一、植入自体雪旺氏细胞的胎儿神经移植修复周围神经缺损的临床研究（论文文献综述）
刘振辉[1]（2021）在《仿生导电人工神经支架的研究》文中研究表明目的:（1）制备具有导电功能的多微通道多壁碳纳米管琼脂糖导电支架,并对其进行表征,验证其生物相容性,利用支架进行细胞三维立体培养,研究电刺激对RSC96细胞生长的影响。（2）制备具有取向性纳米纤维的PLLA纤维膜,并对其进行表征,验证其生物相容性,研究纤维取向性对RSC96细胞信号蛋白的影响。（3）制备仿生导电人工神经支架,将支架植入大鼠坐骨神经缺损,探讨仿生导电人工神经支架对大鼠坐骨神经修复效果和机制。方法:（1）利用梯度冷冻和冷冻干燥技术制备出具有多微通道多壁碳纳米管琼脂糖导电支架。通过微结构、溶胀和脱溶涨、导电率、形状记忆功能、载药及药物释放性能、力学性能和生物相容性对制备的多微通道多壁碳纳米管琼脂糖导电支架进行表征,对三维立体培养的RSC96细胞进行组织学评价,观察不同培养条件下细胞生长行为。（2）利用静电纺丝技术制备出具有取向纳米纤维的PLLA纤维膜。通过扫描电镜、力学性能、降解性和生物相容性对制备的PLLA纤维膜进行表征。利用免疫荧光技术研究纤维取向性对RSC96细胞ERK、P38MAPK、MEK和LRP4蛋白的影响。（3）利用定制的模具制备多微通道导电支架,将第二部分制备的高取向PLLA纤维膜和定制的多微通道导电支架组合成仿生导电人工神经支架,并将神经支架植入到大鼠坐骨神经缺损处。将实验动物分为支架组（S）、支架联合电刺激组（S&E）和自体神经移植组（AT）,通过坐骨神经功能指数、神经电生理检测、肌肉组织学检测、再生神经的组织学检测来分析仿生导电神经支架对周围神经再生的影响。结果:（1）加入的多壁碳纳米管没有影响琼脂糖支架的孔隙组成比和形状记忆功能,但0.025%wt多壁碳纳米管提高了支架在溶胀平衡状态下的溶胀率和保水能力。多壁碳纳米管改变了琼脂糖支架的电导率、载药及药物释放能力和力学性能。高浓度多壁碳纳米管对RSC96细胞和PC12细胞的增殖有一定影响。电镜下PC12细胞在多壁碳纳米管琼脂糖支架上生长状态良好。多壁碳纳米管的加入未改变RSCs细胞的S100β表达量。当电刺激存在时,RSC96细胞层沿支架纵轴排列较好,0.025%MWCNT-琼脂糖支架和0.05%MWCNT-琼脂糖支架表现出更好的细胞黏附性。（2）制备的PLLA纤维膜为多孔结构,纤维大部分为取向排列,高取向纤维膜的纤维取向性更高,其表面光滑,粗细均匀,纤维间形成立体的三维孔隙并分布于整个纤维膜。取向PLLA纤维膜的拉伸强度为（59.06±2.49）MPa,取向PLLA纤维膜的拉伸强度为（56.82±2.80）MPa,两种纤维膜拉伸强度没有统计学差异;取向PLLA纤维膜的杨氏模量为（1037.07±133.30）MPa,高取向PLLA纤维膜的杨氏模量为（971.45±112.39）MPa,两种纤维膜杨氏模量没有统计学差异;取向PLLA纤维膜的断裂伸长率为364.48±53.79,高取向PLLA纤维膜的断裂伸长率为356.89±40.21,两种纤维膜断裂伸长率没有统计学差异。增加PLLA纤维膜的取向,并未明显改变纤维膜的拉伸强度、杨氏模量和断裂延伸率。改变纤维膜的纤维取向程度,对PLLA纤维膜的降解速率没有影响。取向PLLA纤维膜和高取向PLLA纤维膜对RSC96细胞的增殖均没有影响。和取向性纤维膜相比,高取向的PLLA纤维膜上的RSC96细胞呈现出现明显的丝状伪足,沿着排列整齐的纳米纤维延伸。和取向性PLLA纤维膜相比,高取向PLLA纤维增加了RSC96细胞ERK、P38 MAPK、MEK和LRP4蛋白表达量（P<0.01）。（3）制备的仿生导电人工神经支架跟大鼠坐骨神经匹配良好,植入神经缺损出未见异物反应。S&E组坐骨神经功能指数、神经电生理结果、肌肉组织学结果、轴突和髓鞘再生效果接近AT组,好于S组。术后12周时免疫组化结果显示,NF-H蛋白和S00-β蛋白表达,S&E组和AT组的高于S组（P<0.01）,而S&E组接近AT组。LRP4蛋白和P38MAPK蛋白表达,AT组高于S组（P<0.01）,但AT和S&E组,S&E组和S组相比均无差异无统计学意义。ERK蛋白和MEK蛋白表达情况,AT组高于S组和S&E组（P<0.01）,S&E组和S组两者相比差异无统计学意义。结论:（1）多壁碳纳米管琼脂糖支架具有高的孔隙率、一定的形状记忆功能、载药及药物释放能力、导电能力,良好的生物相容性。在电刺激存在时,具有导电性能的多壁碳纳米管琼脂糖支架对RSC96细胞生长具有引导作用。（2）和取向性的PLLA纤维膜相比,高取向性的PLLA纤维膜未改变其力学性能、降解性和生物相容性,但增加了ERK、P38 MAPK、MEK和LRP4蛋白的表达量,能引导RSC96细胞生长和迁移,这有利于其在周围神经再生中的应用。（3）仿生导电人工神经支架联合电刺激能够增强周围神经再生。电刺激可能通过ES通过与MAPK信号通路的激活促进周围神经再生,ERK、P38MAPK、MEK和LRP4可能参与周围神经再生。
辛旺[2]（2020）在《脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经在大鼠坐骨神经缺损修复中的作用》文中指出周围神经损伤是临床外科常见的疾病之一,其治疗及功能恢复长期以来都是临床医生面临的一项重要挑战。目前临床上自体神经移植是周围神经缺损修复的“金标准”,但由于其存在来源受限、牺牲供区次要神经功能等因素其临床应用受到限制,因此人工神经为临床修复提供了一个新思路,成为目前周围神经损伤修复的研究热点。近年来随着组织工程技术的发展,众多的材料被应用于人工神经的制备。蚕丝具有高韧性以及良好的生物相容性,是一种常见的组织工程材料。本课题组前期研究表明利用蚕丝纤维构建的微通道人工神经导管在引导和促进再生神经纤维的生长方面有显着的效果,但是其在体内却难以降解;在随后的研究中发现,在炎症反应中的细胞吞噬作用是其在体内降解的主要因素之一,同时在神经损伤修复早期,适度的炎症反应也有助于促进损伤神经的修复。研究表明,当周围神经组织损伤后,炎症反应随即被触发,损伤处以及远端全长神经纤维发生瓦勒氏变性（Wallerian degeneration,WD）,在此过程中,巨噬细胞吞噬变性的组织碎片,为神经再生扫除障碍,雪旺氏细胞增殖活化形成Büngner带,并且分泌神经营养因子,促进轴突的再生。脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分,其作为一种典型的免疫应答激活剂,可通过激活相应的TLRs信号通路有效刺激巨噬细胞和神经胶质细胞活化,诱导体内的炎症反应。基于以上原因,本研究构建含LPS的蚕丝纤维微通道复合人工神经导管,一方面通过LPS在一定时间内的持续释放,诱导适度的炎症反应,加快大鼠坐骨神经损伤后炎性细胞的募集及瓦勒氏变性过程中轴突和髓鞘碎片的清除;另一方面促进巨噬细胞对蚕丝纤维的吞噬,从而进一步促进蚕丝纤维的体内降解;旨在从免疫学角度,缩短神经损伤后瓦勒氏变性的时间,加快神经再生速度以及改善神经导管的修复效果,为人工神经导管的深入研究以及周围神经的辅助治疗提供新思路。为了探讨LPS的含量对炎性细胞的影响,本研究首先使用不同剂量的LPS对大鼠进行尾静脉注射,利用全自动血细胞分析仪进行血常规检测;随后利用海藻酸钙凝胶为缓释载体,制备了载LPS的蚕丝纤维微通道复合人工神经导管,检测其在周围神经缺损修复中的作用,为此本研究共设计了3种人工神经导管,在大鼠坐骨神经10 mm缺损动物模型中分别进行了4种移植方案,即:自体神经移植组（对照）,熟丝组,凝胶组和LPS组。在移植后的相应时间点分别进行坐骨神经功能指数（SFI）检测、HE染色和免疫荧光染色观察,以此评价3种人工神经导管修复神经缺损的效果,以及在修复过程中炎性细胞的活动;最后,利用实时荧光定量PCR测定损伤修复过程中溶酶体相关基因和炎性细胞因子的表达情况,探讨炎症反应以及蚕丝降解活动在周围神经损伤修复中的变化。实验结果显示:1.大鼠血常规分析结果显示:低剂量（1μg/kg）LPS和中剂量（100μg/kg）LPS均可显着诱导大鼠血液中白细胞增生,而高剂量（10 mg/kg）LPS导致白细胞数减少,提示一定剂量的LPS可诱导大鼠产生适度的炎症反应。2.人工神经体外测试:（1）LPS在神经导管中的体外缓释结果显示:LPS在前7天释放速度较快,而后释放速度逐渐趋于平缓,在第21天时累积释放量为2444.2 EU,释放基本结束,以上结果表明载LPS的蚕丝纤维微通道复合人工神经导管能够在一定程度上对LPS缓慢释放,具有良好的缓释效果。（2）人工神经导管材料与雪旺氏细胞共培养,CCK8测定结果表明:3种人工神经对雪旺氏细胞无明显毒性,并表现出良好的生物相容性。3.人工神经修复效果评价:（1）HE染色观察显示:各组移植体神经纤维再生状况良好,术后第12周,3种人工神经导管内的蚕丝纤维均出现不同程度的降解,其中,LPS组单位面积残余的蚕丝纤维数量最少,表明LPS的添加促进了蚕丝纤维在体内的降解。（2）免疫荧光观察显示:术后第1周,4组移植体近、远端神经组织均被大量巨噬细胞浸润,其中,LPS组巨噬细胞数量显着高于其他移植组;在移植体近、远端均观察到脱髓鞘现象,与近端相比,远端脱髓鞘程度较高,各组中,LPS组残余的轴突和髓鞘碎片最少。术后第12周,各组移植体中均检测到大量的雪旺氏细胞和再生轴突,自体移植组中雪旺氏细胞和再生轴突最多,其余3组中,雪旺氏细胞和再生轴突数量由多至少依次为:LPS组、凝胶组、熟丝组。（3）术后第2、4、12周坐骨神经功能指数（SFI）结果表明,各组SFI随时间的推移逐渐恢复,其中LPS组显着优于其他人工神经组,修复效果最接近自体移植组。4.实时荧光定量PCR结果显示:促炎细胞因子IL-6 mRNA、TNF-αmRNA在神经损伤后第3天开始显着上调,抗炎细胞因子IL-10 mRNA则在神经损伤后第2周开始显着上调,稍晚于促炎细胞因子;在损伤前2周LPS组IL-6 mRNA的相对表达量均显着高于其他组。各移植组溶酶体相关基因的mRNA均在术后不同时期显着上调,其中Ctsd mRNA在第4周显着上调。Hip1r mRNA在第1周开始显着上调,而Plat mRNA在第3天开始显着上调。综上实验结果表明:本研究构建的脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经导管能够诱导适度的炎症反应,加快神经损伤早期瓦勒变性过程中轴突和髓鞘碎片的清除,从而促进坐骨神经的结构重建和功能恢复;另外,LPS的添加对蚕丝纤维在体内的降解也有一定的促进作用。
