一、从外周气道炎症的存在看哮喘的研究现状（论文文献综述）
张瑶[1]（2021）在《疏风通络方含药血清对体外小鼠嗜酸性粒细胞粘附、迁移过程影响的分子机制研究》文中研究指明目的:以小鼠嗜酸性粒细胞为研究对象,对其进行体外实验研究,探讨疏风通络方含药血清对小鼠嗜酸性粒细胞粘附、迁移影响的机制,为疏风通络方临床应用治疗哮喘提供实验依据。方法:该研究以小鼠嗜酸性粒细胞为研究对象,采用CCK8法检测不同时间和浓度的疏风通络方含药血清对嗜酸性粒细胞活力的影响,确定含药血清的最佳浓度和时间;用Transwell系统检测不同干预条件下嗜酸性粒细胞的体外迁移能力;用钙黄绿素荧光标记嗜酸性粒细胞,根据不同的分组给予相应的干预措施,将标记好的嗜酸性粒细胞放到内皮细胞单层中于37℃下孵育,在荧光显微镜下观察嗜酸性粒细胞与内皮细胞的粘附情况。结果:1.疏风通络方含药血清以20%为最佳给药浓度,在体外刺激6h时嗜酸性粒细胞活力较好。2.CCL11、CCL24、疏风通络方含药血清以及拮抗剂对小鼠嗜酸性粒细胞体外迁移的影响:（1）与细胞组比较,CCL11、CCL24组都能增加小鼠嗜酸性粒细胞迁移数目,差异具有显着性（P<0.01）。与CCL11组相比,CCL11+含药血清组及CCL11+空白血清组均减少EOS迁移数量（P<0.01,P<0.05）,且CCL11+含药血清组与CCL11+空白血清组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）。与CCL24组相比,CCL24+含药血清组显着减少EOS迁移数量（P<0.01）;与CCL24+空白血清组相比,差异无统计学意义（P>0.05）。（2）与CCL11组相比,CCL11+PD98059组、CCL11+SB328437组以及CCL11+SB203580组嗜酸性粒细胞迁移数目均减少,差异具有显着性（P<0.01）;CCL11+LY294002组与之相比数目减少,但差异无统计学意义（P>0.05）,CCL11+PTX组较CCL11组数目增加,差异无统计学意义（P>0.05）。（3）与CCL24组相比,CCL24+LY294002组嗜酸性粒细胞迁移数目增加,差异具有显着性（P<0.01）。CCL24+PD98059组、CCL24+SB328437组、CCL24+SB203580组以及CCL24+PTX组较之均无统计学意义（P>0.05）。3.在CCL11+拮抗剂条件下,疏风通络方含药血清对EOS迁移的影响:与CCL11+PD98059相比,CCL11+PD98059+含药血清组EOS迁移数量减少,但差异无统计学意义（P>0.05）。与CCL11+SB328437相比,CCL11+SB328437+含药血清组EOS迁移数量减少（P<0.05）,与CCL11+SB328437+空白血清组相比,差异具有显着性（P<0.01）。与CCL11+LY294002相比,CCL11+LY294002+含药血清组较CCL11+LY294002+空白血清组更能减少EOS迁移（P<0.01）,且CCL11+LY294002+含药血清组与CCL11+LY294002+空白血清组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。与CCL11+SB203580相比,CCL11+SB203580+含药血清组较CCL11+SB203580+空白血清组EOS迁移数量降低（P<0.01）。与CCL11+PTX组相比,CCL11+PTX+含药血清组与CCL11+PTX+空白血清组EOS迁移量均减少（P<0.01,P<0.05）。4.在CCL24+拮抗剂条件下,疏风通络方含药血清对EOS迁移的影响:与CCL24+PD98059相比,CCL24+PD98059+含药血清组EOS迁移数量降低,但差异无统计学意义（P>0.05）。与CCL24+SB328437相比,CCL24+SB328437+含药血清组EOS迁移数量明显减少（P<0.01）,与CCL24+SB328437+空白血清组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）。与CCL24+LY294002相比,CCL24+LY294002+含药血清组与CCL24+LY294002+空白血清组均减少EOS迁移（P<0.01）,且CCL24+LY294002+含药血清组较CCL24+LY294002+空白血清组更能减少EOS迁移（P<0.05）。与CCL24+SB203580相比,CCL24+SB203580+含药血清组较CCL24+SB203580+空白血清组EOS迁移数量降低（P<0.01）。与CCL24+PTX组相比,CCL24+PTX+含药血清组EOS迁移量减少（P<0.05）,CCL24+PTX+空白血清组EOS迁移数量减少,但两者差异无统计学意义（P>0.05）。5.CCL11、CCL24、疏风通络方含药血清以及拮抗剂对小鼠嗜酸性粒细胞与内皮细胞粘附的影响:（1）与正常细胞组比较,CCL11组小鼠嗜酸性粒细胞粘附数量增加,与CCL11组相比,CCL11+含药血清组与CCL11+空白血清组细胞粘附数量均降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。CCL24组与细胞组相比,小鼠嗜酸性粒细胞粘附数量上升（P<0.01）。CCL24+含药血清组较CCL24组显着减少EOS粘附数量（P<0.01）;CCL24+含药血清组与CCL24+空白血清组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。（2）与CCL11组相比,CCL11+SB328437组细胞粘附数目增加,差异具有显着性（P<0.01）;CCL11+LY294002组与之相比数目减少,具有显着性差异（P<0.01）,其他组较之差异无统计学意义（P>0.05）。（3）与CCL24组相比,CCL24+LY294002组嗜酸性粒细胞粘附数目减少,差异具有统计学意义（P<0.05）。CCL24+PD98059组、CCL24+SB328437组、CCL24+SB203580组以及CCL24+PTX组较之粘附数目减少,但差异无统计学意义（P>0.05）。6.在CCL11+拮抗剂条件下,疏风通络方含药血清对EOS与内皮细胞粘附的影响:与CCL11+PD98059相比,CCL11+PD98059+含药血清组与CCL11+PD98059+空白血清组均减少了EOS的粘附数量（P<0.01,P<0.05）,且CCL11+PD98059+含药血清组与CCL11+PD98059+空白清组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）。与CCL11+SB328437相比,CCL11+SB328437+含药血清组EOS粘附数量减少（P<0.05）,与CCL11+SB328437+空白血清组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）。与CCL11+LY294002相比,CCL11+LY294002+含药血清组与CCL11+LY294002+空白血清组均减少EOS粘附,差异有统计学意义（P<0.05）,且CCL11+LY294002+含药血清组与CCL11+LY294002+空白血清组相比,差异具有显着性（P<0.01）。与CCL11+SB203580相比,CCL11+SB203580+含药血清组EOS粘附数量降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,CCL11+SB203580+空白血清组减少EOS粘附,但差异无统计学意义（P>0.05）。与CCL11+PTX组相比,CCL11+PTX+含药血清组与CCL11+PTX+空白血清组EOS粘附数量降低,但CCL11+PTX+含药血清组差异具有显着性（P<0.01）,而CCL11+PTX+空白血清组差异无统计学意义（P>0.05）。7.在CCL24+拮抗剂条件下,疏风通络方含药血清对EOS与内皮细胞粘附的影响:与CCL24+PD98059相比,CCL24+PD98059+含药血清组与CCL24+PD98059+空白血清组EOS粘附数量均减少,CCL24+PD98059+含药血清组差异具有统计学意义（P<0.05）,CCL24+PD98059+空白血清组差异无统计学意义（P>0.05）。与CCL24+SB328437相比,CCL24+SB328437+含药血清组EOS粘附数量减少（P<0.01）,与CCL24+SB328437+空白血清组相比,（P<0.01）。与CCL24+LY294002相比,CCL24+LY294002+含药血清组与CCL24+LY294002+空白血清组均减少EOS粘附,但CCL24+LY294002+含药血清组差异明显（P<0.01）,而CCL24+LY294002+空白血清组差异无统计学意义（P>0.05）。与CCL24+SB203580相比,CCL24+SB203580+含药血清组与CCL24+SB203580+空白血清组都减少EOS粘附数量（P<0.01,P<0.05）,且CCL24+SB203580+含药血清组与CCL24+SB203580+空白血清组之间差异具有统计学意义（P<0.05）。与CCL24+PTX组相比,CCL24+PTX+含药血清组EOS迁移粘附数量下降,但差异无统计学意义（P>0.05）。结论:1.疏风通络方含药血清能够抑制CCL11诱导的嗜酸性粒细胞的迁移,可能与抑制MEK、PI3K、P38MAPK各分子的表达有关;2.疏风通络方含药血清能够抑制CCL24诱导的嗜酸性粒细胞的迁移。3.疏风通络方含药血清能够抑制CCL11诱导的嗜酸性粒细胞与内皮细胞的粘附,其抑制作用与PI3K、P38MAPK和Gα蛋白相关;4.疏风通络方含药血清能够抑制CCL24诱导的嗜酸性粒细胞与内皮细胞的粘附,其抑制作用离不开PI3K、MEK、CCR3、Gα蛋白的调节。
