一、龟分枝杆菌脓肿亚种药物敏感性及耐药性（论文文献综述）
陈越[1]（2021）在《云南省部分地区HIV相关NTM病的病原学及其生物特性研究》文中指出目的:收集到疑似HIV/NTM非结核分枝杆菌（Nontuberculous mycobacteria,NTM）双重感染样本共64株,分别来自云南省保山市、德宏傣族景颇族自治州、大理白族自治州。通过对临床双感菌株进行一系列实验,包括生理生化和基因测序鉴定、MIRU-VNTR基因分型和多态性分析、药物敏感实验等,以了解云南省部分地区非结核分枝杆菌菌种分布、优势菌种鉴定、耐药情况,为溯源致病菌的研究和临床预防与诊治提供参考及帮助。方法:1.将样本接种于对硝基苯甲酸（PNB）和噻吩2-羧酸肼（TCH）两种鉴别培养基后观察细菌生长情况,对临床分离株做初步菌种鉴定。同时,进行抗酸染色,观察染色阳性菌株。选取16S r RNA、hsp65、rpo B三种引物对初筛后的样本进行聚合酶链反应（PCR）扩增后测序,结果在NCBI的BLAST中进行序列比对,从而进行菌种鉴定。2.对优势菌群鸟分枝杆菌使用MIRU-VNTR方法做基因分型和多态性研究。选取15个位点,使用PCR和琼脂糖凝胶电泳得到条带。运用Quantity One软件计算目的条带大小,通过公式计算重复次数并保存数据。将以上数据及菌株分离地导入Bionumerics6.6软件中,使用UPGM功能制作聚类分析图和MAT功能生成最小树状图。最后,计算每个位点的分辨率,可获得分辨率最高的位点,淘汰分辨率最低的位点。3.对分枝杆菌进行链霉素（SM）、异烟肼（INH）、乙胺丁醇（EMB）、卡那霉素（K）、利福布丁（RBU）的药物敏感性分析。使用比例法逐步稀释菌液后,选取合适的高稀释度和低稀释度菌悬液分别接种于以上5种药敏培养基和对照培养基中。置于36℃±1℃的温箱培养4周后读取结果。结果:1.样本经鉴定后得到鸟分枝杆菌16株、胞内分枝杆菌11株、戈登氏菌7株、马赛分枝杆菌4株、三重分枝杆菌4株、鼻疽诺卡菌3株、结核分枝杆菌2株、龟分枝杆菌1株、脓肿分枝杆菌1株、M.paraintracellulare 1株。鸟分枝杆菌数量最多,为优势菌群。2.本次实验鉴定出的鸟分枝杆菌合并本课题组2019年鉴定保存的菌株共23株,做聚类分析图可知,23株鸟分枝杆菌分为3个基因群,A群占比60.9%（14/23）,B群占比26.1%（6/23）、C群占比13%（3/23）。保山与德宏地区分为A群基因,大理州大理市、洱源县、剑川县、永平县分为B群基因,大理州宾川县3株菌分为C群基因。最小树状图结果,云南部分地区鸟分枝杆菌与日本菌株之间存在显着差异,云南部分地区菌株与葡萄牙菌株也存在差异但不如日本地区显着。15个位点中,分辨率最高的是MATR-3位点0.714,分辨率最低的为MATR-6位点0.143。3.药敏结果显示,16株鸟分枝杆菌除对利福布丁不耐药,对异烟肼、乙胺丁醇、卡那霉素、链霉素耐药。结论:1.云南省保市、德宏傣族景颇族自治州、大理白族自治州与HIV相关的非结核分枝杆菌主要分离株为鸟分枝杆菌,可作为优势菌群。2.运用MIRU-VNTR法计算鸟分枝杆菌的基因多态性,MATR-3位点分辨率最高,除MATR-6位点分辨率低外,其他14个位点可以作为鉴定该地区鸟分枝杆菌的位点。云南省部分地区的鸟分枝杆菌基因分型与葡萄牙和日本两国存在较大差异。3.16株鸟分枝杆菌对利福布丁敏感率较高,但对于异烟肼、乙胺丁醇、卡那霉素、链霉素耐药。药敏结果显示,治疗双感鸟分枝杆菌疾病,利福布丁更具有优势。
李远春[2]（2021）在《鸟—胞内分枝杆菌复合群的亚种鉴定和药敏特征以及耐药表型与基因型相关性研究》文中研究指明目的1、了解鸟-胞内分枝杆菌复合群（MAC）在非结核分枝杆菌（NTM）肺病患者中的分离情况,了解MAC的亚种构成;2、初步了解我国MAC肺病常用治疗药物的耐药情况,探索MAC肺病治疗的潜在有效药物,分析MAC亚种间耐药谱是否存在差异;3、阐述鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌的遗传多态性,了解鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌临床分离株的成簇情况,探索鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌的耐药表型与数目可变串联重复序列（VNTR）基因型之间的关系。方法1、收集深圳市第三人民医院2018年1月至2018年12月经对硝基苯甲酸（PNB）选择培养基初步鉴定为NTM的临床分离株,菌株来源于疑似肺结核（TB）和NTM肺病患者的呼吸道标本,应用16S r RNA单基因测序鉴定NTM各菌种,应用16S r RNA、rpo B、hsp65和ITS多靶位联合基因测序法鉴定MAC亚种。2、应用肉汤微量稀释法检测MAC对常用治疗药物和潜在抗菌有效药物的最低抑菌浓度。其中MAC肺病常用治疗药物包括了2020年美国胸科协会/美国传染病学会/欧洲呼吸学会/欧洲临床微生物与感染性疾病学会联合发布的《NTM病诊疗指南》和美国临床和实验室标准协会出版的《NTM体外药敏试验指南》推荐的药物:克拉霉素、乙胺丁醇、利福平、利福布汀、阿米卡星、链霉素、利奈唑胺和莫西沙星共计8种;潜在抗菌药物参照TB选择了2种三代氟喹诺酮类药物（左氧氟沙星和环丙沙星）以及3种抗TB新药（贝达喹啉、氯法齐明和德拉马尼）。总计13种药物。3、应用VNTR基因分型方法分别对鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌进行15位点和16位点的基因分型,统计分析鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌的基因多态性与成簇情况,探索成簇菌株与非成簇菌株在耐药表型上的差异。结果1、MAC在NTM中的分离情况:PNB选择培养基初步鉴定为NTM的373株菌株,经16S r RNA单基因测序进一步鉴定,确定NTM为371株,结核分枝杆菌2株,PNB选择培养基鉴定NTM的假阳性率为0.54%（2/373）。NTM中慢生分枝杆菌以MAC为主,分离出176株,分离率为47.44%,快生分枝杆菌中以脓肿分枝杆菌为主,分离率为26.41%（98/371）。2、MAC亚种鉴定:经多靶位联合基因测序鉴定,MAC存在7种亚种,分别为胞内分枝杆菌（38.64%,68/176）、鸟分枝杆菌（27.27%,48/176）、奇美拉分枝杆菌（10.80%,19/176）、副胞内分枝杆菌（10.23%,18/176）、哥伦比亚分枝杆菌（7.39%,13/176）、马萨分枝杆菌（4.55%,8/176）和蒂莫内分枝杆菌（1.14%,2/176）。3、MAC的药敏结果:体外药物敏感性试验表明MAC对常用治疗药物克拉霉素、乙胺丁醇、利福平、利福布汀、阿米卡星、链霉素、利奈唑胺和莫西沙星的耐药率分别为8.38%,22.75%,40.12%,14.97%,11.98%,32.93%,42.51%和44.31%。MAC对潜在抗菌有效药物左氧氟沙星、环丙沙星、贝达喹啉、氯法齐明和德拉马尼的耐药率分别为83.83%,90.42%,2.99%,8.98%和86.83%。