谭建蓉[3]（2020）在《新型丝素纤维缓释载体神经导管修复大鼠坐骨神经缺损的研究》文中研究说明周围神经损伤是一种常见的临床疾病,对于神经断裂损伤,通常将受损神经末端缝合完成修复;对于长距离的神经缺损,则需要使用神经移植物桥接神经断端,其中自体神经移植依然是临床上神经缺损修复的“金标准”。然而,自体神经移植存在供体神经短缺,使供体部位出现功能障碍等局限性,目前,以天然或者合成材料制成的组织工程神经导管已成为自体神经移植的有效替代物,用于周围神经缺损修复,但其修复效果仍然有待提升。研究表明,采用与自体神经具有相似结构特点的丝素纤维模拟正常神经纤维分布,在神经导管内部设置纵向定向的微通道结构,有利于引导轴突再生。为了进一步提升神经导管的修复效果,本研究在构建丝素纤维微通道的基础上,外源性添加纤连蛋白、神经钙黏蛋白促进雪旺氏细胞的增殖和迁移,以此重建有利于神经再生的微环境。由于蛋白药物普遍存在半衰期短,易失去生物活性等问题,因此通过丝素纤维表面复合海藻酸钙水凝胶构建蛋白药物缓释载体,可保持蛋白药物活性,延长其作用时间。本研究构建了3种新型丝素纤维缓释载体神经导管,即纤连蛋白丝素纤维缓释载体神经导管（FN/SF NC）、神经钙黏蛋白丝素纤维缓释载体神经导管（N-Cad/SF NC）、复合蛋白丝素纤维缓释载体神经导管（FN&N-Cad/SF NC）,为探讨不同神经导管的修复效果,以自体神经移植（Autograft）和单纯丝素纤维神经导管（SF NC）为对照,桥接大鼠坐骨神经10 mm缺损间隙。本文具体研究内容和结果,概括如下:（1）丝素纤维缓释载体的制备和体外表征酶联免疫吸附试验（ELISA）结果显示,丝素纤维缓释载体可以持续10天释放纤连蛋白和神经钙黏蛋白,并且两种蛋白的缓释趋势大致相同,第1天至第2天缓慢释放,第2天至第7天快速释放,其累计释放量呈线性持续增长,第7天至第10天释放速率明显减缓,第10天至第12天累计释放量基本保持平稳,纤连蛋白的最终累计释放量为0.95μg,神经钙黏蛋白为0.92μg;雪旺氏细胞与丝素纤维缓释载体共培养,CCK-8检测结果显示FN/SF、N-Cad/SF、FN&N-Cad/SF均表现出良好的生物相容性,未影响细胞增殖活性,且共培养3天后,FN/SF组、FN&N-Cad/SF组与对照组相比可显着促进雪旺氏细胞的增殖。（2）丝素纤维缓释载体神经导管的修复效果评价神经移植后,对大鼠感觉功能、运动功能进行检测,结果显示,术后12周,FN&N-Cad/SF NC组温觉反应回缩时间与自体移植组相比差异不显着,但显着低于SF NC组、FN/SF NC组、N-Cad/SF NC组;自体移植组SFI数值与FN/SF NC组、N-Cad/SF NC组、FN&N-Cad/SF NC组相比差异不显着,但显着高于SF NC组。腓肠肌湿重率测定与Masson染色结果显示,术后12周,FN&N-Cad/SF NC组与自体移植组相比腓肠肌湿重率差异性不显着,但显着高于SF NC组、FN/SF NC组、N-Cad/SF NC组;自体移植组腓肠肌胶原纤维所占比例显着低于4种神经导管组,但FN/SF NC组、N-Cad/SF NC组、FN&N-Cad/SF NC组显着低于SF NC组。组织学染色、免疫荧光染色结果显示,术后前4周,FN/SF NC组、N-Cad/SF NC组、FN&N-Cad/SF NC组与SF NC组相比,能够显着促进雪旺氏细胞的迁移和增殖;术后12周,FN&N-Cad/SF NC组与SF NC组相比新生轴突数量显着增多,与FN/SF NC组和N-Cad/SF NC组相比差异不显着。（3）丝素纤维缓释载体神经导管修复机制的初步探究术后14天,FN/SF NC组、N-Cad/SF NC组、FN&N-Cad/SF NC组与SF NC组相比可一定程度上调雪旺氏细胞增殖相关基因（Cyclin D1、PCNA）、迁移相关基因（NCAM、Itgb1）以及神经生长因子（NGF）的表达,其中FN&N-Cad/SF NC组效果较为显着;术后21天至30天,各组中各基因的相对表达量恢复到正常水平。综上,本研究制备的3种新型丝素纤维缓释载体神经导管具有良好的载药性和生物相容性,并且与SF NC组相比其修复效果均有所提升,其中FN&N-Cad/SF NC组最佳,与自体移植组相比差异不显着,FN/SF NC组和N-Cad/SF NC组次之,这表明外源性添加纤连蛋白和神经钙黏蛋白可以有效促进雪旺氏细胞的增殖、迁移以及神经生长因子的释放,从而提升神经导管的修复效果。
乔文兰[4]（2019）在《兔牙髓前体细胞复合Myroilysin脱细胞异种神经后神经移植物的生物学特性》文中研究表明背景:周围神经缺损在神经科学中的常见病,其修复是临床治疗的难点。近年来,应用组织工程技术,在体外架构具有良好生物相容性的支架材料用于修复周围神经的损伤已经成为研究热点。将神经修复支架应用于被桥接神经的两断端,可以引导轴突的轴向生长,避免神经瘤的形成,并为神经再生提供相对孤立的微环境。本研究旨在使用Myroilysin酶制备一种新的脱细胞异种神经支架,并在支架上复合具有神经分化潜能的兔牙髓前体细胞,从而获取一种可以促进缺损区域周围神经修复和再生的牙髓前体细胞-脱细胞异种神经复合物神经组织工程复合物。第一部分Myr o i I ys i n 酶法脱细胞异种神经支架的制备与组织结构观察以及机械性能评价目的:应用Myroilysin酶法制作脱细胞异种神经支架,并对支架进行组织结构观察和机械力学评估。方法:获得Wistar大鼠的坐骨神经后,分别用Myroilysin酶和Sondell化学方法对坐骨神经进行脱细胞处理。大体观察脱细胞处理后的神经支架并制作组织切片,光学显微镜下观察HE染色和Masson染色后的支架的脱细胞效果及神经基底膜和胶原结构。通过扫描电子显微镜观察神经支架的表面物理性质。应用Wintest力学测试软件评估支架的一系列机械力学性能指标,如极限载荷、弹性模量、韧度、极限应力、极限应变、断裂功耗等。结果:与Sondell化学处理的神经相比,用Myroilysin酶法处理的神经呈现出显着的膨胀现象。组织学观察可见两种脱细胞神经支架的轴突,细胞,髓鞘结构消失,胶原纤维排列均匀有序,神经基底膜呈波浪状排布。扫描电子显微镜显示,Myroilysin酶法获得的脱细胞神经支架的孔隙和有序排列模式与天然神经更为相似,纵形沟壑状结构更明显。Wintest力学分析表明,Myroilysin酶法脱细胞神经支架的机械力学性能指标与天然神经相比无统计学差异（P>0.05）。结论:Myroilysin酶法与sondell化学法脱细胞效果相似,利用Myroilysin酶法制备神经支架对神经支架机械力学影响小,满足支架植入的力学要求,是值得考虑的一种神经支架材料。第二部分兔牙髓前体细胞的体外培养鉴定和神经方向诱导分化目的:体外培养鉴定牙髓前体细胞,并对获得的细胞进行神经方向诱导分化。方法:获取三月龄纯系新西兰大白兔健康牙髓组织以及12-15岁患者中因正畸需要 除的健康前磨牙牙髓组织。应用Gronthos酶消化法对牙髓组织进行原代培养,对获得人牙髓前体细胞进行流式细胞术检测鉴定间充质干细胞标记物和神经细胞标记物。对获得的兔牙髓前体细胞进行神经方向诱导并对诱导前后的细胞进行免疫荧光染色,并进行相关间充质干细胞标记物和神经细胞标记物qRT-PCR及 Western blotting 检测。结果:体外培养获得了能够高度增殖的细胞,通过流式细胞术检测人牙髓前体细胞为 CD29+,CD106+,CD44+,CD73+,CD90+/CD34-,CD45-,CD271-,CD133-,CD31-,免疫荧光结果显示培养的兔牙髓前体细胞中存在GFAP,MBP,P75和S-100阳性的细胞。兔牙髓前体细胞神经方向诱导后获得的类神经细胞免疫荧光结果显示 GFAP,MBP,P75,S-100 阳性,qRT-PCR 及 Western blotting结果显示神经表面标记GFAP和MBP表达增加。结论:在本研究中体外培养获得的细胞中存在牙髓前体细胞,将牙髓前体细胞神经方向诱导后可以得到神经表面标记物阳性和分泌神经营养因子的类神经细胞;在牙髓前体细胞中存在功能与神经细胞相似的细胞,可以考虑将GFAP,MBP,P75,S-100阳性的牙髓前体细胞应用于牙髓前体细胞-脱细胞异种神经组织工程神经移植复合物。第三部分Myro i I ys i n酶法脱细胞异种神经支架的体内和体外生物学性能评估目的:评估脱细胞异种神经支架的胶原稳定性和体内外生物相容性,将牙髓前体细胞复合在Myroilysin酶法及Sondell化学法脱细胞异种神经支架,探讨脱细胞异种神经支架的体内和体外生物学性能。方法:应用I型胶原酶酶解天然神经,Myroilysin酶法脱细胞神经支架和Sondell化学法脱细胞神经支架,比较三者的降解情况,从而评估其胶原稳定性。制备支架提取液,并将兔牙髓前体细胞与提取液体外共培养,通过流式细胞增殖与凋亡检测和CCK-8细胞增殖试验评估支架的体外细胞相容性。将兔牙髓前体细胞植入到Myroilysin酶法和Sondell化学法脱细胞异种神经支架中,通过EdU试验观察支架上有无增殖期细胞以及细胞的排列分布。使用与支架浸提液共培养的兔牙髓前体细胞,通过qRT-PCR及Western blotting分析支架浸提液对牙髓前体细胞在mRNA和蛋白水平上表达神经表面标记物及神经营养因子的影响。将复合兔牙髓前体细胞和脱细胞异种神经的神经移植物植入三月龄纯系新西兰大白兔坐骨神经缺损模型内,分别于30天,90天后分析兔坐骨神经缺损模型移植后坐骨神经及其支配骨骼肌恢复情况。结果:Myroilysin酶法和Sondell化学法脱细胞神经支架的降解速率与天然神经基本一致;将兔牙髓前体细胞与脱细胞神经浸提液共培养后,Myroilysin酶法脱细胞异种神经浸提液的细胞增殖活性高于单独培养和Sondell组,表现出良好的细胞相容性,但Sondell组细胞增殖速度明显下降,表现出对细胞明显的毒性;Myroilysin酶法脱细胞异种神经支架可使兔牙髓前体细胞粘附其上并呈现较为明显的方向性生长方式,但在Sondell组支架上并没有发现增殖细胞,并且细胞分布散乱。用Myroilysin酶法脱细胞异种神经支架浸提液培养兔牙髓前体细胞后,细胞的神经表面标记物MBP和S-1 00在mRNA水平和蛋白水平出现上调,betaⅢ Tubulin,CD90,NeuN和神经营养因子BDNF及NGF在mRNA水平出现了上调。将复合兔牙髓前体细胞和脱细胞异种神经的神经移植物植入三月龄纯系新西兰大白兔坐骨神经缺损模型内后,30天后EdU检测见Myroilysin复合牙髓前体细胞组S-100阳性增殖期细胞增加,CD31阳性增殖期细胞深入支架内部,90天后Myroilysin复合牙髓前体细胞组复合动作电位幅度和神经传导速度与自体神经移植对照组差异减小（P>0.05）,肌湿重恢复率无明显差异（P>0.05）。结论:在本研究中Myroilysin酶法脱细胞异种神经支架具有与天然神经类似的体外降解率,体外和动物体内细胞相容性良好,可诱导牙髓前体细胞向神经细胞方向的分化。其多孔纵向沟壑状结构和保存完好的周围神经细胞外基质成分可使牙髓前体细胞粘附生长在支架上。将兔牙髓前体细胞-Myroilysin酶法脱细胞异种神经移植复合物植入三月龄纯系新西兰大白兔坐骨神经缺损模型后,修复效果接近自体神经移植。牙髓前体细胞-Myroilysin酶法脱细胞异种神经神经组织工程复合物可以成为修复周围神经缺损的神经移植物新选择。