王琼[2]（2021）在《屏风青龙汤对支气管哮喘慢性持续期（虚哮证）的临床疗效观察》文中研究表明目的本课题旨在通过对肺功能检测（FEV1、PEF）、Fe NO、EOS%、ACT评分等客观指标及中医证候积分进行分析,观察屏风青龙汤治疗支气管哮喘慢性持续期的临床疗效,进一步验证该方的安全性,为屏风青龙汤治疗本病提供临床参考、依据和新思路。方法将符合本课题纳入标准的72例患者随机分为对照组（36例）和治疗组（36例）。对照组予沙美特罗替卡松粉吸入剂;治疗组在对照组的基础上加服屏风青龙汤。治疗周期均为4周,随访1月。最后通过SPSS26.0软件对所收集的数据进行统计、分析,观察两组的中医证候积分、ACT评分、Fe NO、肺功能、EOS%、发作次数、安全性指标等观察指标在治疗前后的变化,从而验证屏风青龙汤对支气管哮喘慢性持续期（虚哮证）的有效性和安全性。结果1.一般情况:本课题在研究过程中因部分病例患者未按治疗方案严格执行服用药物、哮喘病情加重、自行服用其他中药等原因被剔除中止后,最终纳入64例;且两组患者的重要基线资料（如:性别、病程、病情轻重程度等）对比,无统计学意义（P>0.05）。2.临床疗效对比:两组患者经治疗后在临床疗效上有显着差异（P<0.05）,且治疗组优于对照组（90.63%>81.25%）,提示屏风青龙汤治疗支气管哮喘慢性持续期（虚哮证）具有显着疗效。3.中医证候积分对比:经治疗后两组患者的中医证候总积分明显降低,且治疗组优于对照组（P<0.05）,提示屏风青龙汤更能改善哮喘（虚哮证）患者的咳嗽、咯清稀痰、喉间哮鸣音等症状。4.ACT评分对比:两组患者经治疗后的ACT评分,较治疗前都得到一定程度的改善,且治疗组优于对照组,有显着性差异（P<0.05）,提示屏风青龙汤与单用西医规范治疗相比更能有效控制哮喘。5.肺功能指标对比:治疗后两组患者的FEV1、PEF值及两组间对比,有统计学意义（P<0.05）,提示屏风青龙汤与单用西医规范治疗相比更能改善哮喘患者肺功能。6.Fe NO指标对比:治疗后两组Fe NO浓度及组间比较,有显着性差异（P<0.05）,提示屏风青龙汤与单用西医规范治疗相比更能有效降低气道炎症。7.EOS%对比:治疗后两组组内及组间的EOS%对比,均有统计学意义（P<0.05）,提示两组均能降低哮喘患者的变态反应性指标,以屏风青龙汤组更甚。8.发作次数对比:两组患者治疗期间及随访期间发作次数对比,均有统计学意义（P<0.05）,提示屏风青龙汤与单用西医规范治疗相比能明显减少哮喘发作,预后较佳。9.安全性指标对比:两组患者治疗前后对比AST、ALT等多种安全性指标,无统计学意义（P>0.05）,且无不良反应,提示屏风青龙汤治疗支气管哮喘是安全可靠的。结论1.屏风青龙汤具有益气固表、温肺化痰之功,联合西医规范治疗,对于改善哮喘患者的咳嗽、咳清稀痰、喉间哮鸣、气虚乏力等临床症状,减轻气道炎症,降低变态反应性指标,改善肺通气等方面更具有优势。2.屏风青龙汤联合西医规范治疗无显着性不良反应、肝肾损伤,安全性高,值得临床参考应用。
代冰[3]（2021）在《儿童支气管哮喘长链非编码RNA差异表达谱的筛选及其功能机制研究》文中研究说明背景:支气管哮喘（bronchial asthma,以下简称哮喘）是当今世界最常见的慢性呼吸道疾病之一,据统计,截至2015年全球约有3.34亿哮喘患者[1]。近年来,儿童哮喘的患病率呈现出逐年攀升的趋势,第三次中国城市儿童哮喘流行病学调查显示,我国城市儿童哮喘患病率已经从十年前的1.97%上升到3.02%,儿童哮喘患病率增幅达到了54.1%[2]。值得注意的是,在我国,大约有1/3的哮喘儿童没有得到及时和明确的诊断,接近半数的儿童哮喘没有得到有效控制,出现肺功能的持续性损害[2]。因此,明确儿童哮喘的发生机制,寻找儿童哮喘的诊断和治疗的靶标意义重大。目前普遍认为,在环境因素刺激下,气道上皮细胞可以通过上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）的形式参与哮喘气道重塑的发生[3,4]。如何调控支气管上皮细胞EMT过程、减轻气道重塑已成为哮喘防治的关注重点。长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）是一类长度大于200个核苷酸的RNA分子,其广泛存在于真核生物体内,参与细胞内多种过程的调控,但却不能编码蛋白质[5]。与编码蛋白质的m RNA相比,它们的表达丰度一般较低,却具有高度保守的二级结构,以及更强的组织细胞类型特异性[6]。正由于这种特性,lncRNA成为了许多疾病诊断、判断预后的潜在的分子标记物,对于其功能机制的研究,则为疾病的治疗提供了靶点。目前已有研究对成人哮喘患者的全血样本或外周血T淋巴细胞进行测序分析,发现lncRNA在哮喘患者中存在差异表达,提示lncRNA可能从表观遗传角度,参与调控了成人哮喘的免疫、气道炎症等多种病理过程[7-11]。然而,对大多数哮喘相关的lncRNA的功能和临床意义的研究仍然有限。因此,分析lncRNA在儿童哮喘中的差异表达谱,寻找与儿童哮喘发病及疾病进展可能相关的lncRNA,将有可能为儿童哮喘的防治,减缓气道重塑的进程,防止肺功能损害进行性加重提供新的方向及治疗靶点。目的:建立儿童哮喘外周血中差异表达的lncRNAs表达谱及m RNAs表达谱,获得差异表达m RNAs的分子功能、参与的生物学过程及其富集的疾病通路信息。同时筛选并验证目标lncRNA在支气管上皮细胞EMT过程中的生物学功能和潜在的调控机制,为进一步探讨儿童哮喘的发生机制和防治提供理论依据及治疗靶点。研究方法:一、应用lncRNA/m RNA基因芯片获得儿童哮喘外周血中差异表达的lncRNAs表达谱,结合生物信息学分析筛选目标lncRNA,并验证目标lncRNA及其关联的mi RNA和m RNA在儿童哮喘患者外周血中的表达变化。1、收集所有研究对象的静脉血5ml,用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞。2、应用Trizol法提取样本总RNA,并进行质量检测。3、选取6例外周血单个核细胞样本（哮喘组和健康对照组各3例）,应用Arraystar Human Lnc RNA Microarray 4.0芯片分析。4、两组样品间具有统计学意义的差异表达Lnc RNAs或差异表达m RNAs通过P-value/FDR筛选。两个样品间差异表达Lnc RNAs或差异表达m RNAs通过Fold Change筛选。差异表达m RNAs进行Pathway和GO的富集分析,使用编写脚本进行层次聚类和关联分析。5、应用生物信息学方法,构建差异表达基因的PPI网络,进一步筛选hub基因。建立差异表达lncRNAs与hub基因的关联性网络图,同时通过mi RWalk数据库寻找hub基因与mi RNA之间的相关基因对,最终将mi RNA-m RNA基因对及lncRNA-mi RNA基因对取交集,获取lncRNA-mi RNA-m RNA基因对,筛选出目标lncRNA。6、应用实时定量反转录聚合酶链式反应（q RT-PCR）技术,扩大样本量,在哮喘患儿和健康对照儿童的外周血样本中验证目标lncRNA及其关联的mi RNA和m RNA的表达情况。二、lncRNA PTTG3P对支气管上皮细胞EMT及其增殖迁移能力的影响1、本课题第一部分的研究最终筛选并确定lncRNA PTTG3P可能在儿童哮喘中发挥重要作用。体外培养人支气管上皮细胞（16HBE细胞）系,建立细胞模型。应用TGF-β1刺激16HBE细胞,显微镜下观察细胞形态,Westen Blot检测E-cadherin蛋白、Vimentin蛋白及α-SMA蛋白等EMT标志物的表达情况。明确TGF-β1诱导16HBE细胞发生EMT的最佳浓度及最佳作用时间。2、TGF-β1诱导支气管上皮细胞EMT时,应用q RT-PCR检测lncRNA PTTG3P的表达变化情况。3、通过小干扰RNA技术（small interference RNA,si RNA）敲低lncRNA PTTG3P,Westen Blot技术检测E-cadherin蛋白、Vimentin蛋白及α-SMA蛋白等EMT标志物的变化情况并观察细胞形态改变。同时应用CCK-8实验及transwell实验检测支气管上皮细胞的增殖及迁移能力,明确敲低lncRNA PTTG3P对支气管上皮细胞EMT及其增殖、迁移能力的影响。三、lncRNA PTTG3P在支气管上皮细胞EMT中作用机制的研究1、本课题第一部分的研究最终筛选并确定lncRNA PTTG3P可能在儿童哮喘中发挥重要作用,同时结合生物信息学分析及q RT-PCR的大样本验证,发现mi R-192-3p及CCNB1在儿童哮喘中也存在差异表达,其可能成为受lncRNA PTTG3P调控的下游作用因子,于是在TGF-β1诱导的支气管上皮细胞EMT的体外模型中采用q RT-PCR及Westen Blot方法分别检测其表达水平。