比较,MOD组大鼠海马中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-18 mRNA表达量明显升高（P<0.01）。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组大鼠海马中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-18 mRNA表达量均有不同程度降低（P<0.01,P<0.05）,EST组大鼠海马中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-18 mRNA表达量也有所减少,但差异没有统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠海马中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-18 mRNA表达量变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。5.2免疫组化实验结果:与NG组比较,MOD组大鼠海马中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18的IOD值明显升高（P<0.01）。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组大鼠海马中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18的IOD值均有不同程度降低（P<0.01,P<0.05）,EST组大鼠海马中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18的IOD值变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠海马中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18的IOD值变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。5.3Western bolt实验结果:与NG组比较,MOD组大鼠海马中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达量明显升高（P<0.01）。与MOD组比较,SZRDL组和SZRDH组大鼠海马中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达量表达量均有不同程度降低（P<0.01,P<0.05）,EST组大鼠海马中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达量有所减少,差异没有统计学意义（P>0.05）。与SZRDL组比较,SZRDH组大鼠海马中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达量变化不明显,差异没有统计学意义（P>0.05）。结论:1.理论研究结论:阴血亏虚,神失所养是失眠与学习记忆障碍重要的共同病机,酸枣仁汤作为养血安神法的代表方剂是防治失眠与学习记忆障碍的重要方药。2.慢性睡眠剥夺可引起大鼠出现学习记忆障碍和焦虑样行为,酸枣仁汤可以改善睡眠剥夺引起的学习记忆障碍和焦虑样行为;3.睡眠剥夺可以导致大鼠海马神经元突触受损,酸枣仁汤则可通过调节突触可塑性关键蛋白PSD95、SYP及突触信号传递关键蛋白NMDAR1（NR1）、NMDAR2A（NR2A）、NMDAR2B（NR2B）的表达水平以改善神经元突触损伤;4.睡眠剥夺可引起大鼠血清和海马中出现炎性反应,酸枣仁汤可通过抑制IL-1β和TNF-α的表达水平减轻睡眠剥夺模型大鼠脑内神经炎症;5.酸枣仁汤可通过抑制NLRP3炎性小体通路,减轻神经炎症防治睡眠剥夺引起的学习记忆障碍和焦虑样行为。
孙梦雅[8]（2019）在《运动对大鼠空间学习和记忆能力、海马功能蛋白表达量的影响》文中研究指明目的:通过观察长期中等负荷、过度负荷运动训练后大鼠空间学习和记忆能力的变化,检测海马功能蛋白表达量,探讨长期不同负荷运动对大鼠空间学习记忆能力的影响与海马功能蛋白表达变化的关系。方法:成年雄性SD大鼠40只,适应性喂养3d后随机分为3组:考虑过度负荷游泳训练可能会造成大鼠溺亡,故增加过度负荷运动组大鼠数量。具体分组如下:对照组（C,n=12）,中等负荷运动组（M,n=12）,过度负荷运动组（O,n=16）。C组常规饲养,不进行游泳运动,M组进行7周中等负荷游泳运动,O组进行7周过度负荷游泳运动。第7周进行运动训练的同时开始Morris水迷宫实验测试空间学习和记忆能力,测试结束24小时后处死各组大鼠,取血液、海马样本。ELISA法检测血清睾酮,HE染色大鼠海马组织观察形态结构,Western Blot法检测大鼠海马脑源性神经营养因子（BDNF）、酪氨酸受体激酶B（TrkB）、神经细胞粘附分子（NCAM）、N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B亚基（NR2B）的表达。结果:1.体重:第2-7周,M组、O组大鼠体重显着低于C组（P<0.05）;第6、7周,O组大鼠体重显着低于M组（P<0.05）。2.血清睾酮:O组大鼠的血清睾酮含量显着低于C组和M组（P<0.05）;C组、M组大鼠血清睾酮含量无显着性差异（P>0.05）。3.Morris水迷宫行为学测试。定位航行实验:测量时间点（时间）因素、不同负荷运动均对大鼠走Morris水迷宫的潜伏期造成影响（P<0.05）。空间探索实验:M组穿越平台次数显着多于C组和O组（P<0.05）。4.海马组织结构:C组、M组大鼠海马锥体细胞数目多、密度大、排列整齐,细胞膜结构完整、轮廓清晰,细胞质充盈;O组大鼠海马锥体细胞数目较C组和M组减少、密度小、排列不整齐,细胞膜轮廓模糊,细胞质减少。5.海马BDNF表达量:M组、O组大鼠海马BDNF表达量显着高于C组（P<0.05）;O组大鼠海马BDNF表达量高于M组,但无显着性差异（P>0.05）。6.海马TrkB表达量:M组大鼠海马TrkB表达量显着高于C组（P<0.05）;O组大鼠海马TrkB表达量低于M组高于C组,但无显着性差异（P>0.05）。7.海马NCAM表达量:M组大鼠海马NCAM表达量显着高于O组、C组（P<0.05）;O组大鼠海马NCAM表达量显着高于C组（P<0.05）。8.海马NR2B表达量:M组、O组大鼠海马NR2B表达量显着高于C组（P<0.05）;O组大鼠海马NR2B表达量高于M组,但无显着性差异（P>0.05）。结论:1.长期中等负荷训练能提高空间学习和记忆能力,这种提高可能得益于,BDNF与TrkB通路同时增强,提高突触结构可塑性,NR2B加速信号传递、NCAM促进突触完成适应性变化,提高突触功能可塑性。2.长期过度负荷训练能使空间学习和记忆能力缓慢下降,这种抑制可能是由于,NR2B过度表达使海马组织形态结构受损,BDNF与TrkB通路不能相应增强及时修复神经元,且NCAM促进突触完成适应性变化效果远不如中等负荷训练,最终使突触可塑性降低。