魏帅[5]（2019）在《股神经分支基膜管修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究》文中研究说明目的:随着社会经济的快速发展,周围神经损伤的发病率也在逐年升高,给患者的生活质量和社会的和谐发展均带来了不利影响。除了可以减张缝合的小段神经缺损之外,自体神经移植仍然是治疗大段周围神经缺损的金标准,但其存在着许多问题,如来源受限、供区的二次损伤等。目前同种异体去细胞神经移植物对于桥接周围神经缺损展现出了其良好的临床应用前景。基膜管是去细胞神经的主要成分,但是不同种类去细胞神经移植物的基膜管是否存在差异,尚未见相关研究报道。本研究探索了大鼠股神经皮支与肌支基膜管的差异,同时观察其去细胞神经移植物在修复大鼠坐骨神经缺损中是否存在作用差异,为临床不同种类神经移植物的选择和3D打印组织工程神经提供一定的参考依据。方法:（1）取健康8周龄雄性SD大鼠的新鲜股神经的皮支与肌支,采用QAR-CAA-67抗体蛋白芯片技术检测股神经皮支和肌支结构蛋白表达情况,获取其差异表达蛋白;同时对其超微结构、组织学染色观察。（2）取SD大鼠股神经及其分支进行化学去细胞处理,对其超微结构、组织学和拉曼光谱特征进行评价。（3）通过动物体内实验,将股神经皮支去细胞神经移植物（Acellular femoral nerve cutaneous branch grafts,CBG）和肌支去细胞神经移植物（Acellular femoral nerve muscular branch grafts,MBG）分别填充于壳聚糖空导管中制作用以桥接大鼠坐骨神经缺损的（15mm）的组织工程去细胞神经移植物。实验动物随机分为4组（n=10）,分别植入CBG（CBG组）、MBG（MBG组）、壳聚糖空管（Hollow chitosan conduit,HCC组）以及自体神经（autologous nerve grafts,ANG组）修复缺损。术后通过步态分析、形态学以及组织学等检测方法评价其修复大鼠坐骨神经缺损的效果。结果:在髓鞘和基膜管（2837nm）厚度方面,股神经肌支均大于皮支;股神经肌支乙酰胆碱酯酶染色阳性部位所占比例较大,而皮支染色阴性部位所占比例较大;基因本体论富集分析显示在细胞成分（cellular component）方面细胞外空间（extracellular space）是高度富集的,更多的相关基因在股神经肌支中表达上调;术后12周,CBG组、MBG组以及ANG组的步态分析、腓肠肌肌肉湿重恢复率及病理学观察等检测的结果优于HCC组,CBG组和MBG组结果相似,组间无统计学差异,但两组结果均略差于ANG组,且具有统计学差异。结论:感觉神经（皮支）来源和运动神经（肌支）来源的神经移植物虽然在成分和基底膜结构上存在差异,但是其体内修复效果相似。3D打印神经移植物时必须考虑到其内部神经基膜管的厚度（2837nm）和三维空间取向性结构。
王宇强[6]（2019）在《透明质酸水凝胶缓释雪旺细胞外泌体修复坐骨神经长节段缺损的实验研究》文中指出目的:（1）体外分离新生SD大鼠雪旺细胞并培养,超速离心法提取雪旺细胞分泌的外泌体并进行特异性蛋白鉴定。透射电镜观察雪旺细胞外泌体的粒径和分布。（2）研究雪旺细胞外泌体对神经元及雪旺细胞的生物学作用。观察和研究透明质酸凝胶缓释外泌体的生物学特征参数。（3）探讨透明质酸水凝胶包裹缓释雪旺细胞外泌体填充PCL神经导管修复大鼠坐骨神经长节段缺损的形态学和功能学效果。方法:（1）采用0.1%Ⅳ型胶原酶消化法提取原代大鼠雪旺细胞,并采用DMEM/F12完全培养基培养和纯化。采用S100和Sox10进行纯度鉴定。采用CCK-8试剂盒对雪旺细胞的增殖状态进行检测。采用超高速离心法提取雪旺细胞分泌的外泌体,利用BCA试剂盒检测外泌体中蛋白的含量。Western blot法对雪旺细胞分泌外泌体表面标志物CD63、TSG101、CD9、Rab5和Na+/K+ATP酶进行鉴定。（2）构建1%浓度的透明质酸水凝胶,并将雪旺细胞外泌体进行包裹。体外放置于PBS中采用BCA试剂盒检测外泌体的缓释曲线。应用雪旺细胞外泌体干预雪旺细胞和神经元,CCK-8试剂盒检测外泌体对雪旺细胞的增殖作用,以及对两种细胞生物活性蛋白分泌的作用。ELISA法检测培养第1、3、5天后,外泌体干预的雪旺细胞表达神经生长因子（NGF）、脑源性神经生长因子（BDNF）、髓鞘零蛋白（P0）、细胞极性蛋白Par-3的水平。同时ELISA法检测外泌体干预后第1、3、5天时神经元中生长相关蛋白43（Growth-associatedprotein-43,GAP-43）、神经丝蛋白-200（Neurofilament-200,NF-200）、βIII–Tubulin的表达水平。（3）静电纺丝制备PCL神经导管,并采用扫描电镜观察导管的大体形态及显微结构,测量纤维丝的直径。采用小量程的力学仪器检测PCL神经导管的的杨氏模量、最大应力、最大载荷、最大断裂张力等力学参数。采用透明质酸水凝胶包裹雪旺细胞外泌体填充PCL神经导管,制备15mm长节段大鼠坐骨神经缺损,并进行端端吻合。采用单纯透明质酸填充PCL导管作为对照组,自体神经移植组也进行对照。在术后4、8、12周时检测大鼠坐骨神经指数、再生神经电生理功能。荧光金逆行示踪检测大鼠神经元胞体的存活情况及神经再生的情况。透射电镜观察三组再生神经的有髓轴突的直径、有髓轴突的数量、再生轴突的面积。NF-200和S100对各组再生神经的免疫荧光染色,观察期神经结构再生情况。HE染色观察三组大鼠腓肠肌肌纤维直径的差异。结果:（1）雪旺细胞在光镜下可以看到呈梭型,体积不大,存在双极,细胞核在中间,比较明显,有折光性。细胞多呈纵行排列的形态。雪旺细胞在接种2小时后,贴壁的比率约为23.5%,6小时时的贴壁比率增加到47.9%,而在12小时的时候有88.9%的细胞贴壁,在16小时以后细胞贴壁的比率均高于99%。在培养3天时,雪旺细胞数量较最初增长了3.9倍,而培养7天时增长了11.4倍。S-100和Sox-10双标荧光染色对雪旺细胞鉴定的纯度为97%。外泌体粒径主要分布在100-160 nm之间,本研究测得的外泌体的平均直径在125 nm。Western blot检测显示外泌体特异性蛋白CD63、TSG101、CD9在本研究所提取的雪旺细胞外泌体中均有表达,而非外泌体表达蛋白Rab5和Na+/K+ATP酶则未见表达。（2）外泌体在透明质酸凝胶中前3天释放比率较大,第一天释放比率为34%,第三天达到41%,随着时间的延长,释放逐渐缓慢。在第4、5、6、8、16、32天时的累积释放比率为43%、47%、51%、53%、75%、90%,而在第64天时候检测得出累积释放率为99%,几乎完全释放。对照组轴突数量为35.4±4.3,而外泌体刺激组为126.3±14.4（P<0.05）。在轴突生长长度方面,外泌体组的平均长度长达（1563.0±132.5）μm,显着高于对照组的（864.3±77.4）μm（P<0.05）。外泌体干预组雪旺细胞在培养后的第3、5、7天时细胞增殖水平均显着高于对照组（P<0.05）。外泌体刺激后的雪旺细胞分泌NGF、BDNF、髓鞘零蛋白（P0）、细胞极性蛋白Par-3的水平在培养后第3天和第5天较第1天时均显着升高,而第5天的表达量也均显着高于第3天的水平（P<0.05）。外泌体刺激后的DRG神经元细胞分泌的标志性蛋白进行检测,结果发现GAP-43、NF-200、βIII–Tubulin的水平在培养后第3天和第5天较第1天时均显着升高,而第5天的表达量也均显着高于第3天的水平（P<0.05）。（3）PCL神经导管的内孔直径为1500μm左右,而管壁的厚度约为500μm,表面纤维丝均匀分布,纤维丝平均直径为4.9μm。PCL神经导管孔隙率为（89.7±2.6）%、最大应力为（7.5±0.6）MPa、杨氏模量为（22.4±2.1）MPa、最大断裂张力为（596.4±33.8）%、最大载荷为（5.6±0.8）N,符合神经再生要求。术后第4、8、12周时PCL/HA-EXO组大鼠的再生神经有髓轴突的直径、有髓轴突的数量、再生轴突的面积显着高于PCL/HA组,而G-ratio值则显着低于PCL/HA组（P<0.05）。而三个时间点中,PCL/HA-EXO的有髓轴突的数量、再生轴突的面积和G-ratio值均与自体神经移植组差异无统计学意义（P>0.05）。术后12周时可见PCL/HA-EXO组大鼠轴突沿着导管顺行生长,有明显的方向性。并且神经轴突及雪旺细胞的表达显着高于PCL/HA组,与自体神经移植组差异不明显。各组大鼠术后随着时间的延长,复合肌动作电位幅度、神经传导速度及潜伏期均有所改善,但PCL/HA-EXO组和自体神经组较PCL/HA组改善更为明显,术后4、8、12周三个时间点均显着高于PCL/HA组（P<0.05）。在术后第8周时,PCL/HA-EXO组和自体神经移植组的神经传导速度及潜伏期均无显着性差异,而复合肌动作电位仍存在一些差异（P<0.05）。而术后12周时,三个指标则在PCL/HA-EXO组和自体神经移植组中无统计学差异（P>0.05）。PCL/HA-EXO组和自体神经移植组的SFI指数在术后三个时间点均显着高于PCL/HA组（P<0.05）,并且在术后第8,12周时PCL/HA-EXO组和自体神经移植组的SFI指数相似,无统计学差异（P>0.05）。术后12周PCL/HA-EXO组和自体神经移植组的腓肠肌纤维直径分别为（68.4±6.2）μm和（72.3±7.6）μm,显着高于PCL/HA组（P<0.05）,而PCL/HA-EXO组和自体神经移植组则无统计学差异（P>0.05）。结论:（1）本研究成功分离提取了新生SD大鼠雪旺细胞,纯度高,满足后续实验要求。采用超速离心法加超滤法能够成功提取雪旺细胞分泌的外泌体,经鉴定是雪旺细胞分泌的外泌体,纯度较高。（2）透明质酸水凝胶能够有效的包裹和缓释雪旺细胞分泌的外泌体,其缓释曲线与体内雪旺细胞增殖迁移及神经轴突再生的时间相似,能够更好的在体内应用。雪旺细胞分泌的外泌体能够有效的促进雪旺细胞增殖,促进雪旺细胞和神经元特异性蛋白分泌,能够较好的促进神经再生。（3）PCL/HA-EXO神经导管能够有效的促进大鼠长节段神经缺损的运动功能康复及组织学及电生理学明显改善。