2、通过si RNA技术敲低lncRNA PTTG3P,q RT-PCR及Western Blot方法分别检测mi R-192-3p及CCNB1的表达水平,明确lncRNA PTTG3P对mi R-192-3p及CCNB1表达的影响。3、过表达mi R-192-3p,应用Westen Blot方法检测16HBE细胞中E-cadherin蛋白、α-SMA蛋白及Vimentin蛋白的变化情况并观察细胞形态变化,明确mi R-192-3p对支气管上皮细胞EMT的调控作用。4、过表达mi R-192-3p,应用Westen Blot及q RT-PCR方法检测CCNB1的表达水平,明确mi R-192-3p对CCNB1的调控作用。5、采用双荧光素酶报告基因检测实验证明mi R-192-3p与lncRNA PTTG3P及CCNB1的直接结合。6、通过敲低lncRNA PTTG3P同时低表达mi R-192-3p的挽救实验,来验证敲低lncRNA PTTG3P促进支气管上皮细胞EMT的作用可以被低表达mi R-192-3p所拮抗,进一步证明lncRNA PTTG3P可能通过吸附mi R-192-3p,上调CCNB1,进而促进支气管上皮细胞EMT的作用机制。研究结果:一、儿童哮喘外周血中存在特异的lncRNAs表达谱,lncRNA PTTG3P在儿童哮喘患者外周血中高表达,mi R-192-3p在儿童哮喘患者外周血中低表达,CCNB1在儿童哮喘患者外周血中高表达。1、筛选得到差异表达的1nc RNAs共397个,其中193个lncRNAs表达上调,204个lncRNAs表达下调。筛选得到差异表达的m RNAs共477个,其中398个m RNAs表达上调,79个m RNAs表达下调。2、差异表达基因的GO分析提示,差异表达的m RNAs在“细胞周期”、“与蛋白质结合”等出现富集;Pathway分析提示,差异表达的m RNAs在细胞周期、免疫调节、p53等相关信号通路富集。3、基因芯片和q RT-PCR方法双重证实lncRNA PTTG3P在儿童哮喘患者外周血中的高表达,通过生物信息学分析,进一步发现与mi R-192-3p和CCNB1可能与PTTG3P相关联。4、q RT-PCR验证mi R-192-3p在哮喘组中的表达下调（p=0.024）,而CCNB1在哮喘组中的表达上调,差异具有显着性（p<0.0001）。二、在体外TGF-β1诱导16HBE细胞的EMT模型中,敲低lncRNA PTTG3P抑制EMT过程,抑制16HBE细胞的增殖和迁移能力。1、予不同浓度TGF-β1处理16HBE细胞48小时,细胞中E-cadherin蛋白表达水平随TGF-β1浓度升高而逐渐下降（p<0.01）,Vimentin和α-SMA蛋白表达水平逐渐升高（p<0.01）;予10ng/ml TGF-β1处理16HBE细胞不同时间后,细胞中E-cadherin蛋白表达水平随TGF-β1作用时间延长而逐渐下降（p<0.01）,Vimentin和α-SMA蛋白表达水平逐渐升高（p<0.01）;从而筛选出TGF-β1最佳浓度为10ng/ml及最佳作用时间为48小时。予10ng/ml TGF-β1处理16HBE细胞24小时后,细胞形态即由圆形或多边形、铺路石样,变为长梭形,细胞间隙增宽,出现EMT改变。2、予10ng/ml TGF-β1处理细胞48小时后,16HBE细胞中lncRNA PTTG3P表达显着上调（p<0.05）。3、通过si RNA技术筛选出敲低效率最高的si-PTTG3P-362,可显着下调lncRNA PTTG3P的表达（p<0.005）。敲低PTTG3P可以上调上皮标志物E-cadherin蛋白表达（p<0.05）,下调间质细胞标志物Vimentin和α-SMA蛋白表达（p<0.05）。此外,敲低lncRNA PTTG3P还有助于维持细胞上皮样形态。4、CCK-8实验及transwell实验结果显示,敲低lncRNA PTTG3P可抑制16HBE细胞的增殖和迁移能力（p<0.05）。三、在体外TGF-β1诱导16HBE细胞的EMT模型中,过表达mi R-192-3p下调CCNB1的表达,抑制EMT过程;低表达mi R-192-3p可以拮抗敲低lncRNA PTTG3P对EMT的抑制作用及CCNB1蛋白表达的影响。1、TGF-β1诱导16HBE细胞的EMT模型中,mi R-192-3p表达量随时间延长而逐渐减少（p<0.05）;CCNB1表达量随时间延长而逐渐增加（p<0.05）。2、在TGF-β1诱导的16HBE细胞模型中,敲低lncRNA PTTG3P可下调CCNB1蛋白及m RNA的表达（p<0.05）,同时上调mi R-192-3p的表达（p<0.01）。3、在TGF-β1诱导的16HBE细胞模型中,过表达mi R-192-3p可以上调上皮标志物E-cadherin蛋白的表达（p<0.01）,下调间质标志物Vimentin和α-SMA蛋白的表达（p<0.01）。且过表达mi R-192-3p还有助于16HBE细胞上皮样形态的维持。4、在TGF-β1诱导的16HBE细胞中,过表达mi R-192-3p可下调CCNB1蛋白和m RNA的表达（p<0.05）。5、双荧光素酶报告基因检测结果显示,mi R-192-3p可显着下调p SI-check2-PTTG3P及p SI-check2-CCNB1-3’UTR荧光素酶活性（p<0.05）;而在p SI-check2-PTTG3P-mut及p SI-check2-CCNB1-3’UTR-mut组二者荧光素酶活性无差异。提示mi R-192-3p可以与lncRNA PTTG3P及CCNB1的3’UTR端直接结合。6、与单独转染si-PTTG3P组相比,同时转染si-PTTG3P和mi R-192-3p inhibitor组中E-cadherin蛋白表达减少（p<0.05）,Vimentin,α-SMA及CCNB1蛋白表达增加（p<0.05）,提示低表达mi R-192-3p可以拮抗敲低lncRNA PTTG3P对TGF-β1诱导的16HBE细胞EMT及CCNB1蛋白表达的影响,说明lncRNA PTTG3P促进TGF-β1诱导的16HBE细胞发生EMT,可能是通过对mi R-192-3p及CCNB1的调控而实现的。研究结论:1、lncRNA/m RNA基因芯片筛选得到lncRNA PTTG3P在儿童哮喘患者外周血中高表达,与lncRNA PTTG3P相关的CCNB1 m RNA在儿童哮喘患者外周血中同样高表达。2、基于lncRNA PTTG3P和CCNB1 m RNA的生物信息学分析筛选得到mi R-192-3p,mi R-192-3p在儿童哮喘患者外周血中低表达。3、TGF-β1诱导支气管上皮细胞可发生EMT改变,并且TGF-β1诱导支气管上皮细胞发生EMT时,lncRNA PTTG3P的表达上调。4、lncRNA PTTG3P能够促进TGF-β1诱导的支气管上皮细胞EMT过程,并且能够增强支气管上皮细胞的增殖和迁移能力。5、TGF-β1诱导支气管上皮细胞发生EMT时,mi R-192-3p的表达下调;mi R-192-3p能够靶向调控CCNB1,抑制TGF-β1诱导的支气管上皮细胞EMT过程。6、lncRNA PTTG3P作为ce RNA,通过与mi R-192-3p竞争性结合,从而靶向调控CCNB1,进一步促进支气管上皮细胞EMT,参与哮喘的发生发展过程。
代冰[4]（2021）在《儿童支气管哮喘长链非编码RNA差异表达谱的筛选及其功能机制研究》文中研究指明背景:支气管哮喘（bronchial asthma,以下简称哮喘）是当今世界最常见的慢性呼吸道疾病之一,据统计,截至2015年全球约有3.34亿哮喘患者[1]。近年来,儿童哮喘的患病率呈现出逐年攀升的趋势,第三次中国城市儿童哮喘流行病学调查显示,我国城市儿童哮喘患病率已经从十年前的1.97%上升到3.02%,儿童哮喘患病率增幅达到了54.1%[2]。值得注意的是,在我国,大约有1/3的哮喘儿童没有得到及时和明确的诊断,接近半数的儿童哮喘没有得到有效控制,出现肺功能的持续性损害[2]。因此,明确儿童哮喘的发生机制,寻找儿童哮喘的诊断和治疗的靶标意义重大。目前普遍认为,在环境因素刺激下,气道上皮细胞可以通过上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）的形式参与哮喘气道重塑的发生[3,4]。如何调控支气管上皮细胞EMT过程、减轻气道重塑已成为哮喘防治的关注重点。长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）是一类长度大于200个核苷酸的RNA分子,其广泛存在于真核生物体内,参与细胞内多种过程的调控,但却不能编码蛋白质[5]。与编码蛋白质的m RNA相比,它们的表达丰度一般较低,却具有高度保守的二级结构,以及更强的组织细胞类型特异性[6]。正由于这种特性,lncRNA成为了许多疾病诊断、判断预后的潜在的分子标记物,对于其功能机制的研究,则为疾病的治疗提供了靶点。目前已有研究对成人哮喘患者的全血样本或外周血T淋巴细胞进行测序分析,发现lncRNA在哮喘患者中存在差异表达,提示lncRNA可能从表观遗传角度,参与调控了成人哮喘的免疫、气道炎症等多种病理过程[7-11]。然而,对大多数哮喘相关的lncRNA的功能和临床意义的研究仍然有限。因此,分析lncRNA在儿童哮喘中的差异表达谱,寻找与儿童哮喘发病及疾病进展可能相关的lncRNA,将有可能为儿童哮喘的防治,减缓气道重塑的进程,防止肺功能损害进行性加重提供新的方向及治疗靶点。目的:建立儿童哮喘外周血中差异表达的lncRNAs表达谱及m RNAs表达谱,获得差异表达m RNAs的分子功能、参与的生物学过程及其富集的疾病通路信息。