乔森[9]（2017）在《加味开心散对AD模型小鼠突触改善作用的研究》文中研究指明阿尔兹海默病（Alzheimer Disease,AD）是一种进行性神经退行性疾病,随着社会人口老龄化的到来,阿尔兹海默病的发病率逐年上升,阿尔兹海默病带来的社会问题、经济问题不容忽视。由于现代医学关于阿尔兹海默病的病因尚在研究探索当中,至今尚无针对性治疗阿尔兹海默病的特效药物。所以阿尔兹海默病的治疗方法仍需要不断研究。中医药学是一个巨大的宝库,中医文化源远流长。在几千年的中医实践中,积累了大量宝贵的临床经验,其中老年性痴呆的相关诊疗经验,是现代医学认识和治疗阿尔兹海默病的重要依据,是研究阿尔兹海默病的宝贵财富。由于“阿尔兹海默病”和“老年性痴呆”是现代医学病名,在中医古籍中并无此记载。但是中医医籍记载中“健忘、癫症、痴呆、呆病”等疾病的临床表现与现代医学的老年性痴呆有许多类似之处。中医学“健忘、癫症、痴呆、呆病”等疾病包含了现代医学老年性痴呆疾病的内涵。纵观中医医史,不同医家对老年性痴呆中医病因病机也具有不同认识。但主要病因不离痰、虚、瘀等方面。其中肾虚精亏被近代许多数医家认为是老年性痴呆的重要改变。本课题组根据多年中医临床观察,结合现代医学研究成果,提出气虚、痰凝、血瘀是贯穿阿尔兹海默病发病的关键因素,肾虚精亏等只是“虚、痰、瘀”的一个终末期体现,而且随着疾病的发展,不仅是肾脏,五脏功能均会虚损。本文通过系统回顾老年性痴呆相关文献资料,总结并挖掘老年性痴呆的主要病因病机,从理论上系统阐释中医痰、虚、瘀与老年性痴呆的关系。首次提出以气虚、痰凝、血瘀三者概括阿尔兹海默病的主要病因病机。而且本课题组前期实验也证实,在此理论指导下,益气化痰行瘀法对AD模型小鼠有良好的改善作用。开心散是《备急千金要方》中治疗好忘的基础方,后世有许多衍生方。开心散由人参、远志、茯苓、石菖蒲四味药组成,主要体现了益气、化痰的治疗思路。现代研究发现,开心散对阿尔兹海默病、抑郁症等神经精神性疾病有良好的治疗作用。本课题组根据上述对老年性痴呆的理论认识,结合多年临床经验,对开心散原方进行加味,加入了活血化瘀之丹参、川芎,温阳补气的巴戟天。使全方以益气化痰行瘀法统方,更贴合老年性痴呆的复杂病机。由于老年性痴呆以学习记忆进行性减退为最主要的临床症状,而突触与学习记忆关系密切,突触传递是学习记忆的基础。既往研究发现,开心散可以改善AD模型小鼠的学习记忆能力,开心散可以调节突触可塑性,还能显着上调抑郁小鼠突触相关蛋白如突触结合蛋白（synaptotagmin）、突触后致密蛋白（post synaptic density protein）的表达,说明了开心散对突触的有效作用。于是本实验以突触功能为研究内容,研究了加味开心散及其原方对AD模型小鼠学习记忆功能的改善及对突触可塑性的作用,并研究了加味药中丹参的主要水溶性成分丹参素对小鼠海马CA1区椎体神经元突触传递的影响及丹参素对A β1-42孵育的离体脑片突触可塑性的保护作用,从实验层面支持益气化痰行瘀的治疗方法是治疗老年性痴呆的良好的治疗方法。目的:益气、化痰、行瘀是中医学的基本治法,在老年性疾病的治疗中占重要地位。本文通过回顾历代文献,总结历代医家对老年性痴呆中医病因病机的认识,认为气虚、痰凝、血瘀是老年性痴呆的发病基本病机,老年性痴呆病属虚实夹杂的病症。从益气化痰行瘀的角度理论阐释老年性痴呆发病的病机及其治疗的可行性。实验部分,本课题组选取侧脑室注射A β 的AD小鼠模型作为老年性痴呆的动物模型,观察益气化痰行瘀辨证思路组方的加味开心散对AD模型小鼠学习记忆水平、突触可塑性的影响,并选取了加味开心散中主要药物——丹参中的主要有效单体丹参素为研究对象,观察丹参素对小鼠海马CA1区椎体神经元突触传递的影响、以及对急性孵育寡聚化A β1-42离体脑片LTP的作用,旨在为益气化痰行瘀法治疗老年性痴呆的研究提供理论依据和实验依据。方法:1.理论探讨:整理与中医痴呆、健忘,益气化痰行瘀法有关的古今文献,分析益气化痰行瘀法的概念、内涵,提炼益气化痰行瘀治法的理论基础,及其防治老年性痴呆的必要性及理论依据。2.以侧脑室注射Aβ1-42为老年性痴呆的小鼠模型,以突触功能为研究靶点,研究益气化痰行瘀法对老年性痴呆的作用及其机制。观察小鼠自主活动情况、旷场运动,Morris水迷宫测试,检测小鼠学习记忆的能力;用神经电生理的方法以全细胞膜片钳记录小鼠海马CA1区椎体神经元mEPSC、sEPSC、sIPSC,以及场电位记录的方法记录小鼠Schaffer通路上fEPSP、LTP等指标。结果:1.理论研究通过研究历代医家认识治疗健忘、痴呆的着作,发现气虚、痰凝、血瘀和老年性痴呆发生有着密切的关系,其三者之间相互影响,最终导致了痴呆的发生。以益气化痰行瘀为方法治疗老年性痴呆理论上可行。2.加味开心散给药组Morris水迷宫实验结果定位航行实验中,随着训练时间的延长,空白组及各给药组小鼠潜伏期随训练天数逐步缩短,模型组潜伏期变化不明显（P<0.01）。空间探索实验中,与空白组比较,模型组小鼠穿越平台次数明显减少,开心散各组相对于模型组,穿越平台次数增加,且呈递增趋势,以开心散加味高剂量最为显着。与模型组相比,开心散高剂量穿越次数显着增加（P<0.05）,与多奈哌齐组相比,开心散高剂量也显示出明显增高趋势。（P<0.05）。空间探索实验里,与空白组相比,模型组目标象限停留时间缩短。开心散加味组目标象限停留时间增长,以开心散加味高剂量组为显着。与模型组、多奈哌齐、开心散原方比较,开心散加味高剂量组目标停留时间明显延长,且具有统计学差异（P<0.05）。3.LTP实验结果与空白组相比,模型组LTP的维持明显抑制（P<0.01）,而灌胃给予开心散、开心散加味高剂量后各组LTP维持得到明显改善（P<0.01）,开心散组及加味开心散组相比,加味开心散对LTP的维持作用更加显着（P<0.01）。4.丹参素对突触传递的影响与给药前比较,100uM的丹参素没有改变小鼠海马CA1区椎体神经元sEPSC的幅度和频率,但是能显着降低其slPSC的频率（P<0.01）。200uM丹参素能显着提小鼠高海马CA1区椎体神经元mEPSC的频率（P<0.01）,但对其幅度无影响（P>0.05）。5.丹参素对海马突触可塑性的影响急性孵育Aβ1-42后,小鼠海马Schaffer通路LTP产生明显抑制（P<0.05）,在提前给予脑片预孵育200uM丹参素30min,LTP的抑制作用得到改善（P<0.01）。结论:1.气虚痰瘀是老年性痴呆发病的重要中医病机,益气化痰行瘀法防治老年性痴呆有其可行性。2.益气化痰行瘀法对侧脑注射A β 的AD小鼠模型学习记忆能力具有改善作用,开心散加味后对AD模型小鼠突触长时程增强有明显改善作用,且较原方更优,加味开心散改善AD模型小鼠突触可塑性可能是其改善学习记忆能力的机制之一。3.一定浓度的丹参素能通过增强突触前谷氨酸量子化释放增加小鼠海马锥体神经元的自发兴奋性突触后电流的频率,丹参素能改善急性孵育A β1-42造成的离体脑片LTP抑制,其可能是丹参素改善AD小鼠学习记忆的机制之一。