亚穆罕默德·阿力克[7]（2019）在《仿生多通道人工神经导管的研究》文中研究指明目的:（1）研究采用高分辨显微断层扫描（Micro-CT）扫描获取新西兰大白兔坐骨神经三维结构的最佳实验条件。（2）以兔坐骨神经为“原型”,设计可引导神经组织内部各神经束准确支配远端靶神经纤维的多通道神经导管数字化模型。以PLGA及明胶为原材料制备仿生多通道神经导管,评价多通道导管物理及生物性能。（3）将制备的仿生多通道神经导管植入新西兰大白兔坐骨神经缺损处,探讨定制化的仿生多通道组织工程神经导管对新西兰大白兔坐骨神经缺损修复的作用机制。方法:（1）取成年新西兰大白兔中段坐骨神经组织标本10mm,A、B组分别用20%、40%Lugol’s液对神经标本染色,光学显微镜及Micro-CT下分别采集两组标本在1-3天染色过程中,每1天时间点的显像变化。将显像良好的Micro-CT图像序列导入三维重建软件（Mimics）软件,通过三维重建图形实现兔坐骨神经显微三维结构的可视化。（2）取6只成年新西兰大白兔中段坐骨神经25mm标本,采用Micro-CT扫描及H&E色切片染法获得神经各束解剖学数据,对上述两种图像从神经束的数量、面积、是否存在神经束之间融合或分离现象等方面进行对比观察。依据神经组织H&E染色切片及Micro-CT图像,采用Adobe Photoshop软件设计4组具有多组通道结构神经导管数字模型。采用静电纺丝、冷冻干燥、3D打印等技术构建4种通道类型的PLGA/明胶微孔神经导管。通过观察其外貌特征,吸水膨胀实验、热收缩及力学性能测量等实验进行导管物理属性评价,细胞增殖实验及酶降解实验被用于评价导管生物学属性。（3）将仿生多通道神经导管植入新西兰大白兔中段坐骨神经10mm缺损模型。以自体神经移植及单通道（1-CANC）神经导管作为对照组,通过组织学切片观察、肌电生理检测、逆向荧光示踪等实验探讨仿生神经导管定制化的多通道结构对周围神经轴突再生的作用。结果:（1）A组神经标本在染色3天、B组标本在染色2天可经Micro-CT扫描获得较为清晰的神经显微三维结构的图像。Micro-CT图像显示新西兰大白兔坐骨神经中各神经束立体行径相对固定,生成的数字化三维模型可在任意横断面实现坐骨神经内部显微结构可视化观察。（2）新西兰大白兔坐骨神经中段具有11±1个呈不规则排列的神经束,Micro-CT扫描提示坐骨神经中段25mm各神经束之间无明显的融合或分离现象。采用Adobe Photoshop软件测量CANC导管通道和神经束匹配指数（MI）得出:3-CANC组最高（84.4%）,4-CANC组最低（51.4%）,2-CANC和3-CANC组MI分别为75.5%、77.1%。实验结果表明:制备的CANC导管具有一致的外貌、孔隙率、热收缩性能特征;吸水膨胀方面:1-CANC导管组与2-,3-,4-CANC组相比,其吸水后管腔横截面积更易于减小（p<0.05）;侧方应力实验中1-通道导管抗压强度最高,4-CANC较2-CANC组可承受更高的侧方压力（p<0.05）;抗弯曲实验显示:4-CANC抗弯强度高于3-CANC和2-CANC（p<0.05）;体外降解实验显示:与PLGA生物膜相比1-、4-CANC神经导管具有较快的降解速率;细胞增殖实验显示:附着于PLGA/明胶导管组Schwann细胞数量多余于PLGA生物膜组（p<0.05）,CANC导管组组间Schwann细胞数量无差异（p>0.05）。（3）在植入兔坐骨神经缺损模型术后第12、24周观察发现,自体神经移植组在组织学观察、电生理检测及（感觉、运动）功能恢复方面效果优于所有神经导管植入组（p<0.01）。有髓神经纤维计数结果显示:各CANC神经导管组之间有髓神经纤维数量无差异。但（2-CANC、3-CANC组）相对（1-CANC和4-CANC组）,在电镜下观察到了直径更大且髓鞘更厚的成熟神经轴突组织。类似的对比结果也出现在肌电生理检测、自噬行为及运动功能评定实验。逆行荧光示踪实验结果显示,CANC导管组中各组被荧光标记的神经元计数无统计学差异（p>0.05）,而其中被FB-NY双标记神经元比例最高的是1-CANC组（7.1%±2.4%）,4-CANC组最低（2.2%±1.2%）,结果具有显着差异（p<0.05）。结论:（1）采用20%Lugol’s液染色3天或40%Lugol’s液染色2天后的神经标本经Micro-CT扫描可获得较为清晰的显微三维图像。生成的三维重建模型可作为设计三维仿生人工神经导管重要参考依据。（2）Micro-CT扫描可准确、清晰的连续观察新西兰大白兔坐骨神经中段显微三维结构,联合3D打印模具、冷冻干燥及静电纺丝等技术可制备出简易的以兔坐骨神经解剖结构为“原型”的仿生多通道神经导管。上述方法制备的多通道仿生PLGA/明胶神经导管具有较好的生物属性和物理机械性能,可满足人工神经导管植入于动物前期实验研究要求。（3）仿生数字化人工神经的多通道结构参数对神经组织修复再生过程具有显着影响。高度仿生的神经导管多通道结构具有降低神经轴突发生错配的作用。导管通道与神经束匹配指数（MI）可能可作为研究定制化多通道神经导管仿生程度的一项评价指标。定制化的仿生神经导管多通道结构（管腔直径大小、管腔分布位置等）与修复靶神经中相应神经束解剖结构越相似,多通道神经导管MI指数越高其修复效果可能越好。
王丹[8]（2018）在《周围神经缺损修复中炎症反应的研究》文中研究表明周围神经缺损的修复是神经外科长期的难题,常需神经移植修复。由于受到神经组织高度分化,周围神经纤维再生速度缓慢等方面的影响,周围神经损伤后的修复效果并不理想。近年来,有研究发现周围神经损伤后的炎症反应对周围神经缺损的修复也有重要影响。炎症细胞的活动和炎症因子（inflammatory factor,IF）的表达是炎症反应（inflammation）的主要表现形式。在周围神经缺损修复中,炎症反应是不可避免的一个过程,适度的炎症反应有利于促进周围神经缺损修复。探讨周围神经缺损修复中炎症反应的规律,有益于周围神经缺损修复的研究。组织工程学的发展使细胞移植技术治疗神经损伤成为近年研究的热点。成纤维细胞能够分泌胶原以及纤维连接蛋白和其他基质蛋白,为神经再生提供前期支持,同时引导雪旺氏细胞的迁移聚集和神经纤维的生长。目前,成纤维细胞在组织工程学中主要被应用于皮肤的修复。海藻酸钠和贝壳粉是生物学可降解材料,其组织相容性良好、可降解、有一定生物力学性质,广泛运用在人工神经材料中。可见,将贝壳基质-海藻酸钙填充在人工神经中,有利于种子细胞在人工神经内的存活生长。因此,为了探究移植成纤维细胞的人工神经导管在大鼠坐骨神经损伤修复中的作用,以及在修复过程中相关炎症细胞的活动、炎症因子和神经相关因子的表达规律。本文以大鼠坐骨神经（Sciatic nerve,SN）,自体移植（Autograft,Aut）,自体神经端端吻合（End-to-end nerve anastomosis,ENA）为对照组,用纤维素和聚乳酸为材料制备了3种人工神经为实验组,即神经导管组（Nerve conduit,NC）、贝壳基质-海藻酸钙水凝胶人工神经组（Nerve conduit with shell matrix and calcium alginate hydrogel,HC）、成纤维细胞贝壳基质-海藻酸钙水凝胶人工神经组（Nerve conduit with shell matrix and calcium alginate hydrogel and fibroblasts,FHC）,把上述3种人工神经桥接在大鼠坐骨神经10mm缺损区,在一系列时间点进行取材,采用HE染色以及免疫荧光染色进行观察,探讨炎症细胞在周围损伤修复中的活动,再利用荧光定量PCR测定周围神经缺损修复过程中炎症因子和神经修复相关细胞因子的表达情况。由此,探讨炎症反应在周围神经损伤修复中的变化,为周围神损伤修复的后续研究提供依据。在炎症反应中,涂片HE染色结果显示:在人工神经移植后的第3天、7天、14天、30天,3组人工神经中白细胞比例随着时间的推后逐渐减少。成纤维细胞组（FHC）中白细胞的比例低于导管组（NC）和水凝胶组（HC）,说明炎症反应强度逐渐减弱,且成纤维细胞组（FHC）炎症反应较另两组更微弱。荧光定量PCR检测结果显示,促炎因子IL-1、IL-6和TNF-α在术后第7天相对表达量较高;抑炎因子IL-4、IL-10在术后第14天相对表达量较高,但炎症因子在第21天至第30天逐渐降低,且成纤维细胞组（FHC）炎症因子相对表达量低于另两组人工神经。就3种人工神经修复效果而言,石蜡切片HE染色结果显示:在人工神经移植后的14天,与导管组（NC）和水凝胶组（HC）相比,成纤维细胞组（FHC）近端和管壁的细胞更多更紧密排列,说明细胞更活跃,周围神经损伤后修复活动更显着。透射电子显微镜观察显示:在人工神经移植后的21天,神经损伤均出现了不同程度恢复,髓鞘正在形成并逐步包裹新生轴突,与导管组（NC）和水凝胶组（HC）相比,成纤维细胞组（FHC）的髓鞘层次更为明显,修复效果更好。冰冻切片免疫荧光观察显示:在人工神经移植后150天,成纤维细胞组（FHC）中新生轴突和雪旺氏细胞的数量高于水凝胶组（HC）,且导管组（NC）最低。说明,在术后第150天,成纤维细胞组（FHC）已经基本完成周围神经损伤的修复,而水凝胶组（HC）和导管组（NC）尚未完成,但水凝胶组的修复效果较导管组更好。综上,移植成纤维细胞后可以相对改善大鼠缺损坐骨神经内炎症微环境,进而有利于坐骨神经缺损的修复。