4、MAC亚种的药敏差异:MAC亚种间的药物敏感性试验结果表明,奇美拉分枝杆菌对克拉霉素的耐药率显着高于胞内分枝杆菌（26.32%vs.4.69%,P=0.014）和鸟分枝杆菌（26.32%vs.6.25%,P=0.014）;哥伦比亚分枝杆菌对链霉素的耐药率显着低于胞内分枝杆菌（9.09%vs.42.19%,P=0.046）和马萨分枝杆菌（9.09%vs.62.5%,P=0.018）;哥伦比亚分枝杆菌对莫西沙星的耐药率显着高于鸟分枝杆菌（81.82%vs.37.50%,P=0.016）和奇美拉分枝杆菌（81.82%vs.26.32%,P=0.007）,副胞内分枝杆菌对莫西沙星的耐药率也显着高于奇美拉分枝杆菌（64.71%vs.26.32%,P=0.024）;胞内分枝杆菌对左氧氟沙星的耐药率显着高于鸟分枝杆菌（92.19%vs.64.58%,P=0.007）。5、VNTR基因分型:鸟分枝杆菌的VNTR各位点存在明显的基因多态性,分辨率指数为0.989,聚类分析呈3个基因群,成簇率为31.25%;胞内分枝杆菌的VNTR各位点存在明显的基因多态性,分辨率指数为0.994,聚类分析呈2个基因群,成簇率为22.34%。6、耐药表型与基因型的相关性:鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌中成簇与非成簇菌株对13种药物的耐药率存在差异,但差异无统计学意义。结论1.广东深圳地区NTM快生分枝杆菌以脓肿分枝杆菌为主,慢生分枝杆菌以MAC为主。MAC是NTM最常见的菌种。MAC亚种众多,本研究共分离出7种,最常见的为胞内分枝杆菌,其次为鸟分枝杆菌。2.MAC的体外药物敏感性结果差异较大。MAC对常用治疗药物药物敏感性较好;对氟喹诺酮类药物敏感性一般,其中四代氟喹诺酮类药物的药物敏感性优于三代氟喹诺酮类药物;在抗TB新药中,贝达喹啉和氯法齐明对MAC的体外抗菌活性较好,德拉马尼相对较差。MAC各亚种的体外药物敏感性存在差异,各亚种对克拉霉素、链霉素、莫西沙星和左氧氟沙星的耐药率差异存在统计学意义。3.VNTR基因分型对鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌均具有良好的分辨力,鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌中成簇与非成簇菌株的药物敏感性存在差异,但差异无统计学意义,尚无证据支持MAC的VNTR基因分型与耐药表型之间存在相关性。
张开义,吕正煊,刘永莉,张乐,朱江春,喻明丽[3]（2021）在《脓肿分枝杆菌致患者多系统播散性感染一例的诊治过程分析》文中指出目的探讨脓肿分枝杆菌致病特点,提高临床医生对该病的认识及诊治水平。方法回顾性分析昆明市第三人民医院2018年6月9日收治的1例脓肿分枝杆菌致患者多系统播散性感染的临床资料、诊治经过及随访、转归情况,并进行经验总结。结果本例患者于2017年7月因"发热、咳嗽1月余"就诊于澜沧县人民医院,以肺部感染治疗2周无效后转至普洱县人民医院,再以"肺结核"诊断性抗结核药品治疗至2017年12月,咳嗽及发热症状较前有缓解。但12月20日患者因发热、咳嗽突然加重并伴胸闷而入住普洱市人民医院,以肺结核并发肺部感染继续行抗结核和抗感染治疗。1个月后因效果不佳而转诊至昆明医科大学某附属医院,诊治后的病情仍无改善,于2018年2月14日回原住地,在当地医院门诊间断进行抗感染及对症治疗。5月8日患者因病情再次加重且伴右侧颈部淋巴结肿大,就诊于云南省某肿瘤医院,淋巴结手术标本病理检查未检出恶性细胞,考虑"耐药性肺结核可能",于6月9日转至我院。经我院血培养、淋巴结脓液培养、肺泡灌洗液分枝杆菌22项分子诊断检测鉴定为"脓肿分枝杆菌",给予"利奈唑胺、莫西沙星、氯法齐明、阿米卡星、克拉霉素"联合治疗40d好转出院,且随访预后良好。结论当疑似结核病患者反复抗酸杆菌检测阻性且诊断性抗结核治疗效果差,除考虑耐药结核病外,还应积极行新型分子生物学检测排除NTM病,以提高疾病诊断率和治愈率。
中华医学会结核病学分会[4]（2020）在《非结核分枝杆菌病诊断与治疗指南（2020年版）》文中研究指明为进一步规范我国非结核分枝杆菌（non-tuberculousMycobacteria,NTM）病的诊断和治疗,提高我国广大医务工作者对NTM病的认识和诊治水平,中华医学会结核病学分会组织相关领域专家,结合我国的实际情况,制定了"非结核分枝杆菌病诊断与治疗指南（2020年版）"。本指南的制定是在我国"2012年非结核分枝杆菌病诊断与治疗专家共识"的基础上,参考美国胸科学会等2020年"NTM病治疗指南"、英国胸科学会2017年"NTM肺病管理指南"和国内外近年来NTM病研究成果与诊治经验,广泛征求国内有关NTM病流行病学、基础、临床与预防方面的专家与学者的意见和建议而形成。本指南内容涵括了NTM病的分类、流行病学、发病机制、病理变化、临床表现、实验室检查、影像学表现、诊断与鉴别诊断、治疗和预防等10个方面,以供我国学者借鉴与参考。
刘一典,沙巍[5]（2020）在《浅谈常见快速生长分枝杆菌病的治疗》文中认为快速生长分枝杆菌所致疾病在非结核分枝杆菌（NTM）病中所占比例较大,且较其他类型的NTM病更为难治。快速生长分枝杆菌病治疗前应评估治疗的必需性,确定治疗时机,进行菌种及亚种的鉴定,制定相应的治疗方案。外科治疗对于快速生长分枝杆菌病具有重要地位。应加大NTM病治疗药物的研发,推进快速生长分枝杆菌所致疾病的相关研究。
周蕾[6]（2020）在《结核分枝杆菌抗性药物体外评价菌株体系的构建及新药筛选》文中研究说明结核病是全球第十大致死病因,我国是结核病的高负担国家。随着耐多药结核病和广泛耐药结核病的增多,结核病的流行势态更为严峻,对新型抗结核药物的需求也更加紧迫。系统的包含不同耐药水平和耐药机制的菌株体系可以用于抗结核药物的筛选和药效评价,因此是药物研发中必不可少的。此外,非结核分枝杆菌（Non-tuberculous mycobacteria,NTM）引起的疾病在结核病中的占比也在不断增高,使结核病的防控更加复杂,对人类健康构成了双重威胁。与结核病系统的监测报告体系不同,NTM病例目前并不强制性报告,NTM疾病缺乏系统的常规性监测数据。同时因为NTM分离鉴定的方法繁琐,技术条件要求高,对NTM的研究比较局限,因此NTM流行趋势和耐药性等方面的综合数据历来是主要依赖于Meta分析。结合现实需求,本研究设立了两项内容,1)本课题旨在建立一个较为系统,包含不同耐药表型的耐药位点数据库及菌株库。根据任务分工,本研究承担了其中利福平和乙胺丁醇两种一线药物的菌库构建工作,并利用已建成的菌株体系,进行了71个候选抗结核药物的药效评价。2)对中国大陆地区20年间NTM的流行趋势进行系统回顾和Meta分析。第一项研究中,首先进行一线抗结核药物利福平和乙胺丁醇耐药机制的文献检索,汇总出经过多项药敏试验验证的确证性耐药相关突变位点。其次从科室菌株库中根据药敏试验检测结果挑选不同耐药水平的菌株进行传代培养。经过耐药位点检测与复核后,进行单菌落纯化培养,药敏试验进一步验证复核后扩增保菌,建立一套包含不同耐药水平和耐药位点的菌株组合。