关素珍[10]（2014）在《孕期慢性应激对子代学习记忆能力影响及其干预的实验研究》文中研究说明目的：通过建立孕期慢性不可预知温和应激（Chronic unpredictable mild stress, CUMS）大鼠模型,在行为学、组织学、分子基因不同水平下,系统的观察大鼠孕期处于应激状态对母体生殖功能及母体、子代的学习记忆能力、情绪的影响,且从海马神经递质和可塑性出发,探讨损伤的可能机制,并经过丰富环境来进行学习记忆能力损伤干预的机制探讨,为深入理解和预测应激的遗传性危害及下一步人群流行病学研究及干预提供科学依据。方法：选用Wistar雌性成年大鼠20只,随机分为模型组和对照组,模型组连续21天采用单笼饲养和慢性轻度不可预知应激造模（在第3天开始交配）；1)动态观察母鼠体重变化,采用放射免疫法测定血浆皮质酮水平,敞箱实验测定行为学改变,糖水消耗实验测定液体消耗,检测生殖有关的基本情况；测定子鼠血浆皮质酮浓度,采用Morris水迷宫、Y迷宫实验测定子鼠学习记忆能力,利用液体消耗实验、敞箱实验、悬尾实验测定子鼠情绪变化的测定,并分析其变化；2)采用HE染色和电镜进行子鼠脑海马形态学观察,ELISA方法测定脑海马组织各类中枢神经递质含量及活性,分别采用实时荧光定量RT-PCR和Western Blotting测定海马组织中神经营养因子BDNF、IGF-Ⅱ、核转录因子NF-κB,海马中突触可塑性相关蛋白Arc表达情况,并分析其相关性；3)给予孕期慢性应激及对照组子代组分别丰富环境干预,进行行为学、情绪、脑海马神经递质含量及突触相关蛋白表达情况测定,分析其效果。结果：1)模型组母鼠体重与对照组存在统计学差异（P<0.05）,模型组大鼠体重增高率低于对照组；模型组母鼠皮质酮与对照组存在统计学差异（P<0.05）,模型组母鼠皮质酮水平随应激时间增长有大幅度变化；除粪便粒数外,模型组母鼠行为学各指标与对照组存在统计学差异（P均<0.05）,母鼠各行为学指标变化与应激时间长短有关系,时间与应激因素之间不存在交互关系（P均>0.05）；模型组母鼠纯水消耗与对照组未发现存在统计学差异,而两组糖水消耗、总液体消耗和1%蔗糖偏爱存在统计学差异（P均<0.05）,表明应激对孕期大鼠液体消耗指标有影响；时间因素有统计学意义（P均<0.05）,母鼠液体消耗变化与应激时间长短有关系；每个时间点的比较：正常对照组和模型组的基线总液体消耗、糖水消耗、纯水消耗、糖水偏爱百分比差异不大,均无统计学意义（P>0.05）。应激第7、14天和21天,模型组大鼠液体消耗各指标与对照组差异均有统计学意义（P<0.05）；模型组所产子鼠只数及孕天数与对照组差异存在统计学意义（P<0.05）,模型子鼠组只数及孕天数均低于对照子鼠组；2)在PND28和PND42时,模型子鼠组体重与对照子鼠组差异具有统计学意义（P<0.05）；模型子鼠组血浆皮质酮与对照子鼠组差异具有统计学意义（P<0.05）; Morris水迷宫实验：模型子鼠组在水迷宫中逃避潜伏期与对照子鼠组比较差异具有统计学意义（P<0.05）,时间因素有统计学意义（P<0.05）,时间与应激因素之间不存在交互关系（P0.05）,模型子鼠组逃避潜伏期时间比对照子鼠组长,且有随时间缩短的趋势；跨平台次数两组间存在统计学差异（P<0.05）;Y迷宫实验：模型子鼠组在Y迷宫试验中学会所需的训练次数、记忆保持测试正确反应率与对照子鼠组比较差异具有统计学意义（P<0.05）；行为学实验：除清洁次数外,模型子鼠组行为学各指标与对照子鼠组存在统计学差异（P<0.05）；液体消耗情况：模型子鼠组与对照子鼠组在液体消耗实验中糖水消耗和1%蔗糖偏爱百分比存在统计学差异（P<0.05）,而在纯水消耗和总液体消耗方面未发现存在统计学差异（P>0.05）。悬尾实验：模型子鼠组与对照子鼠组在悬尾实验中静止时间和挣扎次数均存在统计学差异（P<0.05）；3)子鼠脑海马形态结构改变,超微结构异常；模型子鼠组与对照子鼠组海马胆碱能神经递质ACh含量、ChAT和AChE活性均存在统计学差异（P<0.05）,模型子鼠组ACh含量、ChAT活性下降,AChE活性上升；模型子鼠组与对照子鼠组海马单胺类神经递质NE、DA和5-HT均存在统计学差异（P<0.05）,模型子鼠组三个单胺类神经递质均下降；模型子鼠组与对照子鼠组海马的Glu和GABA均存在统计学差异（P<0.05）,模型子鼠组较对照子鼠组兴奋性神经递质Glu降低、而抑制性GABA含量升高；模型子鼠组与对照子鼠组海马的NO存在统计学差异（P<0.05）,模型子鼠组NO含量降低；4)RT-PCR提示：模型子鼠组与对照子鼠组海马组织的BDNF mRNA、IGF-Ⅱ mRNA和NF-κBmRNA差异均存在统计学意义（P<0.05）,模型子鼠组BDNF mRNA、IGF-Ⅱ mRNA和NF-κB mRNA表达降低,Arc mRNA差异未发现存在统计学意义（P>0.05）。Western Blotting检测发现：模型子鼠组与对照子鼠组海马组织的BDNF、IGF-Ⅱ、Arc和NF-κB蛋白表达差异均存在统计学意义（P<0.05）,与对照子鼠组相比,模型子鼠组BDNF、IGF-Ⅱ、Arc和NF-κB表达降低；5)相关性分析发现：子鼠在水迷宫中的逃避潜伏期和Y迷宫中的训练次数与母鼠皮质酮存在正相关（P<0.05）、与母鼠水平运动、垂直运动和1%蔗糖偏爱存在负相关（P<0.05）；子鼠在水迷宫中的跨平台次数和Y迷宫中的正确反应率与母鼠皮质酮存在负相关（P<0.05）,与水平运动、垂直运动和1%蔗糖偏爱存在负相关（P<0.05）；子鼠在水迷宫中的逃避潜伏期和Y迷宫中的训练次数与子鼠皮质酮、海马中GABA存在正相关（P<0.05）、与子鼠ACh、ChAT、NE、DA、5-HT和NO存在负相关（P<0.05）；子鼠在水迷宫中的跨平台次数和Y迷宫中的正确反应率与子鼠皮质酮、海马中GABA存在负相关（P<0.05）、与子鼠ACh、ChAT、NE、DA、5-HT和NO存在正相关（P<0.05）；除水迷宫中的跨平台次数和Y迷宫中训练次数与IGF-Ⅱ蛋白表达未发现存在相关外（P>0.05）,其他指标均发现存在相关性：子鼠在水迷宫中的逃避潜伏期和Y迷宫中的训练次数均与突触各相关蛋白存在负相关性（P<0.05）；子鼠在水迷宫中的跨平台次数和Y迷宫中的正确反应率与突触各相关蛋白存在负相关性（P<0.05）；6)丰富环境对子鼠体重的影响：模型子鼠组和模型&丰富环境组体重低于对照和对照&丰富环境组子鼠体重。