同时筛选并验证目标lncRNA在支气管上皮细胞EMT过程中的生物学功能和潜在的调控机制,为进一步探讨儿童哮喘的发生机制和防治提供理论依据及治疗靶点。研究方法:一、应用lncRNA/m RNA基因芯片获得儿童哮喘外周血中差异表达的lncRNAs表达谱,结合生物信息学分析筛选目标lncRNA,并验证目标lncRNA及其关联的mi RNA和m RNA在儿童哮喘患者外周血中的表达变化。1、收集所有研究对象的静脉血5ml,用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞。2、应用Trizol法提取样本总RNA,并进行质量检测。3、选取6例外周血单个核细胞样本（哮喘组和健康对照组各3例）,应用Arraystar Human Lnc RNA Microarray 4.0芯片分析。4、两组样品间具有统计学意义的差异表达Lnc RNAs或差异表达m RNAs通过P-value/FDR筛选。两个样品间差异表达Lnc RNAs或差异表达m RNAs通过Fold Change筛选。差异表达m RNAs进行Pathway和GO的富集分析,使用编写脚本进行层次聚类和关联分析。5、应用生物信息学方法,构建差异表达基因的PPI网络,进一步筛选hub基因。建立差异表达lncRNAs与hub基因的关联性网络图,同时通过mi RWalk数据库寻找hub基因与mi RNA之间的相关基因对,最终将mi RNA-m RNA基因对及lncRNA-mi RNA基因对取交集,获取lncRNA-mi RNA-m RNA基因对,筛选出目标lncRNA。6、应用实时定量反转录聚合酶链式反应（q RT-PCR）技术,扩大样本量,在哮喘患儿和健康对照儿童的外周血样本中验证目标lncRNA及其关联的mi RNA和m RNA的表达情况。二、lncRNA PTTG3P对支气管上皮细胞EMT及其增殖迁移能力的影响1、本课题第一部分的研究最终筛选并确定lncRNA PTTG3P可能在儿童哮喘中发挥重要作用。体外培养人支气管上皮细胞（16HBE细胞）系,建立细胞模型。应用TGF-β1刺激16HBE细胞,显微镜下观察细胞形态,Westen Blot检测E-cadherin蛋白、Vimentin蛋白及α-SMA蛋白等EMT标志物的表达情况。明确TGF-β1诱导16HBE细胞发生EMT的最佳浓度及最佳作用时间。2、TGF-β1诱导支气管上皮细胞EMT时,应用q RT-PCR检测lncRNA PTTG3P的表达变化情况。3、通过小干扰RNA技术（small interference RNA,si RNA）敲低lncRNA PTTG3P,Westen Blot技术检测E-cadherin蛋白、Vimentin蛋白及α-SMA蛋白等EMT标志物的变化情况并观察细胞形态改变。同时应用CCK-8实验及transwell实验检测支气管上皮细胞的增殖及迁移能力,明确敲低lncRNA PTTG3P对支气管上皮细胞EMT及其增殖、迁移能力的影响。三、lncRNA PTTG3P在支气管上皮细胞EMT中作用机制的研究1、本课题第一部分的研究最终筛选并确定lncRNA PTTG3P可能在儿童哮喘中发挥重要作用,同时结合生物信息学分析及q RT-PCR的大样本验证,发现mi R-192-3p及CCNB1在儿童哮喘中也存在差异表达,其可能成为受lncRNA PTTG3P调控的下游作用因子,于是在TGF-β1诱导的支气管上皮细胞EMT的体外模型中采用q RT-PCR及Westen Blot方法分别检测其表达水平。2、通过si RNA技术敲低lncRNA PTTG3P,q RT-PCR及Western Blot方法分别检测mi R-192-3p及CCNB1的表达水平,明确lncRNA PTTG3P对mi R-192-3p及CCNB1表达的影响。3、过表达mi R-192-3p,应用Westen Blot方法检测16HBE细胞中E-cadherin蛋白、α-SMA蛋白及Vimentin蛋白的变化情况并观察细胞形态变化,明确mi R-192-3p对支气管上皮细胞EMT的调控作用。4、过表达mi R-192-3p,应用Westen Blot及q RT-PCR方法检测CCNB1的表达水平,明确mi R-192-3p对CCNB1的调控作用。5、采用双荧光素酶报告基因检测实验证明mi R-192-3p与lncRNA PTTG3P及CCNB1的直接结合。6、通过敲低lncRNA PTTG3P同时低表达mi R-192-3p的挽救实验,来验证敲低lncRNA PTTG3P促进支气管上皮细胞EMT的作用可以被低表达mi R-192-3p所拮抗,进一步证明lncRNA PTTG3P可能通过吸附mi R-192-3p,上调CCNB1,进而促进支气管上皮细胞EMT的作用机制。研究结果:一、儿童哮喘外周血中存在特异的lncRNAs表达谱,lncRNA PTTG3P在儿童哮喘患者外周血中高表达,mi R-192-3p在儿童哮喘患者外周血中低表达,CCNB1在儿童哮喘患者外周血中高表达。1、筛选得到差异表达的1nc RNAs共397个,其中193个lncRNAs表达上调,204个lncRNAs表达下调。筛选得到差异表达的m RNAs共477个,其中398个m RNAs表达上调,79个m RNAs表达下调。2、差异表达基因的GO分析提示,差异表达的m RNAs在“细胞周期”、“与蛋白质结合”等出现富集;Pathway分析提示,差异表达的m RNAs在细胞周期、免疫调节、p53等相关信号通路富集。3、基因芯片和q RT-PCR方法双重证实lncRNA PTTG3P在儿童哮喘患者外周血中的高表达,通过生物信息学分析,进一步发现与mi R-192-3p和CCNB1可能与PTTG3P相关联。4、q RT-PCR验证mi R-192-3p在哮喘组中的表达下调（p=0.024）,而CCNB1在哮喘组中的表达上调,差异具有显着性（p<0.0001）。二、在体外TGF-β1诱导16HBE细胞的EMT模型中,敲低lncRNA PTTG3P抑制EMT过程,抑制16HBE细胞的增殖和迁移能力。1、予不同浓度TGF-β1处理16HBE细胞48小时,细胞中E-cadherin蛋白表达水平随TGF-β1浓度升高而逐渐下降（p<0.01）,Vimentin和α-SMA蛋白表达水平逐渐升高（p<0.01）;予10ng/ml TGF-β1处理16HBE细胞不同时间后,细胞中E-cadherin蛋白表达水平随TGF-β1作用时间延长而逐渐下降（p<0.01）,Vimentin和α-SMA蛋白表达水平逐渐升高（p<0.01）;从而筛选出TGF-β1最佳浓度为10ng/ml及最佳作用时间为48小时。予10ng/ml TGF-β1处理16HBE细胞24小时后,细胞形态即由圆形或多边形、铺路石样,变为长梭形,细胞间隙增宽,出现EMT改变。2、予10ng/ml TGF-β1处理细胞48小时后,16HBE细胞中lncRNA PTTG3P表达显着上调（p<0.05）。3、通过si RNA技术筛选出敲低效率最高的si-PTTG3P-362,可显着下调lncRNA PTTG3P的表达（p<0.005）。敲低PTTG3P可以上调上皮标志物E-cadherin蛋白表达（p<0.05）,下调间质细胞标志物Vimentin和α-SMA蛋白表达（p<0.05）。此外,敲低lncRNA PTTG3P还有助于维持细胞上皮样形态。4、CCK-8实验及transwell实验结果显示,敲低lncRNA PTTG3P可抑制16HBE细胞的增殖和迁移能力（p<0.05）。三、在体外TGF-β1诱导16HBE细胞的EMT模型中,过表达mi R-192-3p下调CCNB1的表达,抑制EMT过程;低表达mi R-192-3p可以拮抗敲低lncRNA PTTG3P对EMT的抑制作用及CCNB1蛋白表达的影响。1、TGF-β1诱导16HBE细胞的EMT模型中,mi R-192-3p表达量随时间延长而逐渐减少（p<0.05）;CCNB1表达量随时间延长而逐渐增加（p<0.05）。2、在TGF-β1诱导的16HBE细胞模型中,敲低lncRNA PTTG3P可下调CCNB1蛋白及m RNA的表达（p<0.05）,同时上调mi R-192-3p的表达（p<0.01）。3、在TGF-β1诱导的16HBE细胞模型中,过表达mi R-192-3p可以上调上皮标志物E-cadherin蛋白的表达（p<0.01）,下调间质标志物Vimentin和α-SMA蛋白的表达（p<0.01）。且过表达mi R-192-3p还有助于16HBE细胞上皮样形态的维持。4、在TGF-β1诱导的16HBE细胞中,过表达mi R-192-3p可下调CCNB1蛋白和m RNA的表达（p<0.05）。5、双荧光素酶报告基因检测结果显示,mi R-192-3p可显着下调p SI-check2-PTTG3P及p SI-check2-CCNB1-3’UTR荧光素酶活性（p<0.05）;而在p SI-check2-PTTG3P-mut及p SI-check2-CCNB1-3’UTR-mut组二者荧光素酶活性无差异。提示mi R-192-3p可以与lncRNA PTTG3P及CCNB1的3’UTR端直接结合。