王亚玲[9]（2016）在《复合丝素蛋白神经导管的制备及周围神经缺损的修复研究》文中研究说明周围神经损伤是临床上常见的病症,其修复与再生是神经科学领域的研究热点。当损伤距离较短时,周围神经能自我修复,但是长距离缺损,必须借助神经移植物才能完成修复。作为“金标准”的自体神经移植存在来源匮乏、供体与损伤神经尺寸不匹配等不足,因此寻求合适的人工神经移植物,引导、促进神经再生,加快功能重建是科研人员努力的目标。理想的人工神经移植物必须具备良好的生物相容性和与植入组织匹配的力学性能。大量研究表明蚕丝的丝素蛋白具有良好的生物相容性,但蚕丝在脱胶过程中力学性能大幅度下降。为构建符合要求的人工神经移植物,本课题以天然蚕丝为基本原料,将传统的编织法与静电纺丝法相结合,制备兼具良好生物相容性和力学性能的具有复合结构的丝素蛋白神经导管（CSF-NGCs）,对导管进行生物安全性评价,并将其用于修复大鼠10 mm坐骨神经缺损,通过一系列方法评价其修复效果。主要研究内容和结论如下:利用静电纺丝法制备CSF-NGCs的内层和外层,借助扫描电子显微镜（SEM）研究了溶液浓度、电压、推进速度对静电纺纳米纤维形貌和尺寸的影响,筛选出最优工艺参数为:溶液浓度:18%,电压:21 kV,推进速度:0.2 mL/h。用自改装的编织机编织丝素纤维网,通过改变携纱器的运转速度和编织物向上提拉速度,获得具有不同编织角和编织密度的丝素网。测试所制备导管的拉伸性能、抗手术缝合线强度以及抗压性能,分析了编织角、编织密度对三种力学性能的影响。通过比较最终用于后续实验的CSF-NGCs拉伸时最大荷重为16.3 N,将导管拉破时拉力与2倍管壁厚度的比值Fpull-out/2t值是3.5N/mm,抗压试验中形变50%时对应的荷重达2.1 N,各项指标都与文献报道结果相当,同时明显优于单纯静电纺丝素导管。后续缝合术和体内试验证实了这一点。根据实验操作要求与力学性能测试结果,确定编织最佳工艺参数为:携纱器运行速度:3.6 rpm,编织物上提速度:4.5 cm/min。测定CSF-NGCs的壁厚、表面形貌、孔隙率、吸水性、通透性,结果表明CSF-NGCs具有三维多孔纳米结构,吸水性、渗透性良好。对CSF-NGCs进行体外模拟降解,分析了降解过程中丝素力学性能、蛋白结构、质量等的变化,结果表明CSF-NGCs在体外蛋白酶XIV溶液中可降解。通过静电纺丝法制备了静电纺丝素纳米纤维膜,将膜与雪旺氏细胞及背根神经节共培养,培养3天和5天时拍照,并进行扫描电镜和免疫荧光染色观察,MTT法检测细胞活力,同时用实时PCR检测雪旺氏细胞BDNF和NGF mRNA的表达及释放情况。结果表明静电纺丝素纳米纤维膜与周围神经组织、细胞具有良好的生物相容性,为神经导管的构建及体内研究奠定了基础。按照GB/T 16886规定的方法,通过遗传实验（包括Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞（PCE）微核试验、小鼠精子畸变实验）、体外细胞毒性实验、皮内实验、迟发型超敏反应试验、皮下植入局部反应试验、急性全身毒性实验对所制备的CSF-NGCs进行了生物安全性评价,结果表明CSF-NGCs无遗传毒性和细胞毒性、对皮肤无刺激性和潜在致敏性、无急性全身毒性作用,生物相容性好,可生物降解,符合GB/T 16886关于医疗器械生物学评价的相关标准。将制备的CSF-NGCs用于桥接SD大鼠坐骨神经10 mm缺损（导管组）,另设自体组和缺损组。术后1、3、6个月,以Catwalk步态仪检测、分析其运动功能的恢复情况;术后3、6个月行热痛觉测定、运用光镜观察靶肌形态并利用图像分析系统进行计量分析;术后6个月进行电生理检测,对再生神经进行免疫组化染色,运用光镜和电镜技术观察再生神经形貌并进行统计分析。结果:移植术后,随着时间推移,导管组和自体组各方面功能都在逐步恢复,自体组恢复较快,导管组恢复较慢,3个月时两组间存在较大差异,但术后6个月,所有检测项目结果与自体组的差异都不具统计学意义,而与缺损组间差异显着。术后6个月具体数据:（1）自体组、导管组、缺损组步态规律指数RI分别为:85%、79%、29%（95%以上为正常）,坐骨神经功能指数SFI分别为-55、-58、-85（0为完全恢复,-100为完全损伤）;（2）用爪痛测试仪记录大鼠热痛阈潜伏期,非术侧、自体组、导管组平均潜伏期分别为7.78 s、9.15 s、10.23 s,缺损组大鼠脚基本不动,所以时间都超过设定值20.1 s;（3）电生理检测:自体组、导管组的腓肠肌复合肌动作电位（CMAP）波幅分别相当于非术侧的72.7%和65.3%,导管组、自体组和非术侧的神经传导速度分别为28.10±4.03 m/s、35.57±3.49 m/s和50.00±3.18 m/s,缺损组未记录到CMAP;（4）自体组、导管组、缺损组腓肠肌湿重比分别为0.64、0.57、0.18,肌纤维平均横截面积分别相当于非术侧的82.9%、74.8%、9.8%;（5）免疫组化结果显示导管组和自体组的轴突排布都比较乱,直径也较非术侧小,缺损组只有极少量神经纤维;（6）电镜观察结果:导管组和自体组的有髓神经纤维都比较紧密,虽然髓鞘厚度不及非术侧,但有完整的基底膜。非术侧、自体组、导管组髓鞘厚度分别为:1.38?m、0.78?m、0.65?m,神经纤维直径分别为2.31?m、1.62?m、1.51?m,缺损组几乎无有髓神经。综上所述,各实验结果表明术后6个月,导管组大鼠运动功能、感觉功能都恢复良好,修复效果和自体组相当。本课题的研究工作为制备人工神经导管提供了新思路,新方法,相关结果为新制备导管在组织工程领域的进一步研究与应用提供了理论基础和依据。
游华建[10]（2016）在《蚕丝微通道人工神经修复大鼠坐骨神经缺损》文中研究说明周围神经缺损是修复重建外科的常见疾病。对于神经断裂的修复,可以直接进行手术缝合。对于较长距离的神经缺损的修复,则必须要在断端间用神经移植体进行“桥接”。目前,自体神经移植能够达到最佳的修复效果,但其供体神经来源有限,并会导致供区功能障碍,因而其临床应用受到很大限制;异体神经移植除了上述问题外还面临免疫排斥反应等问题,由此可见,通过自体和异体神经移植修复周围神经缺损,在临床应用上都受到不同程度的限制。所以,采用组织工程方法修复周围神经缺损是解决这一难题的出路。目前,人工神经一般具有两种基本形态,即,中空的成管状结构的神经导管（Nerve conduit）和内部具有填充物的神经支架（Nerve scaffold）,人们设计神经导管的初衷是为轴突再生提供一个相对封闭的微环境。使用神经支架的目的可能在于让填充物为轴突再生起到一定的引导作用。对于神经导管的结构,目前主要的学术观点认为,需要在神经导管管壁预设一些孔隙,以便于神经再生过程中的物质交换。与此同时,也有观点表明,这些孔隙会对轴突的再生起到负面影响。现有研究中,在神经支架中所使用的填充物,从形态的角度讲,大多是无序的。也有在神经支架内部预设微通道的研究报道,但是这些微通道的数量不超过30个,直径为70-300μm。这些微通道在数量和直径的设置方面具有一定的盲目性,因为,如果这些微通道是为坐骨神经的分支所准备的,那么其数量应该在3个左右,如果是为单根轴突生长预留的,那么微通道的数量应该不少于5000个,因为据本课题组观察,大鼠坐骨神经横断面的轴突数量在5000根左右。基于以上原因,在本研究中设计了2种神经导管,即管壁具有和不具有孔隙的导管。在本实验所采用的神经支架中,我们预设了不少于5000个的微通道。其主要目的在于探讨在神经导管管壁预设孔隙是否必要,以及数量众多的微通道是否对轴突的再生有益。蚕丝是本研究中所使用的主要材料,为此,本文还开展了蚕丝的结构和体内、外降解性质的研究。本文以大鼠坐骨神经10 mm缺损为动物模型,分别进行了5种神经移植方案,即,自体神经移植组（Autograft,对照）,微通道管壁有孔组（Microchannl+Silk）,微通道管壁无孔组（Microchannl+PLA+Silk）,内部不具有微通道结构外周为管壁具有微孔的神经导管组（Silk）和内部不具有微通道结构外周为管壁不具有微孔的神经导管组（PLA+Silk）。移植后,在系列时间点进行行为学检测,组织学观察。在神经移植后,行为学检测结果表明,温觉反应和静态坐骨神经指数（SSI）,微通道管壁无孔组的修复效果与自体神经移植相近,且显着优于其余3组。腓肠肌湿重分析显示,在神经移植后的前4周,各组实验侧腓肠肌均有不同程度的萎缩现象。其中,自体移植组的萎缩程度最轻微,微通道管壁无孔组的萎缩程度显着轻微于其余3组。在移植后第20周时发现,自体移植组腓肠肌湿重率为83.16%为本实验中腓肠肌湿重率恢复最好组,与自体移植组相比较,微通道无孔组优于微通道有孔组优于不含微通道无孔组优于不含微通道有孔组。免疫荧光观察显示,在神经移植后的第1、2、3、4周,在5个手术组中,在移植体部位,均观察到了大量的成纤维细胞和巨噬细胞。在神经移植后第20周,在各移植体中,自体神经移植体中含有的轴突和雪旺氏细胞数量最多,在其余四组中,上述2种细胞在移植体中的数量由多至少的顺序依次为,微通道无孔组、不含微通道无孔组、不含微通道有孔组和微通道有孔组。成纤维细胞在5种移植体中的数量,不含微通道有孔组多于不含微通道无孔组,其余3组中,未观察到成纤维细胞。蚕丝降解实验结果提示,蚕丝体外降解的实质是水解作用,酶的作用并不显着。蚕丝在体内的降解不是一个匀速的过程,其降解进程应该与细胞的动员有关。在本研究中所开展的大鼠坐骨神经移植实验结果提示,在神经导管管壁预设孔隙,对大鼠坐骨神经的10 mm缺失修复有负面作用。在人工神经内部预设微通道,对大鼠坐骨神经的10 mm缺失修复有积极意义。在4种人工神经种,内部具有微通道,管壁无微米级孔隙的人工神经的修复效果最好,有望较好的修复周围神经缺损,是一种潜在的适用于周围神经缺损修复的人工神经。
二、植入自体雪旺氏细胞的胎儿神经移植修复周围神经缺损的临床研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、植入自体雪旺氏细胞的胎儿神经移植修复周围神经缺损的临床研究（论文提纲范文）
（1）仿生导电人工神经支架的研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一部分 多微通道导电神经支架的设计和制备及物理性能和生物相容性能检测评价 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 实验对象及主要试剂 |
| 1.3 实验分组及方法 |
| 1.4 统计方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 聚左旋乳酸取向性纤维膜及其生物相容性的研究 |
| 1 研究方法与内容 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 实验对象及主要试剂 |
| 1.3 实验分组及方法 |
| 1.4 统计方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 仿生导电人工神经支架修复大鼠坐骨神经缺损的研究 |
| 1 研究方法与内容 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 实验对象和主要试剂 |
| 1.3 实验分组和方法 |
| 2 结果 |
| 3.讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 周围神经损伤修复的细胞和分子机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（2）脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经在大鼠坐骨神经缺损修复中的作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 周围神经损伤 |
| 1.1.1 周围神经系统概述 |
| 1.1.2 周围神经损伤的原因和分类 |
| 1.2 周围神经损伤修复的原理 |
| 1.2.1 周围神经损伤后轴突及雪旺氏细胞的活动 |
| 1.2.2 周围神经损伤后炎性细胞及因子的活动 |
| 1.3 周围神经损伤修复的方法 |
| 1.3.1 端端吻合修复 |