文献汇总显示,利福平的确证性突变位点为rpo B基因的511位点（CTG511CGG/CCG）,513（CAA513AAA/CCA/GAA/CTA）,516（GAC516TTC/TAC/GTC/GGC/GCC）,526（CA526CCCG/TGC/AAC/CTC/CGC/GAC/TAC/TTT/TGG/TTG）以及531（TCG531TTG/TGG/TTT）等位点。乙胺丁醇的确证性突变位点主要分布在emb B、emb A、emb C、ubi A 4个基因中,其中最主要的是emb B基因的306位点（ATG306CTG/ATA/ATC/GTG）、319（TAT319TCT）、334（TAC334CAC）、354（GAC354GCC/AAC）、361（TGC361TAC）、406（GGC406GAC/AGC/GCC）和497（CAG497CAT/AAG）。从菌库选取了428株不同耐药水平的菌株,经耐药基因的扩增、比对,获得了利福平rpo B基因的511、513、516、526、531、533和572位点的共77个菌株;乙胺丁醇emb B基因306和497,emb A基因-16、-12和-11位点,emb C基因270位点以及ubi A基因174位点共38个菌株。应用已建立的菌株体系,对71个具有潜在抗结核活性的候选化合物进行药敏试验。结果显示,化合物L11、L5、L6、L2、L8、L9、L1、Z3、Z10、Z16、Z38和Z46对结核分枝杆菌和快生型非结核分枝杆菌具有较好的抑制效果,尤其是L11。而从独山瓜馥木中分离出的组分1和2对于单耐药菌株（耐异烟肼和耐利福平）和耐多药菌株具有较好的抑制作用,这提示在目前耐药菌株、耐多药和广泛耐药菌株不断增加的流行背景下,该药值得进一步研发。第二项研究中从四个英文在线资源（BIOSIS,Embase,Pub Med和Web of Science）和三个中文医学文献数据库（CNKI,Wanfang和Vip）检索了从2000年1月1日至2019年5月31日发表的中国大陆地区的NTM临床样本的研究报告。系统评价总共包括339篇文献,药物敏感性分析包括129篇,分离率的meta分析包括了95篇。结果显示在中国大陆地区,NTM的分离、鉴定和药敏试验最常用的方法是将Lowenstein-Jensen（L-J）培养基与P-nitrobenzene acid（PNB）和thiophene-2-carboxylic acid hydrazine（TCH）培养基结合使用的传统培养方法。在结核疑似病例中,NTM的粗分离率为4.66-5.78%,在分枝杆菌中占11.57%。脓肿和鸟分枝杆菌是最常见的临床NTM菌种。大陆地区,NTM的患病率在2015年之后呈下降趋势,且胞内分枝杆菌替代脓肿分枝杆菌成为顺位第一的优势菌种。NTM的分布具有地域差异,沿海地区高于内陆。环境和经济差异对NTM菌种的分布具有影响。药敏结果显示,NTM仅对乙胺丁醇、利奈唑胺、氯法齐明、阿米卡星、妥布霉素和克拉霉素普遍较为敏感。综上所述,本研究两项内容所建立的耐药位点数据库、系统的菌株体系将为抗结核药物的研发提供技术平台,而NTM的综合分析数据可以作为临床治疗的用药参考,并指导结核防控策略的调整。
翟凯新[7]（2020）在《大理地区HIV相关NTM病的菌种分布及优势菌群的生物学性状研究》文中认为目的:对大理地区HIV相关的非结核分枝杆菌（non-tuberculous mycobacteria,NTM）临床分离株进行菌种鉴定;对大理地区HIV相关的鸟分枝杆菌（Mycobacterium avium,MAV）用MLVA（Multi locus variable-number tandemrepeat analysis）法进行基因分型,探讨优势菌群基因型特征以及流行趋势;通过比例法检测MAV的药物敏感性,探讨HIV相关的鸟分枝杆菌耐药现状;探究MAV中的毒力蛋白PPE25-MAV对巨噬细胞凋亡的影响。方法:1、NTM的菌种鉴定:用对硝基苯甲酸（PNB）和噻吩-2-羧酸肼（TCH）鉴别培养基对分枝杆菌进行初步鉴定。设计16Sr RNA、hsp65和rpo B基因的引物,以初步鉴定的分枝杆菌DNA为模板进行PCR扩增,将扩增结果测序后提交至NCBI中,与Gen Bank中的标准序列进行BLAST比对,然后进行同源性分析。2、MAV的基因分型:鉴定后的大理地区HIV相关MAV菌株,选取15个数目可变串联重复序列（VNTR）特异位点,运用聚合酶链反应（PCR）和琼脂糖凝胶电泳技术初步建立检测大理地区HIV相关MAV菌株DNA指纹图谱方法。运用Quantity One和Bio Numerics（6.6）软件对结果进行数字化处理,采用UPGMA法和MST法进行聚类分析。3、对MAV的药物敏感性:采用比例法对所有MAV菌株进行包括左氧氟沙星（LFX）、阿米卡星（AK）、卷曲霉素（CPM）、丙硫异烟胺（TH1321）、利福布丁（RBU）、莫西沙星（MFX）在内的这6种药物进行药敏试验。4、PPE25-MAV诱导巨噬细胞凋亡:克隆表达和纯化PPE25-MAV蛋白,分别用浓度为0.5μg/m L、1μg/m L、2μg/m L、5μg/m L的蛋白处理巨噬细胞,各处理2h和10h后,使用流式细胞技术检测巨噬细胞凋亡率。结果:1、NTM的菌种鉴定:大理地区HIV相关的12株NTM中,慢生长分枝杆菌11株,其中9株鸟分枝杆菌,1株帕拉分枝杆菌,1株戈登分枝杆菌;快生长分枝杆菌1株为脓肿分枝杆菌。主要以鸟分枝杆菌为优势菌群。2、MAV的基因分型:VNTR的15个位点的HGDI值存在差异,最高值为0.75,最低值为0。在15个位点中MATR-14最高为0.75,而MATR-9、MATR-1、MATR-2等13个位点HGDI值均大于等于0.5。根据UPGMA法聚类分析树状图显示,大理地区双感的9株鸟分枝杆菌分为3个基因群,8个基因型。其中C群的2个临床分离株形成1个簇,A、B群没有成簇的菌株。用MST法聚类分析的结果大理地区的鸟分枝杆菌分为三个簇。3、对MAV的药物敏感性:9株HIV相关的MAV全部对阿米卡星（AK）耐药,有7株对左氧氟沙星（LFX）耐药,有6株对莫西沙星（MFX）耐药,有5株对卷曲霉素（CPM）耐药,有1株对利福布丁（RBU）耐药,另外9株MAV均对丙硫异烟胺（TH1321）敏感。4、PPE25-MAV诱导巨噬细胞凋亡:在作用2h后,与空白对照组相比,细胞的晚期凋亡率和总凋亡率在0.5μg/m L与1μg/m L时均低于空白组（P<0.05）;在作用10h后,与空白对照组相比,细胞的早期凋亡率仅5μg/m L时略有升高（P<0.05）,在0.5μg/m L、1μg/m L和2μg/m L之间差异无统计学意义（P>0.05）,细胞晚期凋亡率和总凋亡率在2μg/m L和5μg/m L时明显降低（P<0.05）。结论:1、大理地区HIV相关的12株NTM中主要优势菌群为鸟分枝杆菌,rpo B和hsp65基因可以将脓肿分枝杆菌的亚种鉴别出来。2、对大理地区MAV菌株MATR-VNTR分析,不同菌株的同一位点的基因片段差异明显,基因分型多态性较高。MATR-14和MATR-9等13个位点分辨力高,可作为大理地区HIV相关MAV的基因分型首选位点。3、MAV对丙硫异烟胺（TH1321）敏感,同时存在对二线抗结核药物耐药的情况以及多药耐药的特点。4、PPE25-MAV蛋白对巨噬细胞凋亡有抑制作用。而且PPE25-MAV蛋白主要作用于巨噬细胞的晚期凋亡阶段。