6、与单独转染si-PTTG3P组相比,同时转染si-PTTG3P和mi R-192-3p inhibitor组中E-cadherin蛋白表达减少（p<0.05）,Vimentin,α-SMA及CCNB1蛋白表达增加（p<0.05）,提示低表达mi R-192-3p可以拮抗敲低lncRNA PTTG3P对TGF-β1诱导的16HBE细胞EMT及CCNB1蛋白表达的影响,说明lncRNA PTTG3P促进TGF-β1诱导的16HBE细胞发生EMT,可能是通过对mi R-192-3p及CCNB1的调控而实现的。研究结论:1、lncRNA/m RNA基因芯片筛选得到lncRNA PTTG3P在儿童哮喘患者外周血中高表达,与lncRNA PTTG3P相关的CCNB1 m RNA在儿童哮喘患者外周血中同样高表达。2、基于lncRNA PTTG3P和CCNB1 m RNA的生物信息学分析筛选得到mi R-192-3p,mi R-192-3p在儿童哮喘患者外周血中低表达。3、TGF-β1诱导支气管上皮细胞可发生EMT改变,并且TGF-β1诱导支气管上皮细胞发生EMT时,lncRNA PTTG3P的表达上调。4、lncRNA PTTG3P能够促进TGF-β1诱导的支气管上皮细胞EMT过程,并且能够增强支气管上皮细胞的增殖和迁移能力。5、TGF-β1诱导支气管上皮细胞发生EMT时,mi R-192-3p的表达下调;mi R-192-3p能够靶向调控CCNB1,抑制TGF-β1诱导的支气管上皮细胞EMT过程。6、lncRNA PTTG3P作为ce RNA,通过与mi R-192-3p竞争性结合,从而靶向调控CCNB1,进一步促进支气管上皮细胞EMT,参与哮喘的发生发展过程。
李丽君[5]（2020）在《巴芪辛祛风除痒止咳颗粒治疗CVA风邪恋肺兼肺肾两虚证的临床观察》文中研究说明目的:本课题通过观察巴芪辛祛风除痒止咳颗粒对咳嗽变异性哮喘风邪恋肺兼肺肾两虚证患者的外周血嗜酸性粒细胞计数EOS、皮质醇及PEF日间变异率、FEV1%pred、咳嗽症状积分、中医证候积分的影响,进一步评价巴芪辛祛风除痒止咳颗粒治疗咳嗽变异性哮喘的临床疗效,并探索其作用机制。方法:收集符合咳嗽变异性哮喘风邪恋肺兼肺肾两虚证患者共60例,根据随机数字表随机分成对照组和治疗组,每组各30例,其中对照组予信必可都保吸入剂（布地奈德160ug/福莫特罗4.5ug）治疗,治疗组予中药巴芪辛祛风除痒止咳颗粒治疗;并记录两组在为期4周的疗程中其治疗前后外周血EOS、血清皮质醇水平、FEV1%pred及PEF日间变异率、治疗前后的咳嗽症状积分和中医证候积分,并运用SPSS23.0对数据进行整合,分析比较两组临床治疗效果。结果:本研究收集的60例CVA患者中,对照组30例,治疗组30例,各组在性别、年龄、病程中的差异均无统计学意义（P>0.05）。两组治疗前后的FEV1%pred与PEF日间变异率、外周血EOS作组间比较,差异均有显着的统计学意义（P<0.01）,但两组组间比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。两组治疗前后血清皮质醇作组内比较,差异有统计学意义（P<0.05）,对两组治疗前后血清皮质醇差值作组间比较,差异有统计学意义（P<0.05）。两组治疗前、治疗1周、治疗2周咳嗽症状积分作组内比较,差异有统计学意义（P<0.05）,对治疗2周后与治疗前的咳嗽症状积分差值作组间比较,差异无统计学意义（P>0.05）。两组治疗前后中医证候积分作组内比较,差异有统计学差异（P<0.05）,两组治疗前后中医证候积分差值作组间比较,差异有显着统计学意义（P<0.01）。对两组患者临床中医疗效作组间比较,差异虽无统计学意义（P>0.05）,但对照组显效率为80%,治疗组显效率为96.6%,治疗组显效率明显高于对照组。两组治疗前后相关安全指标均正常,未见肝肾功能异常及其他明显不良反应。结论:1.巴芪辛祛风除痒止咳颗粒具有与信必可都保相似的改善患者肺功能及外周血嗜酸性粒细胞计数指标,减轻气道炎症,改善临床症状,疗效肯定。2.巴芪辛祛风除痒止咳颗粒在一定程度上可以提高CVA患者的血清皮质醇水平。3.风邪恋肺兼肺肾两虚型CVA患者分别经巴芪辛祛风除痒止咳颗粒与信必可都保治疗4周后,两药物均能在治疗的早期明显改善患者咳嗽症状,对包括咳嗽在内的其他中医症状如咽干咽痒、短气息促、神疲乏力、畏寒肢冷、腰膝酸软等,中药巴芪辛祛风除痒止咳颗粒对整体中医证候的改善更优于西药信必可都保。
韩文博[6]（2020）在《基于“络风内动”病机理论的风邪实质探讨及冠心病风邪临床表征研究》文中研究说明背景:随着全球经济发展和城市化进程,人口老龄化日益严重,冠状动脉粥样硬化性心脏病（简称冠心病）已成为世界范围内的公共卫生问题。目前,我国冠心病死亡率仍呈上升趋势,冠心病防治依然面临严峻挑战。中医药在改善冠心病症状、预防冠心病并发症方面具有显着优势,近年来学者们逐渐认识到风邪的重要性,从风论治冠心病也具有确切疗效,然而有关风邪与冠心病的临床研究有限,探索风邪对冠心病心血管事件的影响,对冠心病中医药防治策略具有重要意义。目的:通过文献分析对现代文献中从风论治冠心病的证候分布及用药规律进行总结,为冠心病风邪致病的理论和临床实践提供参考;基于“络风内动”病机理论,以风速和炎症因子为切入点,探讨风邪可能的实质内涵及风邪对冠心病心血管事件的影响;探索冠心病风邪致病的临床表征,为冠心病高危人群识别和预警模型构建提供有力依据。方法:1.基于现代文献的从风论治冠心病证治规律研究。检索中国期刊全文数据库（CNKI）、万方数据库（Wanfang Data）及维普中文期刊服务平台（VIP）中与从风论治冠心病相关的现代文献,对证候及用药规律进行分析。2.基于“络风内动”病机理论的外风与心血管事件回顾性研究。收集铜川地区北京中医药大学孙思邈医院2017年7月-2018年7月发生心血管事件的住院冠心病病例,及同期气象资料和大气污染数据,着重分析风速与心血管事件相关性,探讨外风与风速、心血管事件的内在联系。3.基于“络风内动”病机理论的内风与急性冠脉综合征病例对照研究。纳入稳定型心绞痛和急性冠脉综合征两组病例,收集患者基线资料并分离血清,用酶联免疫吸附法检测两组hs-CRP、IL-6、MMP-9、GDF-15的浓度进行对比,探讨内风与炎症因子、急性冠脉综合征的内在联系。4.基于“络风内动”病机理论的冠心病风邪临床表征横断面研究。将冠心病气虚血瘀证病例分为稳定型心绞痛组与急性冠脉综合征组,对比两组的中医证候计分及症状、舌象、脉象特点,总结出风邪致病的临床表征,并通过ROC曲线评估风邪临床表征的诊断效能;5.基于“络风内动”病机理论的冠心病风邪临床表征前瞻性队列研究。对纳入的冠心病气虚血瘀证病例进行随访,分析风邪临床表征与6个月内心血管事件的相关性。结果:1.基于现代文献的从风论治冠心病证治规律研究。共检索到文献1595篇,最终纳入20篇文献。从风论治冠心病最常见的中医证型为气虚血瘀证;风邪侵袭最常见的病位为心络;治疗冠心病常用风药为黄芪、川芎、羌活、威灵仙、芍药、葛根。2.基于“络风内动”病机理论的外风与心血管事件回顾性研究。纳入650例冠心病患者,男、女性各325例,总体平均年龄69.34岁。结局方面,650例患者累计发生心血管事件754次,相对于低风速（0.70-1.90 m/s）,中等风速（2.00-2.60 m/s）条件下发生心血管事件的风险显着增加,OR 3.29（95%CI 1.49-7.26）;曲线拟合结果显示,当风速小于2.3 m/s时,随着风速增高,心血管事件风险显着增加,OR2.58（95%CI 1.13-5.89）。3.基于“络风内动”病机理论的内风与急性冠脉综合征病例对照研究。纳入170例冠心病气虚血瘀证病例,应用倾向性评分1:1匹配后,最终稳定型心绞痛组和急性冠脉综合征组各57例进入统计分析。总人群平均年龄62.35岁,男性占比72.81%。结局方面,hs-CRP、IL-6、GDF-15浓度与急性冠脉综合征风险呈显着线性相关（P<0.05）;曲线拟合结果显示,MMP-9>1200 ng/ml 时增加 ACS 风险,OR 1.004（95%CI 1.000-1.007）。4.基于“络风内动”病机理论的冠心病风邪临床表征横断面研究。纳入215例冠心病气虚血瘀证病例,平均年龄62.68岁,男性153例,女性62例。对比稳定型心绞痛组和急性冠脉综合征组的临床表征,结果显示,两组在头痛、弦脉、2个以上心绞痛部位数、2种以上心绞痛性质方面差异显着（P<0.05）,可作为冠心病风邪致病的临床表征。ROC曲线结果显示,加入风邪临床表征的模型在识别急性冠脉综合征方面优于基础模型,两种模型ROC曲线下面积差异显着（P<0.05）。5.基于“络风内动”病机理论的冠心病风邪临床表征前瞻性队列研究。纳入215例冠心病气虚血瘀证病例。随访结果显示,共发生心血管事件31例,失访13例,最终纳入分析202例。相对于无风邪临床表征组,各风邪临床表征组的心血管事件风险均有所增加,组间有一定差异（P=0.05）,其中同时具有4种风邪临床表征的人群心血管事件风险显着增加（P<0.05）。结论:1.风邪与冠心病气虚血瘀证密切相关且最易侵袭心络,“益气活血、祛风通络”是从风论治冠心病的重要治法。2.异常风速作为外风的重要表现形式,可能是外风致病的核心要素之一,炎症因子则可能是内风致病的核心要素之一。3.异常风速、炎症因子与心血管事件密切相关,这种联系与“络风内动”病机理论具有内在一致性。4.“头痛”、“脉弦”、“2个以上心绞痛部位”、“2种以上心绞痛性质”是冠心病风邪致病的临床表征,这些临床表征显着增加了 6个月内的心血管事件风险。