| 1.3.2 自体神经移植和异体神经移植修复 |
| 1.3.3 人工神经修复 |
| 1.4 蚕丝在组织工程领域的应用 |
| 1.5 脂多糖的作用机制以及在神经损伤修复中的应用 |
| 1.6 研究目的与意义 |
| 1.6.1 研究背景 |
| 1.6.2 研究内容 |
| 1.6.3 拟解决的关键科学问题 |
| 1.6.4 本研究的创新点 |
| 第2章 脂多糖对炎性细胞的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器及实验用品 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 动物分组与LPS处理 |
| 2.2.2 统计学分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经的制备与手术移植 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器及实验用品 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经的制备 |
| 3.2.2 脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经形态结构观察 |
| 3.2.3 脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经细胞毒性测试 |
| 3.2.4 脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经的缓释性质考察 |
| 3.2.5 动物分组及人工神经手术移植 |
| 3.2.6 统计学分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经的形态 |
| 3.3.2 雪旺氏细胞的培养与鉴定 |
| 3.3.3 CCK-8细胞毒性测试结果 |
| 3.3.4 脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经的缓释效果 |
| 3.3.5 人工神经的手术移植 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经修复大鼠坐骨神经缺损神经再生与功能重建的评价 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器及实验用品 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 大体及术部形态学观察 |
| 4.2.2 冰冻切片免疫荧光染色观察 |
| 4.2.3 石蜡切片HE染色观察 |
| 4.2.4 坐骨神经功能评估 |
| 4.2.5 统计学分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 大体及术部形态学观察 |
| 4.3.2 免疫荧光染色观察 |
| 4.3.3 HE染色观察 |
| 4.3.4 坐骨神经功能指数 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经移植对大鼠坐骨神经炎性因子及溶酶体相关基因表达的探究 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 实验动物 |
| 5.1.2 主要试剂 |
| 5.1.3 主要仪器及实验用品 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 总RNA提取 |
| 5.2.2 RNA反转录合成c DNA |
| 5.2.3 实时荧光定量PCR |
| 5.2.4 统计学分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 炎性细胞因子在周围神经缺损修复中的表达 |
| 5.3.2 溶酶体相关基因mRNA在周围神经缺损修复中的表达 |
| 5.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在校期间科研实践情况 |
（3）新型丝素纤维缓释载体神经导管修复大鼠坐骨神经缺损的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 周围神经损伤修复的研究 |
| 1.1.1 周围神经系统组成 |
| 1.1.2 周围神经损伤以及修复过程 |
| 1.2 周围神经损伤后微环境与相关细胞的相互作用 |
| 1.2.1 雪旺氏细胞 |
| 1.2.2 纤连蛋白 |
| 1.2.3 神经钙黏蛋白 |
| 1.3 组织工程神经导管概述 |
| 1.3.1 蚕丝材料 |
| 1.3.2 内部支架结构 |
| 1.3.3 缓释载体构建 |
| 1.4 研究意义及内容 |
| 1.4.1 研究意义 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 1.4.3 本研究的创新点 |
| 第2章 丝素纤维缓释载体的制备和体外表征 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 实验仪器及用品 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 蚕丝结构观察 |
| 2.2.2 纤连蛋白、神经钙黏蛋白样品活性检测 |
| 2.2.3 丝素纤维缓释载体的制备及形貌观察 |
| 2.2.4 丝素纤维缓释载体蛋白负载情况观察 |
| 2.2.5 丝素纤维缓释载体缓释情况检测 |
| 2.2.6 丝素纤维缓释载体生物相容检测 |
| 2.2.7 统计学分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 蚕丝结构观察 |
| 2.3.2 纤连蛋白、神经钙黏蛋白活性检测 |
| 2.3.3 丝素纤维缓释载体的形貌观察 |
| 2.3.4 丝素纤维缓释载体蛋白负载情况观察 |
| 2.3.5 丝素纤维缓释载体缓释情况检测 |
| 2.3.6 雪旺氏细胞的鉴定 |
| 2.3.7 丝素纤维缓释载体生物相容性检测 |
| 2.3.8 丝素纤维缓释载体上细胞生长情况观察 |
| 2.4 讨论 |
| 第3章 丝素纤维缓释载体神经导管的制备及应用 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要试剂及用品 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 丝素纤维缓释载体神经导管的制备 |
| 3.2.2 动物手术情况 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 丝素纤维缓释载体神经导管形貌观察 |
| 3.3.2 动物手术情况 |
| 3.4 讨论 |
| 第4章 丝素纤维缓释载体神经导管修复效果评价 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 实验试剂 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 术后移植物形貌观察 |
| 4.2.2 术后感觉功能检测 |
| 4.2.3 术后运动功能检测 |
| 4.2.4 腓肠肌湿重率测定与Masson染色 |
| 4.2.5 组织学染色 |
| 4.2.6 免疫荧光染色 |
| 4.2.7 统计学分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 术后移植物形貌观察 |
| 4.3.2 术后感觉功能检测 |
| 4.3.3 术后运动功能检测 |
| 4.3.4 腓肠肌湿重测定与Masson染色 |
| 4.3.5 组织学染色观察 |
| 4.3.6 免疫荧光染色观察 |
| 4.4 讨论 |
| 第5章 丝素纤维缓释载体神经导管修复机制的初步探究 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 实验动物 |
| 5.1.2 实验试剂及仪器 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 引物设计与筛选 |
| 5.2.2 总RNA提取 |
| 5.2.3 cDNA模板合成 |
| 5.2.4 反转录产物特异性检测 |
| 5.2.5 实时荧光定量PCR |
| 5.2.6 统计学分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 细胞增殖基因相对表达量检测 |
| 5.3.2 细胞迁移基因相对表达量检测 |
| 5.3.3 神经生长因子相对表达量检测 |
| 5.4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在校期间科研实践情况 |
（4）兔牙髓前体细胞复合Myroilysin脱细胞异种神经后神经移植物的生物学特性（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语表 |
| 前言 |
| 第一部分 Myroilysin酶法脱细胞异种神经支架的制备,结构观察以及机械性能评价 |
| 材料和方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 统计分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 兔牙髓前体细胞的体外培养鉴定和神经方向诱导分化 |
| 材料和方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 统计学分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分 Myroilysin酶法脱细胞异种神经支架的体内和体外生物学性能评估 |
| 材料和方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 统计分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 全文总结 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
| 学位论文评阅及答辨情况表 |
| 外文论文 |