王峥[8]（2020）在《非结核分枝杆菌病的临床分析和药敏研究》文中研究表明非结核分枝杆菌（nontuberculous mycobacteria,NTM）通常是指除结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）和麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌。根据其生长速度分为快生长分枝杆菌（Rapidly growing mycobacteria,RGM）和慢生长分枝杆菌（Slowly growing mycobacteria,SGM）。NTM分布在家庭用水、天然水源、土壤和气溶胶等环境中,属于机会致病菌,临床上RGM中脓肿分枝杆菌、偶发分枝杆菌以及SGM中鸟分枝杆菌复合体、堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌等感染最为常见。近年来NTM病的发病率在全球呈上升趋势,我国NTM分离率也从1990年的4.9%升至2010年的22.9%,已成为威胁人类健康的重要公共卫生问题。NTM感染在临床上多发于肺部,引起慢性肺部疾病,其次还可引起淋巴结炎、皮肤病和传播性疾病等。NTM肺病与肺结核在临床症状、影像学特征、组织病理学及病原学检查极为相似,临床上很多NTM肺病患者常被误诊为肺结核,给予抗结核治疗,但NTM对大多数的抗结核药物天然耐药,治疗效果往往很差。目前鉴别区分NTM和肺结核的方法主要包括PNB选择性培养法、核酸扩增法、MPT64抗原检测法等,但存在PNB培养法耗时长、PCR扩增序列天然缺失等问题。因此,寻找快速准确、在临床中易于推广的诊断方法,以及有效的抗NTM药物治疗方案至关重要。本课题基于2009年-2019年在上海市肺科医院确诊的573例NTM肺病患者以及593例确诊为肺结核患者的临床检测数据库进行回顾性研究,比较了NTM肺病与肺结核两类患者的基本生理学及临床特征,探讨了NTM肺病患者的相关危险因素;进一步对NTM肺病患者中快生长分枝杆菌与慢生长分枝杆菌两组的基本资料及临床特征进行了比较研究;总结了NTM临床耐药性以及快生长分枝杆菌与慢生长分枝杆菌临床耐药性的差异;比较分析了T-spot阳性的NTM肺病与肺结核患者临床指标的差异,筛选评估了与T-spot联合诊断NTM和TB有潜在辅助诊断价值的指标。研究发现NTM肺病与肺结核两组初治患者在年龄、咳嗽、咯血、发热、支气管扩张、肺内空洞发生率上的差异均具有统计学意义（P<0.05）,采用Logistic回归分析60岁以上患者患NTM肺病的概率更高,且NTM肺病患者的支气管扩张的发生率更高;另外我们发现大多数NTM对异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素、阿米卡星、氯霉素、氧氟沙星等抗结核药物存在不同程度的耐药,耐药率高达95.1%,快生长分枝杆菌和慢生长分枝杆菌中对于利福平和乙胺丁醇耐药性的差异具有统计学意义。通过对两组患者临床指标检测结果的比较,NTM肺病组的HGB、Lym%、EO%、HCT、MCV、PDW、P-LCR、HDL、AT3、RBP等指标明显高于肺结核组（P<0.05）,而肺结核组的WBC、Neu%、PLT、PCT、C3、TT、CRP、D-Dimer、T-spot、MDSIL-2R、ESR等指标高于NTM肺病组患者（P<0.05）;以肺结核患者为对照,对单个指标和多个指标联合分别进行ROC曲线分析,T-spot和CRP曲线下面积分别为0.755和0.732。T-spot阳性的诊断界值为17.5,灵敏度为0.805,特异性为0.622,CRP为9.5mg/L,灵敏度为0.675,特异性为0.701;多指标联合时T-spot联合MCH、MDSIL-2R诊断的特异度最高,为95.8%,灵敏度为56.9%,准确度也较高,AUC面积为0.801;另外PLT与AT-3、T-spot与MCV、T-spot与RBP、PCT联合诊断时的特异度也较高,分别为88.9%、85.4%、84.0%,灵敏度分别为51.3%、58.5%、68.4%,AUC均在0.7-0.9之间。在课题第二部分,我们选取了共五大类24种临床常用抗生素对7种不同的NTM进行体外药物敏感性研究。本文发现单药使用时,拉氧头孢对瘰疬分枝杆菌有较好的抑制作用;同样多西环素对堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌也均有较好的抑菌活性;法罗培南和万古霉素均对瘰疬分枝杆菌、海分枝杆菌有较好的抑菌作用;克林霉素对瘰疬分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌有较好的抑制作用;联合用药中,克拉霉素与利奈唑胺对鸟分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌有协同抑制作用,克拉霉素与多西环素对鸟分枝杆菌呈现协同抑制作用。总之,本文分析了NTM肺病患者与肺结核患者临床相关检测及特征的差异,发现了T-spot联合MCH、MDSIL-2R以及RBP、PCT;PLT与AT-3、T-spot与MCV联合能提高T-spot阳性的NTM肺病与结核病患者的鉴别诊断效能。另外,首次发现了拉氧头孢、法罗培南、多西环素、万古霉素、克林霉素等抗生素以及联合用药体外对不同NTM有效,为进一步临床应用评价打下了基础。
程睿儇[9]（2019）在《大理地区非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定及耐药性分析》文中认为目的:对大理地区疑似非结核分枝杆菌（（Non-tuberculous mycobacteria,NTM）的临床分离株进行菌种鉴定;通过药敏试验检测NTM的耐药性,分析NTM耐药菌株对利福平、异烟肼耐药相关基因rpoB和inhA的基因突变情况,初步研究NTM的耐药机制。方法:1.非结核分枝杆菌临床分离株的的菌种鉴定:运用PNB/TCH鉴别培养基将18株疑似NTM的临床株进行初步菌种鉴定,再设计16SrRNA引物,以初步鉴定为NTM的临床分离株的DNA为模板进行聚合酶链反应（Polymerase chain reaction,PCR）,PCR扩增产物送测序公司测序,将结果提交NCBI-BLAST网站,与GenBank中的标准序列进行比较和同源性分析,获得菌种鉴定结果。结果所得2株脓肿分枝杆菌再用hsp65和rpoB引物进行PCR扩增、测序、BLAST比对后,可以将此2株脓肿分枝杆菌（Mycobacterium abscessus,M.abscessu）鉴定为不同亚种。2.