经历了丰富环境后,四组体重存在统计学差异（P<0.05）；丰富环境对子鼠血浆皮质酮水平影响：四组血浆皮质酮同样存在统计学差异（P<0.05）,模型子鼠组分别与其他各组差异存在统计学意义（P<0.05）,对照&丰富环境组子鼠血浆皮质酮最低,而模型子鼠组是最高的；7)丰富环境下子鼠学习记忆能力变化：四组在Morris水迷宫中逃避潜伏期与对照子鼠组差异具有统计学意义（P<0.05）,两丰富环境组逃避潜伏期增长,跨平台次数四组间存在统计学差异（P<0.05）,对照&丰富环境组子鼠跨平台次数最多,而模型子鼠组是最少；四组子鼠在Y迷宫试验中学习、记忆次数比较差异具有统计学意义（P<0.05）,进行丰富环境,学习、记忆能力就会有所提高；四组子鼠在水平运动和垂直运动方面比较差异具有统计学意义（P<0.05）,进行丰富环境,水平运动和垂直运动能力就会有所提高；四组子鼠在纯水消耗、糖水消耗和1%蔗糖偏爱百分比比较差异具有统计学意义（P<0.05）,进行丰富环境,糖水消耗就会有所增加；四组在静止时间和挣扎次数上比较差异具有统计学意义（P<0.05）,模型子鼠组水平静止时间最长、挣扎次数最少,而模型子鼠组只要进行了丰富环境,静止时间就会缩短、挣扎次数增多；8)丰富环境对各组子鼠神经递质影响：四组子鼠在海马组织胆碱能神经递质ACh含量、ChAT和AChE活性,单胺类神经递质NE、DA和5-HT含量及氨基酸类神经递质Glu和GABA含量均存在统计学差异（P<0.05）,丰富环境对其均有影响；四组子鼠在海马组织NO含量方面均存在统计学差异（P<0.05）,丰富环境后,NO含量升高；9)丰富环境对蛋白表达影响：四组子鼠海马组织的BDNF mRNA、 IGF-Ⅱ mRNA和NF-κB mRNA及蛋白表达差异均存在统计学意义（P<0.05）,经过丰富环境后,蛋白表达增高。结论：1)孕期应激可诱发实验母鼠行为、活动习性和生育能力有影响；2)孕期慢性应激致子鼠出现高应激状态,空间、工作学习记忆能力下降,情绪出现类似焦虑、抑郁现象；3)孕期慢性应激影响子鼠学习记忆能力下降与母体及子代血浆中皮质酮升高均有关；4)孕期慢性应激对子鼠学习记忆能力下降与海马组织中枢神经递质变化及BDNF、IGF-Ⅱ、 Arc和NF-κB蛋白表达降低有关；5)丰富环境能改善子鼠的学习记忆能力,使大鼠的活动度增高、对新环境的探究行为和适应能力增高、大鼠快感也有所增加；6)丰富环境提高孕期慢性应激子鼠学习记忆能力、情绪变化与子鼠血浆中皮质酮、子鼠海马中中枢神经递质分泌、海马组织神经营养因子BDNF、IGF-Ⅱ、核转录因子NF-κB、海马中突触可塑性相关蛋白Arc mRNAs和蛋白表达均有所增加有关。
二、Effects of Tiao-Xin-Fang on long-term potentiation in rat hippocampal slices（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Effects of Tiao-Xin-Fang on long-term potentiation in rat hippocampal slices（论文提纲范文）
（1）通络化痰胶囊治疗中风恢复期的临床疗效及对VD大鼠Clathrin介导的NMDAR胞吞动态变化研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 综述一 中风病恢复期中医治疗进展研究 |
| 1 中药治疗 |
| 2 针灸治疗 |
| 3 推拿按摩治疗 |
| 4 运动疗法 |
| 综述二 血管性痴呆中西医发病机制研究进展 |
| 1 血管性痴呆西医发病机制 |
| 2 中医对血管性痴呆病因病机的认识 |
| 参考文献 |
| 第二章 临床研究通络化痰胶囊治疗中风恢复期的临床疗效及对VD大鼠Clathrin介导的NMDAR胞吞动态变化研究 |
| 第一节 资料与方法 |
| 1 病例来源 |
| 2 诊断标准 |
| 3 纳入标准 |
| 4 排除标准 |
| 5 研究设计 |
| 6 治疗方案 |
| 7 观察指标及方法 |
| 8 疗效评价标准 |
| 9 统计学方法 |
| 第二节 研究结果 |
| 1 观察对象入选及完成情况 |
| 2 受试者基本信息 |
| 3 受试者基线生命体征及一般情况 |
| 4 受试者基线合并疾病情况 |
| 5 药品使用情况 |
| 6 基线体格检查情况 |
| 7 基线辅助检查 |
| 8 疗效评价 |
| 9 安全性评价 |
| 第三节 讨论 |
| 1 临床研究完成情况 |
| 2 临床研究治疗方案的设计及实施情况 |
| 3 临床结果讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 实验研究通络化痰胶囊对VD大鼠clathrin介导的NMDA受体作用机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 第二节 结果 |
| 1 行为学实验结果 |
| 2 通络化痰胶囊对VD大鼠海马组织形态学的影响 |
| 3 造模后不同时间点各组大鼠海马组织clathrin、NMDAR1及Rab5b mRNA RT-PCR结果 |
| 4 造模后不同时间点海马组织clathrin、膜蛋白NMDAR1 Western Blot结果 |
| 第三节 讨论 |
| 1 血管性痴呆大鼠行为学特点 |
| 2 组织形态学特点 |
| 3 通络化痰胶囊对脑缺血再灌注早期海马神经元clathrin介导的NMDA受体胞吞过程不同时点的动态变化研究 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1 创新与优势 |
| 2 不足与展望 |
| 附录 |
| 1. 通络化痰胶囊治疗中风病中经络(脑梗塞)恢复期(痰瘀阻络证)临床研究CRF表 |
| 2. 各组大鼠海马CA1区组织形态观察 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）五脏温阳化瘀法调节血管性痴呆大鼠海马突触前膜蛋白表达的实验研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分: 理论探讨 |
| 1 VD研究概述 |
| 1.1 现代医学对VD的认识 |
| 1.1.1 流行病学和危险因素 |
| 1.1.2 病理学特征和病理机制 |
| 1.1.3 临床特征及诊断 |
| 1.1.4 药物治疗 |
| 1.1.5 中药作用于VD的作用机制研究 |
| 1.1.5.1 调节中枢神经递质 |
| 1.1.5.2 增强突触传递效能 |
| 1.1.5.3 改善脑血流代谢 |
| 1.1.5.4 抑制神经蛋白凋亡 |
| 1.1.5.5 抗氧化应激及炎症 |
| 1.2 中医学对VD的认识 |
| 1.2.1 古代医家对痴呆病机的相关认识 |
| 1.2.1.1 痰瘀蓄于内、上及脑窍 |
| 1.2.1.2 阳气亏虚 |
| 1.2.1.3 脏气亏虚 |
| 1.2.1.4 营卫、气血不调 |
| 1.2.1.5 心肾不交 |
| 1.2.1.6 元神失养 |
| 1.2.2 现代医家对VD的认识 |
| 1.2.2.1 病机 |
| 1.2.2.2 辨证论治 |
| 2 唐农教授对VD的学术观点 |
| 2.1 学派传承 |
| 2.2 学术观点 |
| 2.2.1 病证之间具有病机相关性 |
| 2.2.2 扶其真阳为恢复人体内阳外阴本体结构的重要法则 |
| 2.3 唐农教授从阳虚血瘀痰阻论治VD的认识 |
| 2.3.1 对VD病因病机的认识 |
| 2.3.1.1 阳气不足、神机失用为VD的发病之本 |
| 2.3.1.2 阳化不足,瘀血痰浊阻滞脑络为VD的发病之标 |
| 2.3.2 对VD治则的认识 |