邓丽[7]（2020）在《基于数据挖掘的沈其霖教授治疗慢性咳嗽用药经验及药效学研究》文中研究说明全文旨在对沈其霖教授的临床病例数据进行研究,分析沈其霖教授治疗慢性咳嗽的组方用药、配伍规律,并对核心处方—久嗽汤进行初步的药效学实验,本研究主要围绕以下2个方面对工作进行展开:1.基于数据挖掘方法对中医药治疗慢性咳嗽总结用药经验及筛选核心处方目的:利用数据挖掘方法,以导师沈其霖教授门诊数据为例,分析其辨治慢性咳嗽的中医用药规律,筛选核心处方。方法:通过汇总导师所治慢性咳嗽患者的标准病例共93例,采用Microsoft Office Excel 2010 软件建立数据库,运用 SPSS Statistics 23.0 软件包对数据进行频数分析,选择SPSS Modeler Sub软件中的Apriori算法进行关联规则分析,总结导师常用药及核心处方。结果:本次研究总共纳入93个病例,其中女性患者居多;青中年患者居多;常见症状为阵咳、少痰、咳嗽、咽部异物感、干咳、咽痒、受凉后咳嗽、气紧、夜间咳嗽、无痰、怕冷、胸闷;常见舌脉为苔白、脉数、脉滑、苔黄、脉弦;常用药物为甘草、苦杏仁、黄芩、蝉蜕、牛蒡子、百部、桔梗、紫菀、麻黄、款冬花、白前、半夏。统计所有药物性味、归经结果显示温热药物的使用率稍高于寒凉药物;苦味、甘味、辛味药较多;归肺经、胃经、肝经、脾经药物的偏多。利用软件中“关联分析”功能及复杂网络分析法挖掘沈其霖教授治疗慢性咳嗽的核心处方1个,处方药物组成为:麻黄、苦杏仁、紫菀、款冬花、百部、白前、牛蒡子、蝉蜕、五味子、黄芩、甘草、桔梗、半夏。2.核心处方的药效学实验研究目的:观察核心处方——久嗽汤对模型小鼠的止咳、抗炎、抗变态反应作用,为临床用药提供药理学依据,为新药研发提供重要参考。方法:通过浓氨水引咳法的致咳模型,分别记录小鼠咳嗽潜伏期及小鼠3分钟内的咳嗽次数考察久嗽汤的止咳作用;通过冰醋酸为致炎剂引起小鼠腹腔毛细血管通透性增高,观察小鼠腹腔渗出液情况考察久嗽汤的抗炎作用;通过二甲苯为致炎剂引起小鼠耳廓肿胀,观察小鼠耳肿胀抑制情况考察久嗽汤的抗炎作用;通过采用2,4-二硝基氟苯为致敏剂,观察其对小鼠耳肿胀度、脾、胸腺的作用考察其抗变态反应作用。结果:止咳实验,结果显示久嗽汤大、中、小剂量组可极显着降低小鼠咳嗽次数（P<0.01）,作用强度呈量效关系;抗炎实验结果显示久嗽汤大剂量组可显着降低腹腔毛细血管通透性（P<0.05）;久嗽汤大、中剂量组可显着降低二甲苯所致小鼠耳廓肿胀（P<0.05）;抗变态反应实验,显示久嗽汤大、中剂量组,可极显着降低降低2,4-二硝基氟苯所致小鼠耳廓肿胀度（P<0.01）;久嗽汤各剂量组对模型小鼠脾指数、胸腺指数与模型组比较无显着性（P>0.05）。结论:基于数据挖掘技术,总结沈其霖教授在治疗慢性咳嗽临证时用药寒热并用,总以“祛风散寒,降气化痰,调畅气机”贯彻始终;兼顾脾胃功能和肝气;强调辨病与辨证结合辨治慢性咳嗽。核心处方组成为:麻黄、苦杏仁、紫菀、款冬花、百部、白前、牛蒡子、蝉蜕、五味子、黄芩、甘草、桔梗、半夏。结合经导师优化的核心处方——久嗽汤的药效学实验研究结果表明:久嗽汤有明显缓解和治疗咳嗽的作用;具有一定的抗炎和抗变态反应。久嗽汤的上述作用与药物的剂量呈一定的相关性。
王鹏丽[8]（2020）在《三拗汤加全蝎、僵蚕干预咳嗽变异性哮喘网络调控特点及配伍效应机制研究》文中研究说明目的:咳嗽变异性哮喘是慢性咳嗽最常见的原因,可归属于中医“风咳”范畴。本研究通过古今文献梳理,探讨古今风咳理论及辨治特点;从网络方剂学的角度阐释三拗汤加全蝎、僵蚕及拆方干预咳嗽变异性哮喘的网络调控机制特点;通过体内、体外实验研究,探讨三拗汤加全蝎、僵蚕及拆方干预咳嗽变异性哮喘的效应与机制特点。方法:1.收集整理古今风咳相关文献,梳理古今风咳的理论源流、病因病机及治法特点。2.基于网络方剂学的研究策略,使用开源数据库、在线分析平台、已发表文献等资源,检索、整理三拗汤加全蝎、僵蚕（全方）及拆方（三拗汤、僵蚕-全蝎）干预咳嗽变异性哮喘（CVA）的潜在靶点信息,分别对潜在靶点进行GO富集分析、KEGG通路富集分析、PPI网络构建及拓扑参数分析等,阐述全方干预CVA的网络调控机制特点,并比较拆方干预CVA的网络机制特点与差异。3.采用OVA致敏、激发建立CVA小鼠模型,使用辣椒素吸入法检测小鼠5 min内咳嗽次数,检测外周血嗜酸性粒细胞（EOS）计数、肺泡灌洗液中白细胞总数,全身体积描计系统（WBP）检测气道高反应性改变,HE染色法观察肺组织病理改变,ELISA法测定肺泡灌洗液中细胞因子（IL-4、IL-13）、神经生长因子（NGF）、降钙素基因相关肽（CGRP）及前列腺素E2（PGE2）水平变化,qPCR法检测肺组织和延脑组织中TRPA1、TRPV1、TRPV5基因表达,以及Western blot法测定肺组织和延脑组织中TRPA1、TRPV1、TRPV5蛋白表达,探讨三拗汤加全蝎、僵蚕干预CVA的效应机制,以及拆方配伍干预CVA的效应机制特点与差异。4.建立二氧化硫衍生物致人支气管上皮细胞（16HBE）炎症损伤模型,使用MTT法筛选各药物细胞毒性及三拗汤加全蝎、僵蚕对细胞存活率的影响,流式细胞术检测细胞活性氧自由基水平的改变,qPCR法检测细胞TRPV1、TRPV5基因表达等。探讨三拗汤加全蝎、僵蚕对二氧化硫衍生物致16HBE细胞炎症损伤的保护作用机制。结果:1.咳嗽变异性哮喘可归属于中医风咳范畴。古代风咳含义较广,在历代的演变中还被描述为风嗽、伤风嗽、伤风咳嗽、因风咳嗽、感风咳嗽、冒风咳嗽等。风咳按发病原因可分为外感和内伤,主要致病因素包括风寒、风热、风燥、痰盛、火郁、气虚、血虚、劳倦、情志等。外感风咳多属风寒、风热为患,可通过辛散解表、宣肺止咳,清金化痰、降气止咳等法治疗,内伤风咳多因风痰内蕴、肝风内动、脏腑内伤而致,可通过祛风化痰、熄风止痉、佐金平木、培本固元等法治疗。现代医家将临床上表现为急迫性、阵发性、挛急性、刺激性等特征的咳嗽归属于风咳范畴,临床发病特点为干咳无痰或少痰,常伴有咽喉发痒的症状,可由冷空气、油烟、灰尘等因素诱发及加重,见于咳嗽变异性哮喘、嗜酸性粒细胞支气管炎、变应性咳嗽、感染后咳嗽等疾病。主要病因病机包括风邪犯肺、风痰伏肺、肝风内动、肺气虚损等,治法有疏风宣肺、解痉止咳、化痰通络、祛风平肝、滋阴理肺、补肺固表等。在此基础上,还可根据患者体质、年龄、疾病发展情况等,进行分期治疗。发作期以祛邪为主,注重疏风宣肺、缓急解痉、化痰通络、润肺止咳、利咽等;缓解期强调补肺益气、扶正固表等防止复发。此外,古代医家有使用虫类药治疗伤风咳嗽、风痰喘嗽的记载,现代医家善用虫类药治疗持续性、痉挛性等具有风咳特征的咳嗽,以增强搜风通络、解痉止咳之功。2.通过靶点整理,共获得CVA相关疾病靶点2082个;三拗汤加全蝎、僵蚕药物活性成分530个,共作用于1873个与人类相关的靶点基因。其中:（1）三拗汤加全蝎、僵蚕与CVA疾病作用的交集靶点共 108个,包括SCN5A、MAPK、CYP3A4、TNF、TRPV1、EGFR、IL1β、IL-6等,主要涉及槲皮苷、乌索酸、山奈酚、柚皮素、卵孢白僵菌素、甘氨酸、白僵菌素、芒柄花素、甘草酸等成分;主要涉及细胞对刺激的反应,参与转录调节、抗氧化、信号受体结合等多种分子功能,并作用于IL-17信号通路,MAPK、TNF、血管内皮生长因子、神经营养因子、炎症介质对TRP通道的调节等通路。（2）三拗汤（拆方一）与CVA作用的交集靶点共84个,僵蚕-全蝎（拆方二）与CVA作用的交集靶点有57个,两者干预CVA既有共同作用靶点,也有其特有作用靶点。进一步分析得知:三拗汤干预CVA主要涉及细胞对化学刺激及含氧化合物的反应,参与细胞因子受体结合、细胞因子活性等功能,主要作用于IL-17、HIF-1、TNF等信号通路以及Th17细胞分化、细胞因子受体相互作用等;僵蚕-全蝎干预CVA主要涉及血管调节作用、酶活性调节等,主要作用于钙信号通路、神经活性配体-受体相互作用、血管内皮生长因子信号通路等。3.实验结果发现,三拗汤加全蝎、僵蚕可显着减少模型小鼠5 min内辣椒素引咳次数（P<0.05,P<0.01）、外周血EOS数量（P<0.01）、肺泡灌洗液中白细胞总数（P<0.01）,降低气道高反应性（P<0.05,P<0.01）,并可显着改善肺组织病理变化,其作用机制涉及降低细胞因子（IL-4、IL-13）水平（P<0.05,P<0.01）、神经肽类物质（NGF、CGRP）水平（P<0.05,P<0.01）,及神经源性炎症介质PGE2水平（P<0.05,P<0.01）,并下调肺与延脑组织中TRPA1、TRPV1、TRPV5基因与蛋白表达（P<0.05,P<0.01）,以及增加16HBE细胞存活率（P<0.05）,减少细胞活性氧自由基水平（P<0.05）,减少细胞中TRPV1、TRPV5基因的表达（P<0.05）。此外,三拗汤加全蝎-僵蚕组:小鼠咳嗽次数明显低于三拗汤组（P<0.05）、EOS计数及白细胞总数均明显低于僵蚕-全蝎组（P<0.05,P<0.01）、气道高反应性低于三拗汤组和僵蚕-全蝎组（P<0.05,P<0.01）、IL-13水平低于僵蚕-全蝎组（P<0.01）、TRPA1基因表达量低于僵蚕-全蝎组（P<0.05）、TRPV1基因与蛋白表达量均低于僵蚕-全蝎组（P<0.05）、TRPV5基因与蛋白均低于三拗汤组（P<0.05,P<0.01）;三拗汤组EOS计数与白细胞总数均显着低于僵蚕-全蝎组（P<0.05）;僵蚕-全蝎组PGE2水平明显低于三拗汤组（P<0.05）。结论:1.古代风咳理论较为丰富,既包括风寒、风热等外感咳嗽,也包括风痰内蕴、肝风内动、脏腑内伤等内伤咳嗽;治法包括辛散解表、清金化痰、宣肺止咳、祛风化痰、熄风止痉、佐金平木、培本固元等。现代医家认为咳嗽变异性哮喘可归属于中医风咳范畴,主要由风邪犯肺、风痰伏肺、肝风内动、肺气虚损等所致,主要通过疏风宣肺、解痉止咳、化痰通络、祛风平肝、滋阴理肺、补肺固表等法治疗。2.三拗汤加全蝎、僵蚕干预CVA的潜在靶点涉及免疫调节、神经系统、炎症调节、氧化反应、TRP离子通道调控等作用机制。拆方干预CVA的网络机制特点各有偏重,其中三拗汤偏重于细胞对外刺激的反应,主要涉及免疫调节、炎症反应等;僵蚕-全蝎着重参于细胞内的改变,主要作用于代谢酶的调节、血管调节、钙信号通路等。3.三拗汤加全蝎、僵蚕可显着减少CVA模型小鼠的咳嗽次数、外周血EOS数量及肺泡灌洗液中白细胞总数,降低气道高反应性,改善肺组织病理改变,其功效机制涉及免疫细胞因子IL-4、IL-13,神经肽NGF、CGRP,与神经源性炎症介质PGE2的调节,肺与脑组织中TRPA1、TRPV1、TRPV5离子通道的调控,以及对16HBE细胞炎症损伤的保护作用等。通过拆方分析得知,全方效果总体而言优于拆方,而拆方间作用特点各有偏重,其中三拗汤主要贡献在于改善气道炎症、调节肺与延脑中TRPA1、TRPV1离子通道作用,而僵蚕-全蝎在减少咳嗽次数、改善神经源性炎症、及调节肺和延脑中TRPV5离子通道作用上效果突出。