非结核分枝杆菌的耐药性研究（1）非结核分枝杆菌的药物敏感性测定:采用比例法对所有NTM进行包括异烟肼（Isoniazid,INH）、利福平（Rifampicin,RFP）、乙胺丁醇（Ethambutol,EMB）、卡那霉素（Kanamycin,KM）在内的4种药物的敏感性试验,其中对鸟分枝杆菌增加莫西沙星（Moxifloxacin,MFX）,脓肿分枝杆菌增加阿米卡星（Amikacin,AK）的药物敏感性试验,来分析NTM的耐药情况。（2）非结核分枝杆菌耐药相关基因分析:1）设计合成引物inhA,采用PCR技术扩增脓肿分枝杆菌的inhA基因,对目的基因inhA进行DNA测序并将测序结果与结核分枝杆菌标准株（H37Rv）以及脓肿分枝杆菌标准株（ATCC19977）的inhA基因序列进行比较,分析他们之间的基因差异,从而进一步分析inhA基因的突变与脓肿分枝杆菌对异烟肼耐药的关系。2)设计合成引物rpoB2,采用PCR法扩增对利福平耐药的脓肿分枝杆菌临床株的rpoB2基因,将扩增后目的基因所测序列与脓肿分枝杆菌标准株（ATCC19977）的rpoB2基因序列相比对寻找基因差异。3)设计合成引物rpoB1,利用PCR技术扩增对利福平耐药的鸟分枝杆菌的rpoB1基因的81bp核心区域,提取目的基因rpoB1片段送测序公司测序,所得测序结果与鸟分枝杆菌标准株（ATCC25291）的rpoB1基因序列进行比对,找出鸟分枝杆菌耐药株与标准株在该区域的基因差异。结果:1.非结核分枝杆菌的菌种鉴定:运用PNB/TCH鉴别培养基将18株疑似非结核分枝杆菌的临床株初步鉴别为NTM 14株和MTB 4株,再扩增NTM的基因16SrRNA,测序、比对后将初步鉴定为NTM的14株临床株准确地鉴定为NTM 12株、束村氏菌1株及戈登氏菌1株,其中12株NTM亦能被16SrRNA引物鉴定为慢生长分枝杆菌（Slowly growing mycobacterium,SGM）中的鸟分枝杆菌10株（83%）和快生长分枝杆菌（Rapidly growing mycobacterium,RGM）中的脓肿分枝杆菌2株（17%）。在脓肿分枝杆菌中,可运用hsp65和rpoB两对引物将其更为准确地鉴定为Bolletii亚种和Abscessus亚种,其中有Bolletii亚种1株,Abscessus亚种1株。2.非结核分枝杆菌的耐药性研究（1）非结核分枝杆菌的药物敏感性测定:试验结果显示,在10株鸟分枝杆菌的5种药物的药敏试验中,10株菌株对异烟肼、卡那霉素全部耐药;9株对利福平耐药,1株敏感;7株对乙胺丁醇、莫西沙星耐药,3株敏感。2株脓肿分枝杆菌对5种抗结核药物全部耐药。（2）非结核分枝杆菌耐药相关基因分析:1)采用PCR技术扩增出3条脓肿分枝杆菌长度为810bp的inhA基因片段,与Genebank中相应基因一致;2株脓肿分枝杆菌临床株与标准株相比较,结果显示1号临床株的核苷酸差异表达位点2个,5号株的核苷酸差异表达位点7个。3株脓肿分枝杆菌与H37Rv的inhA基因通过测序、序列比对分析发现差异表达位点1号株有607个,5号株有581个,标准株有567个;在inhA基因中,H37Rv的inhA基因第94位密码子所表达的氨基酸为丝氨酸（Ser）,2株脓肿分枝杆菌临床株表达为苏氨酸（Thr）。2)2株脓肿分枝杆菌利用rpoB2基因经PCR扩增,合成大小约1300bp的DNA片段;在第146位密码子、基因突变集结Ⅰ区、基因突变集结Ⅱ区这3部分区域,通过比较脓肿分枝杆菌标准株（ATCC19977）与结核分枝杆菌标准株（H37Rv）,脓肿分枝杆菌标准株与耐利福平的脓肿分枝杆菌临床株在各个区域的比对结果,均未发现存在有义突变,均编码相同氨基酸。3)5株对利福平耐药的鸟分枝杆菌通过运用rpoB1基因扩增出长度约为1400bp的目的基因片段;检测对利福平耐药的鸟分枝杆菌的rpoB1基因的81bp核心区域发现鸟分枝杆菌的rpoB1基因在此区域未发生有义突变。结论:1.NTM临床株通过运用16SrRNA基因,被更精确的鉴定为NTM不同菌种。hsp65和rpoB的基因扩增测序法可将脓肿分枝杆菌鉴定为不同亚种,且2种鉴定法结果一致。2.鸟分枝杆菌对常见抗结核药物高度耐药,脓肿分枝杆菌不仅对抗结核药物耐药,且表现为多药耐药;脓肿分枝杆菌临床株和结核分枝杆菌标准株（H37Rv）在inhA基因上的差异位点所表达的核苷酸不同可能是导致脓肿分枝杆菌对异烟肼天然耐药的原因;分枝杆菌对异烟肼的耐药机制并非由于其第94位密码子发生的丝氨酸（Ser）被丙氨酸（Ala）取代,提示脓肿分枝杆菌耐异烟肼存在其他原因;耐利福平的脓肿分枝杆菌的rpoB2基因在基因突变高发区并未发生突变,说明其对利福平的耐药机制与MTB不同;对利福平耐药的鸟分枝杆菌的rpoB1基因其81bp的基因突变区未发生突变,表明鸟分枝杆菌对利福平的耐药机制亦不同于MTB。
刘佳[10]（2019）在《苏州地区非结核分枝杆菌病的流行病学研究及全基因测序的应用》文中进行了进一步梳理目的:通过调查NTM的分离率、菌种分布、耐药情况,再运用全基因测序法分析菌种分布趋势、比较目前传统实验室方法、建立基因进化树、分析共线性,了解各菌株之间亲缘性、变异性、探索相关耐药基因,从而提升NTM病的诊疗水平。方法:回顾性选取苏州市第五人民医院近五年分枝杆菌培养阳性的所有标木,了解非结核分枝杆菌培养阳性的分离率。选取确诊为NTM感染患者所留取的菌株,根据分枝杆菌培养结合PCR基因芯片技术法,分析苏州地区致病NTM菌株菌种分布、耐药情况,分析耐药影响因素。并运用全基因测序法,验证分枝杆菌培养结合PCR技术可靠性,了解本地区高发的菌种流行趋势,构建进化树,分析亲缘性、共线性,利用CARD数据库,寻找耐药基因。结果:1、近五年我院非结核分枝杆菌培养阳性菌株逐年增多。2、按基因芯片法共发现6种NTM菌株,胞内分枝杆菌>堪萨斯分枝杆菌>龟/脓肿分枝杆菌。胞内分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌对乙胺丁醇、丙硫异烟胺敏感性较高,而脓肿分枝杆菌呈现广泛耐药性。3、全基因测序法测出有88.06%与分枝杆菌培养法结合PCR技术得出的菌种鉴定结果相同,未发现龟分枝杆菌。近年好发致病菌株均呈上升趋势,胞内分枝杆菌增多明显。构建基因进化树后发现堪萨斯分枝杆菌各菌株间同源性偏高。共线性分析发现菌株间可信度均为1 00,但同一患者的共线范围大。最后初步探索出非结核分枝杆菌耐药相关基因。结论:1、苏州地区NTM病发病率呈上升趋势,略低于全国平均水平。2、致病菌种以胞内分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、脓肿分枝杆菌为主,以胞内分枝杆菌增长明显。乙胺丁醇、丙硫异烟胺敏感菌株偏多。非结核分枝杆菌基本为天然耐药。苏州地区疑似NTM感染者需先行诊断性用药的,可考虑予乙胺丁醇+丙硫异烟胺+克拉霉素联合治疗。3、全基因测序验证了分枝杆菌培养法结合PCR基因芯片技术可靠。本研究提示堪萨斯分枝杆菌可能存在人与人之间的传染性,需后期随访研究进一步验证。共线性分析同源性高的菌株中同一患者体内不同菌株保留了大量的保守区域,考虑内源性复燃。最后探索出的非结核分枝杆菌耐药相关基因为今后科研提供信息。