| 3 五脏温阳化瘀汤治疗VD的方义及药物解析 |
| 3.1 五脏温阳化瘀汤药物组成 |
| 3.2 五脏温阳化瘀汤方义 |
| 3.3 五脏温阳化瘀汤具体药物解析 |
| 3.4 五脏温阳化瘀汤的运用 |
| 3.5 有毒药物的用量 |
| 3.5.1 炮附子的用量 |
| 3.5.2 法半夏的用量 |
| 第二部分: 实验研究 |
| 实验一 五脏温阳化瘀汤对VD大鼠学习记忆的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验大鼠 |
| 1.2 主要实验试剂 |
| 1.3 主要实验仪器及设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 VD模型制备及分组 |
| 2.2 给药方法及剂量 |
| 2.3 基本生理状况采集 |
| 2.4 Morris水迷宫实验 |
| 2.4.1 定位航行实验 |
| 2.4.2 空间探索实验 |
| 2.5 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 一般情况 |
| 3.2 Morris水迷宫实验结果 |
| 3.2.1 定位航行实验 |
| 3.2.2 空间探索实验 |
| 4 讨论 |
| 4.1 双侧颈总动脉永久性结扎法制备VD大鼠模型 |
| 4.2 五脏温阳化瘀汤对VD模型大鼠学习记忆能力的影响 |
| 实验二: 五脏温阳化瘀汤对VD大鼠海马突触前膜蛋白Syn与GAP-43的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验大鼠 |
| 1.2 实验仪器和试剂 |
| 1.2.1 主要仪器 |
| 1.2.2 主要试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 取材 |
| 2.2 免疫组化染色 |
| 2.3 Western blot实验 |
| 2.3.1 制备蛋白样品 |
| 2.3.2 BCA法测定蛋白浓度 |
| 2.3.3 灌胶及电泳 |
| 2.3.4 转膜及封闭 |
| 2.3.5 一抗及二抗孵育 |
| 2.3.6 显色及凝胶成像系统分析 |
| 2.4 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 各组大鼠海马CA1区突触前膜蛋白Syn、GAP-43免疫组化检测结果 |
| 3.2 各组大鼠海马突触前膜蛋白Syn、GAP-43 Western blot检测结果 |
| 4 讨论 |
| 实验三: 五脏温阳化瘀汤对VD大鼠血清VEGF、BDNF、NGF水平的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验大鼠 |
| 1.2 实验仪器及试剂 |
| 1.2.1 主要仪器 |
| 1.2.2 主要试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 取材 |
| 2.2 ELISA实验 |
| 2.2.1 试剂配置 |
| 2.2.2 操作步骤 |
| 2.3 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 各组大鼠血清VEGF水平的比较 |
| 3.2 各组大鼠血清BDNF、NGF水平的比较 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 科技查新报告 |
| 论文着作 |
（3）基于髓鞘及少突胶质细胞损伤探讨参枝苓口服液对AD的保护作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 综述一“从心论治”阿尔茨海默病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 PI3K/Akt及其相关信号通路在AD中研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 参枝苓口服液对APP~(swe)/PS1~(dE9)双转基因AD模型小鼠认知行为及髓鞘的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 参枝苓口服液对Aβ_(42)致少突胶质细胞OLN-93损伤的保护作用机制 |
| 参考文献 |
| 实验一 UHPLC-MRM-MS/MS方法检测参枝苓口服液含药血清主要化学成分 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 Aβ_(42)损伤少突胶质细胞OLN-93拟AD体外模型的建立 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 参枝苓口服液含药血清及多奈哌齐对OLN-93细胞安全剂量及有效剂量筛选 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 参枝苓口服液含药血清对Aβ_(42)损伤OLN-93细胞髓鞘相关蛋白及PI3K/Akt-mTOR通路的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验五 参枝苓口服液对Aβ_(42)损伤少突胶质细胞OLN-93的乙酰化组蛋白与MBP基因相互作用影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验六 参枝苓口服液对Aβ_(42)损伤少突胶质细胞OLN-93脂质代谢的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 存在问题和不足 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（4）参枝苓口服液对拟SAD小鼠的髓鞘保护作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 综述一 阿尔茨海默病啮齿类动物模型研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 PI3K/Akt-mTOR通路参与髓鞘维护的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 实验一 双侧侧脑室注射STZ拟SAD小鼠模型的AD相关病理变化和髓鞘改变 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1.双侧icv-STZ对拟SAD小鼠模型认知能力影响的时效关系 |
| 2.双侧icv-STZ对拟SAD小鼠造模后4个月Aβ_(42)表达水平的影响 |
| 3.双侧icv-STZ对拟SAD小鼠造模后4个月p-tau蛋白表达水平的影响 |
| 4.双侧icv-STZ对拟SAD小鼠造模后4个月糖代谢相关蛋白的影响 |
| 5.双侧icv-STZ对拟SAD小鼠造模后4个月髓鞘超微结构的影响 |