（5）股神经分支基膜管修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验器材与试剂 |
| 1.3 实验设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 大鼠股神经及其分支的获取 |
| 2.2 应用蛋白芯片检测股神经分支差异蛋白的表达 |
| 2.3 使用透射电镜对股神经分支基底膜和髓鞘的超微结构进行观察 |
| 2.4 对神经进行化学去细胞处理 |
| 2.5 组织学评价 |
| 2.6 DNA含量测定 |
| 2.7 使用扫描电子显微镜对股神经分支的表面微观结构进行观察 |
| 2.8 拉曼光谱分析 |
| 2.9 两种神经移植物的构建 |
| 2.10 大鼠坐骨神经缺损动物模型的建立 |
| 2.11 坐骨神经功能恢复评价 |
| 2.12 再生坐骨神经的组织学评价 |
| 2.13 坐骨神经靶器官的组织学评价 |
| 2.14 技术路线图 |
| 3 统计学分析 |
| 结果 |
| 1 大鼠股神经的获取 |
| 2 差异表达蛋白的获取及生物信息学分析 |
| 3 蛋白芯片验证的免疫荧光验证 |
| 4 股神经组织学及超微结构评价 |
| 5 去细胞股神经分支的评价 |
| 6 坐骨神经功能恢复评价 |
| 7 再生坐骨神经的组织学评价 |
| 8 运动靶器官(腓肠肌)的组织学评价 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 石河子大学硕士研究生学位论文 |
（6）透明质酸水凝胶缓释雪旺细胞外泌体修复坐骨神经长节段缺损的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、外泌体的分离与鉴定 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 主要材料与试剂 |
| 1.1.2 主要仪器和设备 |
| 1.1.3 主要试剂配置方法 |
| 1.1.4 实验方法 |
| 1.1.5 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 雪旺细胞的形态 |
| 1.2.2 雪旺细胞在体外的贴壁和增殖活性 |
| 1.2.3 雪旺细胞体外培养纯度鉴定 |
| 1.2.4 雪旺细胞分泌的外泌体的形态和粒径鉴定 |
| 1.2.5 雪旺细胞分泌的外泌体表面标志物的鉴定 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、外泌体的体外生物学功能及体外缓释研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要材料与试剂 |
| 2.1.2 主要仪器和设备 |
| 2.1.3 主要试剂配置方法 |
| 2.1.4 实验方法 |
| 2.1.5 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 透明质酸水凝胶包裹雪旺细胞外泌体及体外缓释曲线 |
| 2.2.2 雪旺细胞外泌体促进DRG组织轴突生长 |
| 2.2.3 雪旺细胞外泌体对雪旺细胞增殖的影响 |
| 2.2.4 雪旺细胞外泌体对雪旺细胞生物活性物质表达的影响 |
| 2.2.5 雪旺细胞外泌体对DRG神经元的生物活性物质表达影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、雪旺细胞外泌体促进大鼠长节段坐骨神经缺损修复 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 主要材料和试剂 |
| 3.1.2 主要仪器和设备 |
| 3.1.3 实验动物及分组 |
| 3.1.4 实验方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 扫描电镜观察电纺PCL导管大体及微细结构 |
| 3.2.2 静电纺丝PCL神经导管的力学参数和孔隙率 |
| 3.2.3 雪旺细胞外泌体促进神经轴突再生 |
| 3.2.4 NF-200和S100 对各组再生神经的免疫荧光染色 |
| 3.2.5 三组大鼠坐骨神经电生理参数比较 |
| 3.2.6 三组大鼠坐骨神经指数比较 |
| 3.2.7 三组大鼠荧光金逆行示踪 |
| 3.2.8 三组大鼠腓肠肌HE染色分析 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 附录 |
| 综述 外周神经损伤修复的材料与治疗进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）仿生多通道人工神经导管的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 兔坐骨神经显微三维结构的获取与重建 |
| 1.研究内容与方法 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 实验动物及主要试剂 |
| 1.3 实验分组及方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.小结 |
| 第二部分 多通道导管的模型设计及制备及物理性能及生物相容性能检测评价 |
| 1.内容与方法 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 实验动物及主要试剂 |
| 1.3 相关液体配置 |
| 1.4 实验分组与方法 |
| 1.5 检测指标 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.小结 |
| 第三部分 多通道人工神经导管修复兔坐骨神经的实验研究 |
| 1.研究内容与方法 |
| 1.1 相关试剂 |
| 1.2 相关设备 |
| 1.3 实验动物及分组 |
| 1.4 观察及检测指标 |
| 1.5 统计方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（8）周围神经缺损修复中炎症反应的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 周围神经缺损修复 |
| 1.1.1 周围神经损伤修复原理 |
| 1.1.2 周围神经缺损修复的研究现状 |
| 1.2 成纤维细胞 |
| 1.2.1 成纤维细胞与炎症反应的关系 |
| 1.3 炎症反应 |
| 1.3.1 炎症细胞 |
| 1.3.2 炎症因子 |
| 1.4 神经修复相关细胞因子 |
| 1.4.1 神经生长因子 |
| 1.4.2 神经中丝蛋白 |
| 1.5 周围神经损伤修复评估和聚合酶链式反应 |
| 1.5.1 周围神经损伤效果评估 |
| 1.5.2 聚合酶链式反应 |
| 第2章 引言 |
| 2.1 研究背景 |
| 2.2 研究内容 |
| 2.3 拟解决的关键科学问题 |
| 2.4 本研究的创新点 |
| 第3章 成纤维细胞的培养与鉴定 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 试剂 |
| 3.1.3 主要仪器及实验用品 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 成纤维细胞的原代培养 |
| 3.2.2 成纤维细胞的传代培养 |
| 3.2.3 成纤维细胞的爬片的制备 |
| 3.2.4 成纤维细胞爬片的免疫荧光鉴定 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 人工神经的制备和神经移植手术 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 试剂 |
| 4.1.3 主要仪器及实验用品 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 纤维素-聚乳酸人工神经的制备 |
| 4.2.2 贝壳基质-海藻酸钙颗粒的制备 |
| 4.2.3 成纤维细胞贝壳基质-海藻酸钙水凝胶的准备 |
| 4.2.4 移植体的准备 |
| 4.2.5 移植体的移植手术 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 纤维素-聚乳酸人工神经外形观察 |
| 4.3.2 贝壳基质-海藻酸钙颗粒观察 |
| 4.3.3 移植体的移植 |
| 4.3.4 移植体的外形观察 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第5章 成纤维细胞移植对大鼠缺损坐骨神经修复及炎症细胞活动的研究 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 实验动物 |
| 5.1.2 试剂 |
| 5.1.3 主要仪器及实验用品 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 冰冻切片免疫荧光染色观察方法 |
| 5.2.2 石蜡切片方法 |
| 5.2.3 组织涂片荧光染色观察方法 |
| 5.2.4 组织涂片he染色观察方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 涂片he染色观察 |
| 5.3.2 涂片免疫荧光染色观察 |
| 5.3.3 石蜡切片he染色观察 |
| 5.3.4 冰冻切片免疫荧光染色观察 |
| 5.3.5 透射电子显微镜观察 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第6章 炎症因子以及神经相关因子表达量的检测 |
| 6.1 材料 |
| 6.1.1 实验动物 |
| 6.1.2 试剂 |
| 6.1.3 主要仪器及实验用品 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 荧光定量pcr方法 |
| 6.2.2 pcr性别鉴定 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 pcr性别鉴定 |
| 6.3.2 炎症因子荧光定量pcr |
| 6.3.3 神经相关因子荧光定量pcr |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 第7章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 研究生在读期间的科研活动与成果 |