二、龟分枝杆菌脓肿亚种药物敏感性及耐药性（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、龟分枝杆菌脓肿亚种药物敏感性及耐药性（论文提纲范文）
（1）云南省部分地区HIV相关NTM病的病原学及其生物特性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 课题资助情况 |
| 缩略语中英对照表 |
| 前言 |
| 第一章 云南省部分地区非结核分枝杆菌菌种鉴定 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 菌株来源 |
| 1.1.2 实验耗材及试剂 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 菌种复苏 |
| 1.2.2 菌种保存 |
| 1.2.3 菌种初步鉴别 |
| 1.2.4 菌体DNA提取 |
| 1.2.5 聚合酶链反应 |
| 1.2.6 琼脂糖凝胶电泳 |
| 1.2.7 普通琼脂糖凝胶DNA回收试验 |
| 1.2.8 纯化后DNA测序结果比对 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 抗酸染色结果 |
| 1.3.2 非结核分枝杆菌在中性罗氏培养基上的生长情况 |
| 1.3.3 鉴别培养基菌种鉴定初步结果 |
| 1.3.4 PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳结果 |
| 1.3.5 DNA测序比对结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 鸟分枝杆菌基因多态性分析 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 菌株来源 |
| 2.1.2 实验耗材及试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 PCR |
| 2.2.2 琼脂糖凝胶电泳 |
| 2.2.3 结果分析方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 聚合酶链反应实验结果 |
| 2.3.2 VNTR多位点基因分析 |
| 2.3.3 鸟分枝杆菌各个位点的重复次数及分辨率以及聚类分析结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 鸟分枝杆菌药物敏感性检测 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 菌株来源 |
| 3.1.2 实验耗材及试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 菌悬液制备 |
| 3.2.2 菌悬液稀释 |
| 3.2.3 比例法药物敏感性试验接种 |
| 3.2.4 鸟分枝杆菌的培养 |
| 3.2.5 药敏实验结果判读 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 HIV合并NTM双感来源鸟分枝杆菌的生长情况 |
| 3.3.2 鸟分枝杆菌低稀释度和高稀释度药敏实验结果 |
| 3.3.3 鸟分枝杆菌对抗结核药物的耐药分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 AIDS合并鸟分枝杆菌感染的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 |
（2）鸟—胞内分枝杆菌复合群的亚种鉴定和药敏特征以及耐药表型与基因型相关性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 MAC及其亚种的分离、鉴定 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 第二部分 MAC的体外药物敏感性试验 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 第三部分 MAC的 VNTR基因分型与耐药表型相关性研究 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 综述 鸟-胞内分枝杆菌复合群肺病治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 中英文对照表 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
| 学位论文答辩委员会名单 |
| 个人简历 |
（3）脓肿分枝杆菌致患者多系统播散性感染一例的诊治过程分析（论文提纲范文）
| 临床资料 |
| 讨论 |
（6）结核分枝杆菌抗性药物体外评价菌株体系的构建及新药筛选（论文提纲范文）
| 缩略词列表 |
| 摘要 |
| Summary |
| 第一章 抗结核菌药物耐药菌库的构建 |
| 1.1 前言 |
| 1.1.1 结核病治疗药物的分类 |
| 1.1.2 两种一线抗结核药物的作用机制 |
| 1.1.2.1 利福平及其作用机制 |
| 1.1.2.2 乙胺丁醇及其作用机制 |
| 1.1.3 利福平及乙胺丁醇耐药菌库构建意义 |
| 1.1.4 候选药物体外抗结核活性药效评价的意义 |
| 1.2 材料和方法 |
| 1.2.1 菌株来源 |
| 1.2.2 主要试剂及耗材 |
| 1.2.3 主要仪器设备 |
| 1.2.4 试剂配置 |
| 1.2.5 实验方法 |
| 1.2.5.1 文献检索、数据提取及汇总 |
| 1.2.5.2 菌种保藏及复苏传代 |
| 1.2.5.3 单菌落筛选及传代 |
| 1.2.5.4 水煮法提取DNA |
| 1.2.5.5 PCR扩增 |
| 1.2.5.6 琼脂糖凝胶电泳 |
| 1.2.5.7 测序及序列分析 |
| 1.2.5.8 药物敏感性试验 |
| 1.2.5.9 候选药物体外抗结核活性药效评价 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 利福平和异烟肼耐药位点数据库 |
| 1.3.1.1 利福平耐药位点 |
| 1.3.1.2 乙胺丁醇耐药位点 |
| 1.3.2 利福平及乙胺丁醇耐药菌株库的构建 |
| 1.3.3 候选药物体外抗结核活性药效评价 |
| 1.3.3.1 菌株选取结果 |
| 1.3.3.2 药液配制信息 |
| 1.3.3.3 结核分枝杆菌耐药菌株库在药物研发中的应用 |
| 1.4 讨论 |
| 第二章 2000-2019年我国非结核分枝杆菌流行趋势及耐药性的系统评价及meta分析 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 文献检索 |
| 2.2.2 文献纳入和排除标准 |
| 2.2.3 文献数据提取 |
| 2.2.4 重复数据处理 |