候悦悦[9]（2019）在《冬病夏治—三伏贴对雾霾暴露下支气管哮喘的防治研究》文中认为目的及意义本研究通过比较冬病夏治—三伏贴对雾霾暴露前后哮喘患者临床症状,肺功能（FEV1%、PEF%）,哮喘急性发作次数,及IL-6、IL-10、TNF-α、GSH-PX、MDA表达情况,研究冬病夏治—三伏贴治疗雾霾暴露下支气管哮喘的作用机制,从而为雾霾暴露下哮喘发作提供新的防治手段。研究方法本研究选取于我院呼吸科门诊确诊的支气管哮喘患者65例,随机分为贴敷组（33例）与对照组（32例）,对照组给予西医常规治疗,贴敷组在对照组基础上给予三伏贴贴敷治疗,观察时间为6个月,观察雾霾暴露前后两组哮喘患者喘息、咳嗽、哮鸣音、胸闷、咯痰症状积分,肺功能（FEV1%、PEF%）,哮喘急性发作次数,血清IL-6、IL-10、TNF-α及GSH-PX、MDA水平。结果1.雾霾暴露后两组哮喘患者喘息、哮鸣音、胸闷、咯痰症状积分增加,肺功能FEV1%、PEF%数值降低,差异有统计学意义（P<0.05）;对照组咳嗽症状积分增加,差异有统计学意义（P<0.05）;贴敷组咳嗽症状积分与暴露前相比无明显差异（P>0.05）。2.雾霾暴露后两组哮喘患者IL-6、TNF-α、MDA水平升高,IL-10水平降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;对照组哮喘患者GSH-PX活力降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;贴敷组GSH-PX活力与雾霾暴露前相比无明显变化（P>0.05）。3.雾霾暴露后,贴敷组哮喘患者喘息、咳嗽、哮鸣音、胸闷、咯痰症状积分低于对照组,且FEV1%、PEF%高于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）;贴敷组患者哮喘发作次数少于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。4.雾霾暴露后,贴敷组哮喘患者IL-6、TNF-α、MDA水平低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;IL-10水平、GSH-PX活力高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论1.雾霾暴露会加重哮喘患者喘息、咳嗽、哮鸣音、胸闷、咯痰症状,使哮喘患者肺功能受损;可能通过提高IL-6、TNF-α、MDA水平,降低IL-10水平、GSH-PX活力激发哮喘患者产生炎症反应及氧化损伤,从而加重哮喘发作。2.冬病夏治—三伏贴具有扶助正气、化浊解毒功效。3.冬病夏治—三伏贴可改善雾霾暴露后哮喘患者的喘息、咳嗽、哮鸣音、胸闷、咯痰症状,延缓肺功能下降,减少哮喘发作次数;可能通过降低哮喘患者血清中IL-6、TNF-α、MDA水平,提高IL-10水平、GSH-PX活力来抑制炎症反应、减轻氧化损伤,从而对雾霾暴露下支气管哮喘具有防治作用。
于小佳[10]（2018）在《桑梅止咳颗粒治疗咳嗽变异性哮喘（风伏阴伤证）的临床疗效观察》文中研究指明目的:在我国慢性咳嗽的诊治过程中,咳嗽变异性哮喘（Cough Variant Asthma,CVA）发病率高,并且由于本病临床症状单一,甚至仅可见干咳,肺部听诊无异常,易发生误诊,从而造成患者和医疗资源的极大损失。因此,重视对咳嗽变异性哮喘的防治研究,对提高本地区重大疾病防治水平具有重要意义。桑梅止咳颗粒是导师崔红生教授治疗咳嗽变异性哮喘的经验用方,本课题采用随机对照研究,证实桑梅止咳颗粒治疗咳嗽变异性哮喘（风伏阴伤证）的疗效性及安全性,为CVA提供安全、有效、规范化的中医治疗方案。方法:收集2017年6月-2018年2月在北京中医药大学第三附属医院呼吸科门诊确诊为CVA且中医辨证属于风伏阴伤证的患者60例。采用随机对照研究方式,将符合纳入标准的患者分成2组,即对照组和治疗组,对照组采用布地奈德福莫特罗粉吸入剂1吸2/日治疗,治疗组在对照组基础上加用桑梅止咳颗粒治疗;两组治疗疗程均为4周,随访2周;在治疗前和治疗后,分别记录和观察患者的中医证候评分、视觉模拟评分（Visual Analogue Scale,VAS）、莱赛斯特咳嗽生命质量问卷（the Leicester Cough Questionnaire,LCQ）、最大呼气峰流速值（Peak Expiratory Flow,PEF）及安全性相关的指标。数据结果使用Microsoft Excel建立数据库,采用SPSS22.0进行统计学分析。结果:预期的研究病例数是60例,对照组无病例脱落,治疗组脱落2例,最终完成58例,即治疗组包括28例,对照组包括30例。其中男性患者18例,占31.03%,女性患者40例,占68.97%,女性病例高于男性。两组一般资料,包括年龄、性别等,数据分析后,P值大于0.05,无统计学意义,具有可比性。治疗后,治疗组总有效率89.29%;对照组总有效率76.67%,表明两组对CVA治疗均有疗效,且治疗组疗效优于对照组。中医单项症状积分,治疗组在降低咳嗽、气短、咽干、咽痒、声音嘶哑单项积分优于对照组,P值小于0.05,具有统计意义,治疗后两组在咯痰症状积分无明显差异,P值大于0.05,无统计学差异。治疗后对照组对咽干、声音嘶哑症状改善不明显,与治疗前无明显差异,P值大于0.05,无显着性差异。VAS积分,治疗后治疗组平均积分为1.39±0.83,对照组为2.23±0.94,组间比较,P值小于0.05,有显着性差异,治疗组优于对照组。LCQ积分,对治疗后两组总积分及三个区域各自积分进行组间比较,P值均小于0.05,有显着性差异,表明在改善CVA患者的生活质量方面,治疗组优于对照组。治疗前后安全指标无明显变化。结论:桑梅止咳颗粒可显着地缓解和减轻风伏阴伤证CVA患者临床咳嗽症状,提高患者临床疗效和生活质量,安全性高,具有一定的远期疗效,可以广泛应用于临床。
二、从外周气道炎症的存在看哮喘的研究现状（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、从外周气道炎症的存在看哮喘的研究现状（论文提纲范文）
（1）疏风通络方含药血清对体外小鼠嗜酸性粒细胞粘附、迁移过程影响的分子机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物及细胞 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 疏风通络方含药血清制备 |
| 2.2 CCK-8 实验 |
| 2.3 细胞粘附及趋化实验 |
| 3 统计分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 疏风通络方含药血清对嗜酸性粒细胞活力的影响 |
| 4.2 各组嗜酸性粒细胞迁移情况 |
| 4.3 各组嗜酸性粒细胞粘附情况 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 1 疏风通络方方药分析 |
| 2 嗜酸性粒细胞与哮喘 |
| 2.1 嗜酸性粒细胞的生物学特性与哮喘 |
| 2.2 嗜酸性粒细胞的粘附和趋化 |
| 2.3 嗜酸性粒细胞的趋化涉及多条信号通路 |
| 3 疏风通络方治疗哮喘的机理探讨 |
| 3.1 嗜酸性粒细胞迁移实验 |
| 3.2 嗜酸性粒细胞与内皮细胞的粘附 |
| 结论 |
| 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 支气管哮喘的研究进展 |
| 1 从祖国医学看哮喘 |
| 2 现代医学与哮喘 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）屏风青龙汤对支气管哮喘慢性持续期（虚哮证）的临床疗效观察（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 临床研究 |
| 1 临床资料 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 病例选择标准 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 分组方法 |
| 2.2 治疗方法 |