| 6.双侧icv-STZ对拟SAD小鼠造模后4个月髓鞘相关蛋白的影响 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 参枝苓口服液对拟SAD模型认知能力的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠Morris水迷宫平均潜伏期的影响 |
| 2.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠Morris水迷宫平均游泳距离的影响 |
| 3.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠空间探索和记忆保持能力的影响 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 参枝苓口服液对拟SAD模型髓鞘损伤的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠髓鞘LFB染色的影响 |
| 2.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠髓鞘超微结构的影响 |
| 3.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠g-ratio的影响 |
| 4.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠髓鞘相关糖蛋白(MAG)表达的影响 |
| 5.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠髓鞘碱性蛋白(MBP)表达的影响 |
| 6.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)表达的影响 |
| 7.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠髓鞘蛋白脂质蛋白(PLP)表达的影响 |
| 8.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠MAG、MBP、MOG、PLP mRNA的影响 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验四 参枝苓口服液对拟SAD模型PI3K/Akt-mTOR通路相关蛋白的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠PI3K表达的影响 |
| 2.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠p-PI3K表达的影响 |
| 3.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠Akt表达的影响 |
| 4.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠p-Akt表达的影响 |
| 5.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠mTOR表达的影响 |
| 6.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠p-mTOR表达的影响 |
| 7.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠p-S6K1表达的影响 |
| 8.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠PI3K mRNA的影响 |
| 9.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠Akt mRNA表达的影响 |
| 10.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠mTOR mRNA表达的影响 |
| 11.参枝苓口服液对双侧icv-STZ小鼠S6K mRNA表达的影响 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（5）基于脾胃与肠道菌群的相关性从记忆角度研究“脾藏意”（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 综述一 肠道菌群与精神障碍的研究概述 |
| 综述二 中医脾胃与肠道菌群的相关性研究概述 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二章 文献研究 |
| 第一节 脾藏意的内涵研究 |
| 1.脾的内涵研究 |
| 2.意的心理学内涵研究 |
| 3.脾藏意的生理基础 |
| 4.脾不藏意的病理表现 |
| 5.小结 |
| 第二节 从脾胃论治健忘理论探讨 |
| 1.健忘病名源流及演变 |
| 2.中医对健忘的认识 |
| 3.从中焦论治健忘的理论基础 |
| 4.肠道菌群与健忘 |
| 第三章 实验研究 |
| 第一节 高脂饮食暴露法建立痰湿中阻型aMCI大鼠模型研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 第二节 益生菌管理防治高脂饮食诱发的大鼠痰湿中阻型aMCI作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三节 温胆汤防治高脂饮食诱发的大鼠痰湿中阻型aMCI作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 主要研究成果 |
（6）电针对CUMS诱导的抑郁模型大鼠海马miRNA-16及5-HT再摄取的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 抑郁症的现代研究进展 |
| 1 流行病学现状 |
| 1.1 抑郁症的诊断 |
| 1.2 抑郁症的患病率 |
| 1.3 抑郁症的经济负担 |
| 1.4 抑郁症的危险因素 |
| 2 抑郁症发病机制的研究进展 |
| 2.1 单胺类递质失衡假说 |
| 2.2 神经内分泌紊乱假说 |
| 2.3 神经元和神经可塑性假说 |
| 2.4 脑源性神经营养因子缺乏假说 |
| 2.5 免疫及细胞因子假说 |
| 2.6 相关信号转导通路障碍假说 |
| 2.7 肠脑轴失调假说 |
| 2.8 社会环境及遗传学因素 |
| 3 抑郁症的现代医学治疗研究进展 |
| 3.1 药物治疗 |
| 3.2 心理治疗 |
| 3.3 物理治疗 |
| 3.4 补充替代疗法 |
| 4 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 电针治疗抑郁症的研究进展 |
| 1 传统医学对抑郁症的认识 |