| 2.2.5 数据分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 文献筛选结果 |
| 2.3.2 非结核分枝杆菌培养分离和鉴定方法统计分析 |
| 2.3.3 非结核分支杆菌菌种构成 |
| 2.3.3.1 样本来源省份分布 |
| 2.3.3.2 文献异质性分析 |
| 2.3.3.3 菌种构成 |
| 2.3.3.4 优势菌种分布差异 |
| 2.3.3.5 RGM与 SGM的分离率 |
| 2.3.4 基础性疾病统计 |
| 2.3.5 中国大陆地区优势菌种的耐药情况 |
| 2.3.5.1 药敏试验方法使用频率统计 |
| 2.3.5.2 使用的抗生素折点浓度的统计 |
| 2.3.5.3 优势菌种的耐药率 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 总结 |
| 3.1 主要结论 |
| 3.2 主要创新点 |
| 3.3 后续研究建议 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
（7）大理地区HIV相关NTM病的菌种分布及优势菌群的生物学性状研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 课题资助情况 |
| 英汉缩略词与英汉对照 |
| 前言 |
| 第1章 大理地区NTM/HIV感染者NTM的菌种鉴定 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 标本来源 |
| 1.1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.1.3 主要试剂的配制 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 菌株的初步鉴定与分离培养 |
| 1.2.2 非结核分枝杆菌的培养和保存 |
| 1.2.3 非结核分枝杆菌基因多位点序列分析鉴定 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 抗酸染色镜检 |
| 1.3.2 部分NTM菌落的生长状况 |
| 1.3.3 鉴别培养基的鉴定 |
| 1.3.4 多位点PCR扩增的电泳结果 |
| 1.3.5 多位点PCR扩增产物测序结果及同源性分析 |
| 1.3.6 菌种分布情况 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第2章 大理地区NTM/HIV感染者NTM中鸟分枝杆菌MLVA法基因分型研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 菌株来源 |
| 2.1.2 实验试剂和仪器 |
| 2.1.3 主要试剂的配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 鸟分枝杆菌的DNA提取 |
| 2.2.2 MLVA基因分型法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 PCR扩增结果重复性的检测 |
| 2.3.2 VNTR基因位点的多态性检测 |
| 2.3.3 不同位点的分辨力 |
| 2.3.4 UPGMA法聚类分析结果 |
| 2.3.5 用MST法聚类分析的结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 鸟分枝杆菌药物敏感性测定 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 菌株来源 |
| 3.1.2 实验试剂和仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 鸟分枝杆菌的传代培养 |
| 3.2.2 菌株的药物敏感性测定 |
| 3.2.3 质量控制以及注意事项 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 双感菌株在药敏培养基上的生长情况 |
| 3.3.2 培养结果报告 |
| 3.3.3 鸟分枝杆菌对二线抗结核药物的耐药情况 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白对小鼠巨噬细胞凋亡的影响 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验细胞 |
| 4.1.2 实验试剂和仪器 |
| 4.1.3 试剂的配制 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 重组质粒的构建与鉴定 |
| 4.2.2 PPE25-MAV蛋白的诱导表达与鉴定 |
| 4.2.3 PPE-25 MAV蛋白的纯化以及柱上复性 |
| 4.2.4 Ana-1小鼠巨噬细胞的培养 |
| 4.2.5 PPE25-MAV蛋白对巨噬细胞凋亡的影响 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 重组质粒的鉴定 |
| 4.3.2 重组质粒的诱导表达 |
| 4.3.3 PPE25-MAV蛋白的Western Blot鉴定 |
| 4.3.4 PPE25-MAV蛋白的表达形式 |
| 4.3.5 流式细胞术检测PPE25-MAV蛋白对巨噬细胞的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 非结核分枝杆菌基因分型的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 |
（8）非结核分枝杆菌病的临床分析和药敏研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 非结核分枝杆菌概述 |
| 1.2 非结核分枝杆菌流行病学研究 |
| 1.2.1 流行状况 |
| 1.2.2 菌种分布情况 |
| 1.2.3 发病机制 |
| 1.2.4 临床表现 |
| 1.3 非结核分枝杆菌鉴别方法 |
| 1.4 非结核分枝杆菌感染治疗 |
| 1.4.1 快生长分枝杆菌 |
| 1.4.2 慢生长分枝杆菌 |
| 1.5 研究目的和意义 |
| 1.6 研究内容 |
| 第2章 NTM肺病患者的临床研究 |
| 2.1 研究对象及方法 |
| 2.1.1 研究对象 |
| 2.1.2 诊断标准 |
| 2.1.3 基础临床表征及指标采集 |
| 2.1.4 统计学分析方法 |
| 2.2 研究结果与分析 |
| 2.2.1 一般人口学资料及临床表现 |
| 2.2.2 NTM肺病对药物的耐药性分析 |
| 2.2.3 T-spot.TB检测阳性的NTM肺病与肺结核患者临床指标比较 |
| 2.2.4 T-spot.TB阳性的NTM肺病与肺结核鉴别诊断 |
| 2.3 结论 |
| 2.3.1 NTM肺病临床特点和相关性因素 |