（9）复合丝素蛋白神经导管的制备及周围神经缺损的修复研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 周围神经损伤的修复方法 |
| 1.1.1 直接缝合术 |
| 1.1.2 纤维蛋白胶粘合 |
| 1.1.3 神经移植物 |
| 1.1.4 神经导管 |
| 1.2 制备神经导管的生物材料 |
| 1.2.1 非降解材料 |
| 1.2.2 天然材料 |
| 1.2.3 可降解的合成材料 |
| 1.2.4 复合材料 |
| 1.3 制备神经导管的方法及设计进展 |
| 1.3.1 制备导管的方法 |
| 1.3.2 导管设计进展 |
| 1.4 本课题研究目的、意义与内容 |
| 1.4.1 课题研究目的与意义 |
| 1.4.2 课题研究内容 |
| 参考文献 |
| 第二章 丝纤维增强三维多孔神经导管的制备与性能 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与方法 |
| 2.2.1 实验试剂及材料 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.3 复合丝素蛋白神经导管的制备与性能表征 |
| 2.3.1 复合丝素蛋白神经导管的制备 |
| 2.3.2 复合丝素蛋白神经导管的结构表征 |
| 2.3.3 复合丝素蛋白神经导管的力学性能测试 |
| 2.3.4 红外光谱分析 |
| 2.3.5 体外降解性[34-36] |
| 2.3.6 吸水性的测定 |
| 2.3.7 通透性检测 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 静电纺丝条件对纳米纤维的影响 |
| 2.4.2 丝素纤维网编织成型 |
| 2.4.3 复合丝素蛋白神经导管的形貌结构 |
| 2.4.4 复合丝素蛋白神经导管力学性能分析 |
| 2.4.5 红外光谱分析 |
| 2.4.6 复合丝素蛋白神经导管的体外降解 |
| 2.4.7 复合丝素蛋白神经导管的通透性 |
| 2.5 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 静电纺丝素纳米纤维膜与雪旺氏细胞共培养的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 试剂配制 |
| 3.2.4 实验主要仪器 |
| 3.2.5 静电纺丝素纳米纤维膜的制备 |
| 3.2.6 静电纺丝素纳米纤维膜生物相容性的初步研究 |
| 3.2.6.1 雪旺氏细胞的分离与纯化 |
| 3.2.6.2 雪旺氏细胞与静电纺丝素纳米纤维膜共培养 |
| 3.2.6.3 静电纺丝素纳米纤维膜上雪旺氏细胞的形貌观察 |
| 3.2.6.4 MTT 检测细胞活力 |
| 3.2.6.5 实时定量PCR |
| 3.2.6.6 酶联免疫吸附法检测 |
| 3.2.6.7 静电纺丝素纳米纤维膜与大鼠背根神经节（DRG）共培养 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 静电纺丝素纳米纤维膜 |
| 3.3.2 雪旺氏细胞的纯化 |
| 3.3.3 静电纺丝素纳米纤维膜与雪旺氏细胞共培养 |
| 3.3.4 静电纺丝素纳米纤维膜与背根神经节共培养 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 复合丝素蛋白神经导管的生物安全性评价 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与方法 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 复合丝素蛋白神经导管浸提液的准备 |
| 4.2.3 复合丝素蛋白神经导管的体外细胞培养 |
| 4.2.4 溶血实验 |
| 4.2.5 Ames试验 |
| 4.2.6 小鼠骨髓嗜多染红细胞（PCE）微核试验 |
| 4.2.7 小鼠精子畸变实验 |
| 4.2.8 皮下植入局部反应 |
| 4.2.9 皮内反应实验 |
| 4.2.10 迟发型超敏反应试验 |
| 4.2.11 急性全身毒性实验 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 体外细胞培养 |
| 4.3.2 溶血试验 |
| 4.3.3 Ames试验 |
| 4.3.4 小鼠骨髓嗜多染红细胞（PCE）微核实验 |
| 4.3.5 小鼠精子畸变实验 |
| 4.3.6 皮下植入实验 |
| 4.3.7 皮内反应实验 |
| 4.3.8 迟发型超敏反应试验 |
| 4.3.9 急性全身毒性实验 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 体外细胞毒性实验 |
| 4.4.2 遗传毒性作用 |
| 4.4.3 皮下植入局部反应试验 |
| 4.4.4 皮内刺激 |
| 4.4.5 迟发型超敏反应试验 |
| 4.4.6 急性全身毒性实验 |
| 4.5 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 复合丝素蛋白神经导管修复大鼠坐骨神经缺损的研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料和方法 |
| 5.2.1 实验动物与分组 |
| 5.2.2 实验材料 |
| 5.2.3 实验抗体及试剂 |
| 5.2.4 试剂配制 |
| 5.2.5 实验仪器 |
| 5.2.6 动物损伤模型制备 |
| 5.2.7 Catwalk步态分析 |
| 5.2.8 足底热痛域检测 |
| 5.2.9 电生理学检测 |
| 5.2.10 组织学与形态计量分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 一般观察 |
| 5.3.2 步态分析 |
| 5.3.3 热痛阈测定 |
| 5.3.4 电生理 |
| 5.3.5 腓肠肌形态观察及计量 |
| 5.3.6 再生神经形态学分析 |
| 5.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第六章 总结与展望 |
| 6.1 本文主要工作和结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 不足与展望 |
| 致谢 |
| 附录: 作者在攻读博士学位期间的成果 |
（10）蚕丝微通道人工神经修复大鼠坐骨神经缺损（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 文献综述 |
| 1.1 周围神经系统的结构和组成 |
| 1.2 周围神经损伤的原因和类型及损伤后的表现 |
| 1.3 周围神经的微环境和相关细胞的作用 |
| 1.3.1 雪旺氏细胞 |
| 1.3.2 成纤维细胞 |
| 1.3.3 巨噬细胞 |
| 1.4 周围神经损伤的修复 |
| 1.4.1 直接缝合修复 |
| 1.4.2 自体神经或异体神经移植 |
| 1.4.3 人工神经对于周围神经缺损的修复 |
| 1.5 蚕丝在组织工程中的应用 |
| 1.6 微通道在周围神经修复中的应用 |
| 2 引言 |
| 2.1 研究背景 |
| 2.2 研究内容 |
| 2.3 拟解决的关键科学问题 |
| 2.4 本研究的创新点 |
| 3 蚕丝的结构和降解 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验材料和仪器 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 结果与讨论 |
| 3.2.1 天然蚕丝的形态与结构 |
| 3.2.2 蚕丝的体外降解 |
| 3.2.3 蚕丝的体内降解 |
| 3.3 小结 |
| 4 神经导管的制备与神经移植手术 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 实验用品及器械 |
| 4.1.3 方法 |
| 4.2 结果与讨论 |
| 4.3 小结 |
| 5 行为学检测 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.2 感觉功能检测 |
| 5.1.3 运动功能检测 |
| 5.2 结果与讨论 |
| 5.3 小结 |
| 6 形态学观察 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 实验用品及仪器 |
| 6.1.2 腓肠肌湿重的测定 |
| 6.1.3 石蜡切片，H?E染色观察 |
| 6.1.4 冰冻切片免疫荧光染色观察 |
| 6.2 结果与讨论 |
| 6.3 小结 |
| 7 结论 |
| 8 参考文献 |
| 致谢 |
| 研究生在读期间的科研活动与成果 |
四、植入自体雪旺氏细胞的胎儿神经移植修复周围神经缺损的临床研究（论文参考文献）
- [1]仿生导电人工神经支架的研究[D]. 刘振辉. 新疆医科大学, 2021(08)
- [2]脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经在大鼠坐骨神经缺损修复中的作用[D]. 辛旺. 西南大学, 2020(01)
- [3]新型丝素纤维缓释载体神经导管修复大鼠坐骨神经缺损的研究[D]. 谭建蓉. 西南大学, 2020(01)
- [4]兔牙髓前体细胞复合Myroilysin脱细胞异种神经后神经移植物的生物学特性[D]. 乔文兰. 山东大学, 2019(02)
- [5]股神经分支基膜管修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究[D]. 魏帅. 石河子大学, 2019(01)
- [6]透明质酸水凝胶缓释雪旺细胞外泌体修复坐骨神经长节段缺损的实验研究[D]. 王宇强. 天津医科大学, 2019(02)
- [7]仿生多通道人工神经导管的研究[D]. 亚穆罕默德·阿力克. 新疆医科大学, 2019(01)
- [8]周围神经缺损修复中炎症反应的研究[D]. 王丹. 西南大学, 2018(05)
- [9]复合丝素蛋白神经导管的制备及周围神经缺损的修复研究[D]. 王亚玲. 江南大学, 2016(02)
- [10]蚕丝微通道人工神经修复大鼠坐骨神经缺损[D]. 游华建. 西南大学, 2016(02)