| 2 电针治疗抑郁症的临床疗效研究 |
| 3 电针治疗抑郁症的机制研究 |
| 4 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述三 miRNA在抑郁症研究中的应用与进展 |
| 1 miRNA的产生及生物学特性 |
| 2 miRNA在抑郁症中的发生发展 |
| 3 miRNA潜在靶标与抗抑郁药物 |
| 4 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验研究技术路线图 |
| 实验一 电针对CUMS抑郁模型大鼠行为学的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 糖水偏好试验结果 |
| 2.2 旷场试验结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 动物模型的选择依据 |
| 3.2 干预方法及穴位的选择依据 |
| 3.3 糖水偏好试验的选择依据 |
| 3.4 旷场试验的选择依据 |
| 参考文献 |
| 实验二 电针对抑郁模型大鼠海马神经元的影响 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 电针对抑郁大鼠海马神经元形态结构的影响 |
| 2.2 电针对抑郁大鼠海马神经元尼氏染色的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 海马区的选择依据 |
| 参考文献 |
| 实验三 电针对抑郁模型大鼠海马及血清miRNA-16的影响 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 各组大鼠海马miRNA-16表达水平 |
| 2.2 各组大鼠血清miRNA-16表达水平 |
| 3 讨论 |
| 3.1 miRNA-16的选择依据 |
| 3.2 氟西汀的选择依据 |
| 参考文献 |
| 实验四 基于海马miRNA-16异常表达探讨电针对5-HT及再摄取的影响 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 各组大鼠海马SERT mRNA表达水平 |
| 2.2 各组大鼠海马SERT蛋白表达情况 |
| 2.3 各组大鼠海马5-HT含量水平 |
| 3 线性回归分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 SERT的选择依据 |
| 4.2 5-HT的选择依据 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究小结 |
| 结语 |
| 1 结论 |
| 2 创新点 |
| 3 存在问题与展望 |
| 致谢 |
| 在读期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
| 附录 |
（7）基于突触可塑性与神经炎症研究酸枣仁汤改善睡眠剥夺大鼠学习记忆的机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文名称缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 中医理论研究 |
| 1.中医对失眠病症病名的认识 |
| 2.中医对失眠病症病因病机的认识 |
| 2.1 中医对失眠病症的病因的认识 |
| 2.2 中医对失眠病症病机的认识 |
| 3.中医对学习记忆障碍的认识 |
| 3.1 中医对学习记忆障碍病名的认识 |
| 3.2 中医对学习记忆障碍病位、病因病机的认识 |
| 4.中医对失眠与学习记忆障碍相关性的认识 |
| 4.1 阴血亏虚,神失所养是两者重要的共同病机 |
| 4.2 失眠是引起学习记忆障碍重要的因素 |
| 5.养血安神法是改善睡眠与学习记忆的重要治法 |
| 6.酸枣仁汤方义与临床、实验研究 |
| 6.1 酸枣仁汤的药物组成与方义 |
| 6.2 酸枣仁汤的临床与实验机制研究 |
| 7.酸枣仁汤对学习记忆作用的研究 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验部分 |
| 实验一 酸枣仁汤对睡眠剥夺模型大鼠学习记忆行为学及自主活动的影响 |
| 1.引言 |
| 2.实验材料 |
| 3.实验方法 |
| 4.统计学方法 |
| 5.实验结果 |
| 6.讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 酸枣仁汤对睡眠剥夺模型大鼠海马区突触可塑性的影响 |
| 1.引言 |
| 2.实验材料 |
| 3.实验方法 |
| 4.统计学方法 |
| 5.实验结果 |
| 6.讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 酸枣仁汤对睡眠剥夺模型大鼠海马中炎症因子的的影响 |
| 1.引言 |
| 2.实验材料 |
| 3.实验方法 |
| 4.统计学方法 |
| 5.实验结果 |
| 6.讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 酸枣仁汤对睡眠剥夺模型大鼠海马 NLRP3 炎性小体通路的影响 |
| 1.引言 |
| 2.实验材料 |
| 3.实验方法 |
| 4.统计学方法 |
| 5.实验结果 |
| 6.讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 附录 |
| 附录一 综述 |
| 参考文献 |
| 附录二 博士在读期间参与科研情况 |
| 致谢 |
（8）运动对大鼠空间学习和记忆能力、海马功能蛋白表达量的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 前言 |
| 2 文献综述 |
| 2.1 学习与记忆 |
| 2.1.1 学习与记忆的概念 |
| 2.1.2 海马与学习记忆 |
| 2.1.3 学习记忆与突触可塑性 |
| 2.2 运动对空间学习和记忆能力的影响 |
| 2.2.1 长期不同运动负荷对空间学习和记忆能力的影响 |
| 2.2.2 运动对海马组织结构的影响 |
| 2.2.3 运动对生长因子表达的影响 |
| 2.2.4 运动对空间学习记忆相关蛋白表达的影响 |
| 2.3 小结 |
| 3 材料与方法 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验对象 |
| 3.1.2 实验器材 |
| 3.1.3 实验试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 运动分组 |
| 3.2.2 运动方案 |
| 3.2.3 Morris水迷宫行为学测试 |
| 3.2.4 样本采集 |
| 3.2.5 ELISA检测血睾酮 |
| 3.2.6 HE染色海马组织观察形态结构 |