| 2.3.2 临床指标对NTM肺病鉴别诊断价值 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 抗生素对非结核分枝杆菌药敏检测 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 菌株来源 |
| 3.1.2 抗生素的选择 |
| 3.1.3 培养基的制备 |
| 3.1.4 实验仪器 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 微量药敏板的制备 |
| 3.2.2 菌液的制备及接种 |
| 3.2.3 培养及结果判定标准 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 有氧条件下对NTM的 MIC检测 |
| 3.3.2 厌氧条件下对NTM的 MIC检测 |
| 3.3.3 联合抗生素对NTM的体外活性研究 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小节 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及科研成果 |
（9）大理地区非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定及耐药性分析（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 大理地区非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 2 方法 |
| 结果 |
| 1 抗酸染色镜检 |
| 2 部分分枝杆菌菌落生长情况 |
| 3 鉴别培养基初步菌种鉴定结果 |
| 4 16S rRNA、hsp65和rpoB基因的PCR扩增及测序后比对结果分析 |
| 5 菌种分布情况 |
| 6 脓肿分枝杆菌亚种的菌种鉴定 |
| 7 系统进化树的分析 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 非结核分枝杆菌的耐药性研究 |
| (一)非结核分枝杆菌的药物敏感性测定 |
| 材料 |
| 1 菌株来源 |
| 方法 |
| 1 NTM的传代培养 |
| 2 NTM的药物敏感性测定 |
| 3 质量控制 |
| 结果 |
| 1 NTM在药敏培养基上生长情况 |
| 2 鸟分枝杆菌和脓肿分枝杆菌药敏培养结果 |
| 3 鸟分枝杆菌和脓肿分枝杆菌对抗结核药物的耐药情况 |
| 讨论 |
| 小结 |
| (二)非结核分枝杆菌耐药相关基因分析 |
| 材料 |
| 1 菌株来源 |
| 2 主要仪器和试剂 |
| 方法 |
| 1 引物的设计与合成 |
| 2 鸟分枝杆菌和脓肿分枝杆菌基因组DNA的提取 |
| 3 PCR扩增 |
| 4 PCR产物电泳 |
| 5 PCR产物回收、纯化和测序 |
| 结果 |
| 1 脓肿分枝杆菌inhA基因的扩增、测序和比对结果 |
| 2 脓肿分枝杆菌rpoB2基因的扩增、测序和比对结果 |
| 3 鸟分枝杆菌rpoB1基因的扩增、测序和比对结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文的情况 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（10）苏州地区非结核分枝杆菌病的流行病学研究及全基因测序的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一部分 苏州地区非结核分枝杆菌的分离率 |
| 资料与方法 |
| 一、临床资料 |
| 二、使用仪器 |
| 三、标本采集 |
| 四、研究方法 |
| 五、统计方法 |
| 结果 |
| 一、近五年(2014—2018年)我院分枝杆菌培养样本中结核分枝杆菌阳性标本例数和非结核分枝杆菌阳性标本例数分析 |
| 二、近五年(2014—2018年)我院非结核分枝杆菌培养阳性分离率趋向 |
| 第二部分 苏州地区致病NTM菌种分布、耐药情况 |
| 资料与方法 |
| 一、临床资料 |
| 二、主要试剂 |
| 三、主要仪器 |
| 四、研究方法 |
| 五、统计方法 |
| 结果 |
| 一、NTM菌种鉴定 |
| 二、菌种鉴定结果 |
| 三、药敏试验结果 |
| 四、各菌种药敏试验分析 |
| 五、耐药性影响因素分析 |
| 第三部分 全基因测序法在检测临床样本 非结核分枝杆菌中的应用 |
| 资料与方法 |
| 一、临床资料 |
| 二、主要仪器 |
| 三、研究方法 |
| 结果 |
| 一、采用全基因测序法分析临床样本菌种分布情况 |
| 二、2014-2018年,苏州地区前三位菌株(胞内分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、脓肿分枝杆菌)分布流行趋势 |
| 三、基因进化树 |
| 四、全基因组共线分析 |
| 五、全基因测序法与我院分枝杆菌培养结合PCR芯片技术得出的菌种鉴定结果进行对比 |
| 六、非结核分枝杆菌耐药相关基因的探索 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述: 非结核分枝杆菌病诊疗新进展 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词表 |
| 撰写论文 |
| 致谢 |
四、龟分枝杆菌脓肿亚种药物敏感性及耐药性（论文参考文献）
- [1]云南省部分地区HIV相关NTM病的病原学及其生物特性研究[D]. 陈越. 大理大学, 2021(09)
- [2]鸟—胞内分枝杆菌复合群的亚种鉴定和药敏特征以及耐药表型与基因型相关性研究[D]. 李远春. 卫生部北京老年医学研究所, 2021(01)
- [3]脓肿分枝杆菌致患者多系统播散性感染一例的诊治过程分析[J]. 张开义,吕正煊,刘永莉,张乐,朱江春,喻明丽. 中国防痨杂志, 2021(01)
- [4]非结核分枝杆菌病诊断与治疗指南（2020年版）[J]. 中华医学会结核病学分会. 中华结核和呼吸杂志, 2020(11)
- [5]浅谈常见快速生长分枝杆菌病的治疗[J]. 刘一典,沙巍. 中华结核和呼吸杂志, 2020(11)
- [6]结核分枝杆菌抗性药物体外评价菌株体系的构建及新药筛选[D]. 周蕾. 贵州大学, 2020(02)
- [7]大理地区HIV相关NTM病的菌种分布及优势菌群的生物学性状研究[D]. 翟凯新. 大理大学, 2020(05)
- [8]非结核分枝杆菌病的临床分析和药敏研究[D]. 王峥. 西南交通大学, 2020(07)
- [9]大理地区非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定及耐药性分析[D]. 程睿儇. 大理大学, 2019(01)
- [10]苏州地区非结核分枝杆菌病的流行病学研究及全基因测序的应用[D]. 刘佳. 苏州大学, 2019(06)