| 3.2.7 Western Blot检测海马BDNF、TrkB、NCAM、NR2B表达 |
| 3.2.8 数据统计分析 |
| 4 结果 |
| 4.1 体重结果 |
| 4.2 血清睾酮结果 |
| 4.3 Morris水迷宫测试结果 |
| 4.3.1 定位航行实验结果 |
| 4.3.2 空间探索实验结果 |
| 4.4 海马组织HE染色结果 |
| 4.5 大鼠海马BDNF、TrkB、NCAM、NR2B表达结果 |
| 5 分析与讨论 |
| 5.1 大鼠训练效果一般评述 |
| 5.1.1 大鼠体重的变化 |
| 5.1.2 大鼠血清睾酮的变化 |
| 5.1.3 大鼠脂肪代谢的变化 |
| 5.2 运动对大鼠空间学习和记忆能力的影响 |
| 5.3 运动对大鼠海马组织形态结构的影响 |
| 5.4 运动对大鼠海马BDNF、TrkB、NCAM、NR2B的影响 |
| 5.4.1 运动对大鼠海马BDNF-TrkB的影响 |
| 5.4.2 运动对大鼠海马NCAM的影响 |
| 5.4.3 运动对大鼠海马NR2B的影响 |
| 5.5 运动影响空间学习和记忆的机制 |
| 6 结论 |
| 7 本研究的不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录1 |
| 附录2 |
| 附录3 |
（9）加味开心散对AD模型小鼠突触改善作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第1章 理论研究 |
| 1.1 中医理论研究 |
| 1.1.1 中医学对痴呆的认识 |
| 1.1.2 中医对健忘的认识 |
| 1.1.3 痰理论与痴呆 |
| 1.1.4 瘀血与痴呆的关系 |
| 1.1.5 气虚与痴呆的关系 |
| 1.1.6 老年性痴呆与痰虚瘀体质关系 |
| 1.1.7 气虚痰瘀相互作用及益气化痰行瘀防治老年性痴呆的理论探讨 |
| 1.2 阿尔兹海默病研究概况 |
| 1.2.1 阿尔兹海默病现状及其病理特征 |
| 1.2.2 AD的病理机制研究现状及Aβ级联假说的重要性 |
| 1.2.3 Aβ的产生及相关机制研究 |
| 1.2.4 Aβ对突触结构功能的损伤及在AD病理机制研究中的重要地位 |
| 1.2.5 突触可塑性与学习记忆 |
| 1.3 复方开心散组方分析 |
| 1.3.1 开心散原方方义分析及现代研究进展 |
| 1.3.2 开心散加味组方分析及加味药现代药理研究 |
| 第2章 加味开心散改善AD模型小鼠学习记忆功能的机制研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验药品与试剂 |
| 2.1.3 主要实验仪器设备 |
| 2.1.4 实验方法 |
| 2.1.5 数据处理 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 旷场实验结果 |
| 2.2.2 小鼠自主活动影响 |
| 2.2.3 小鼠Morris水迷宫 |
| 2.2.4 开心散加味对突触长时程增强的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 第3章 丹参素对小鼠海马突触传递的影响及丹参素对Aβ 1-42抑制LTP的改善作用研究 |
| 3.1 丹参及丹参素简介 |
| 3.1.1 丹参素对心肌的保护作用 |
| 3.1.2 丹参素抗肿瘤的作用 |
| 3.1.3 丹参素的中枢作用 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验药品与试剂 |
| 3.2.3 实验仪器 |
| 3.2.4 实验方法 |
| 3.2.5 数据处理分析 |
| 3.2.6 实验结果 |
| 3.2.7 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 附件 |
| 致谢 |
（10）孕期慢性应激对子代学习记忆能力影响及其干预的实验研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 孕期慢性应激对大鼠及其子代学习记忆能力影响的研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实贼剂和仪器 |
| 1.3 内容和方法 |
| 1.4 质量控制 |
| 1.5 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分慢性应激对子代大鼠海马神经递质、突触传递性与学习记忆相关性研究 |
| 1 研究对象 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 实验试剂和仪器 |
| 1.3 测定指标及方法 |
| 1.4 质量控制 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 丰富环境对子代大鼠学习记忆能力干预的研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 实验试剂和仪器 |
| 1.3 内容和方法 |
| 1.4 质量控制 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
四、Effects of Tiao-Xin-Fang on long-term potentiation in rat hippocampal slices（论文参考文献）
- [1]通络化痰胶囊治疗中风恢复期的临床疗效及对VD大鼠Clathrin介导的NMDAR胞吞动态变化研究[D]. 张丹丹. 北京中医药大学, 2020(04)
- [2]五脏温阳化瘀法调节血管性痴呆大鼠海马突触前膜蛋白表达的实验研究[D]. 姜梅. 山东中医药大学, 2020(01)
- [3]基于髓鞘及少突胶质细胞损伤探讨参枝苓口服液对AD的保护作用[D]. 刘珍洪. 北京中医药大学, 2020(04)
- [4]参枝苓口服液对拟SAD小鼠的髓鞘保护作用机制研究[D]. 王亚晗. 北京中医药大学, 2020(04)
- [5]基于脾胃与肠道菌群的相关性从记忆角度研究“脾藏意”[D]. 张宁. 北京中医药大学, 2020(04)
- [6]电针对CUMS诱导的抑郁模型大鼠海马miRNA-16及5-HT再摄取的实验研究[D]. 赵俊. 北京中医药大学, 2020(04)
- [7]基于突触可塑性与神经炎症研究酸枣仁汤改善睡眠剥夺大鼠学习记忆的机制[D]. 吴东南. 湖北中医药大学, 2020(08)
- [8]运动对大鼠空间学习和记忆能力、海马功能蛋白表达量的影响[D]. 孙梦雅. 南京体育学院, 2019(02)
- [9]加味开心散对AD模型小鼠突触改善作用的研究[D]. 乔森. 广州中医药大学, 2017(05)
- [10]孕期慢性应激对子代学习记忆能力影响及其干预的实验研究[D]. 关素珍. 新疆医科大学, 2014(02)