| 2.3 观察指标 |
| 3 数据处理 |
| 研究结果 |
| 1 病例完成情况 |
| 2 两组患者一般资料研究结果 |
| 2.1 性别比较 |
| 2.2 年龄比较 |
| 2.3 病程比较 |
| 2.4 病情分级比较 |
| 3 两组患者临床观察指标研究结果 |
| 3.1 临床疗效比较 |
| 3.2 中医证候积分比较 |
| 3.3 ACT评分比较 |
| 3.4 FeNO浓度比较 |
| 3.5 肺功能比较 |
| 3.6 EOS%指标比较 |
| 3.7 发作次数比较 |
| 4 两组患者安全性指标研究结果 |
| 4.1 肝肾功能比较 |
| 4.2 不良反应 |
| 讨论 |
| 1 立题依据 |
| 2 药物配伍及分析 |
| 3 主要中药药理学研究 |
| 4 玉屏风散与小青龙汤的现代药理学研究 |
| 5 结果分析 |
| 5.1 临床疗效分析 |
| 5.2 中医证候积分分析 |
| 5.3 ACT评分分析 |
| 5.4 FeNO浓度分析 |
| 5.5 肺功能分析 |
| 5.6 EOS%分析 |
| 5.7 发作次数分析 |
| 5.8 安全性指标评估 |
| 6 问题与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（3）儿童支气管哮喘长链非编码RNA差异表达谱的筛选及其功能机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:长链非编码RNA在儿童支气管哮喘中的表达谱分析 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 研究对象与标本收集 |
| 2.1.2 主要试剂及药物 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 外周血单个核细胞的分离 |
| 2.2.2 总RNA的提取 |
| 2.2.3 Arraystar human lncRNA/mRNA表达谱芯片分析 |
| 2.2.4 数据分析方法 |
| 2.2.5 反转录反应(RT)生成cDNA |
| 2.2.6 实时定量聚合酶链反应 |
| 2.2.7 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 研究对象的基本信息 |
| 3.2 基因芯片筛选获得儿童哮喘差异表达的IncRNAs |
| 3.3 基因芯片筛选获得儿童哮喘差异表达的mRNAs |
| 3.4 DE mRNAs的GO分析 |
| 3.5 DE mRNAs的KEGG通路分析 |
| 3.6 DE mRNAs的PPI网络构建 |
| 3.7 qRT-PCR验证目标IncRNA在儿童哮喘中的差异表达 |
| 3.8 qRT-PCR验证PTTG3P相关的miRNA和mRNA在儿童哮喘中的差异表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分:lncRNA PTTG3P对支气管上皮细胞EMT及其增殖、迁移能力的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 主要试剂及实验药物 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 siRNA |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 RT-PCR |
| 2.2.3 免疫印迹检测 |
| 2.2.4 Transwell实验 |
| 2.2.5 CCK-8实验 |
| 2.2.6 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 TGF-β1诱导支气管上皮细胞发生EMT改变 |
| 3.1.1 TGF-β1诱导支气管上皮细胞EMT的浓度筛选 |
| 3.1.2 TGF-β1诱导支气管上皮细胞EMT的时间筛选 |
| 3.1.3 TGF-β1 诱导支气管上皮细胞的形态学改变 |
| 3.2 TGF-β1诱导支气管上皮细胞中lncRNA PTTG3P的表达变化 |
| 3.3 敲低lncRNA PTTG3P对支气管上皮细胞EMT的影响 |
| 3.3.1 lncRNA PTTG3P的敲低效率验证 |
| 3.3.2 敲低lncRNA PTTG3P对支气管上皮细胞形态改变的影响 |
| 3.3.3 敲低lncRNA PTTG3P对支气管上皮细胞EMT标志物表达的影响 |
| 3.3.4 敲低lncRNA PTTG3P对支气管上皮细胞增殖能力的影响 |
| 3.3.5 敲低lncRNA PTTG3P对支气管上皮细胞迁移能力的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分:lncRNA PTTG3P在支气管上皮细胞EMT中作用机制的研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 主要试剂及药物 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 16HBE细胞的培养 |
| 2.2.2 细胞分组、转染及给药 |
| 2.2.3 双萤光素酶报告基因检测 |
| 2.2.4 RT-PCR |
| 2.2.5 免疫印迹检测 |
| 2.2.6 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 TGF-β1诱导支气管上皮细胞中miR-192-3p的表达变化 |
| 3.2 TGF-β1诱导支气管上皮细胞中CCNB1的表达变化 |
| 3.3 敲低lncRNA PTTG3P对支气管上皮细胞中miR-192-3p及CCNB1表达的影响 |
| 3.4 过表达miR-192-3p对支气管上皮细胞EMT的影响 |
| 3.4.1 miR-192-3p mimics及miR-192-3p inhibitor的转染效率验证 |
| 3.4.2 过表达miR-192-3p对支气管上皮细胞形态改变的影响 |
| 3.4.3 过表达miR-192-3p对支气管上皮细胞EMT标志物表达的影响 |
| 3.5 过表达miR-192-3p对支气管上皮细胞中CCNB1表达的影响 |
| 3.6 双荧光素酶报告基因检测结果 |
| 3.7 敲低lncRNAPTTG3P同时低表达miR-192-3p对支气管上皮细胞EMT及CCNB1表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 长链非编码 RNA 的免疫调节机制及其在支气管哮喘中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）儿童支气管哮喘长链非编码RNA差异表达谱的筛选及其功能机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:长链非编码RNA在儿童支气管哮喘中的表达谱分析 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 研究对象与标本收集 |
| 2.1.2 主要试剂及药物 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 外周血单个核细胞的分离 |
| 2.2.2 总RNA的提取 |
| 2.2.3 Arraystar human lncRNA/mRNA表达谱芯片分析 |
| 2.2.4 数据分析方法 |
| 2.2.5 反转录反应(RT)生成cDNA |
| 2.2.6 实时定量聚合酶链反应 |
| 2.2.7 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 研究对象的基本信息 |
| 3.2 基因芯片筛选获得儿童哮喘差异表达的IncRNAs |
| 3.3 基因芯片筛选获得儿童哮喘差异表达的mRNAs |
| 3.4 DE mRNAs的GO分析 |
| 3.5 DE mRNAs的KEGG通路分析 |
| 3.6 DE mRNAs的PPI网络构建 |
| 3.7 qRT-PCR验证目标IncRNA在儿童哮喘中的差异表达 |
| 3.8 qRT-PCR验证PTTG3P相关的miRNA和mRNA在儿童哮喘中的差异表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分:lncRNA PTTG3P对支气管上皮细胞EMT及其增殖、迁移能力的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 主要试剂及实验药物 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 siRNA |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 RT-PCR |
| 2.2.3 免疫印迹检测 |
| 2.2.4 Transwell实验 |
| 2.2.5 CCK-8实验 |
| 2.2.6 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 TGF-β1诱导支气管上皮细胞发生EMT改变 |
| 3.1.1 TGF-β1诱导支气管上皮细胞EMT的浓度筛选 |
| 3.1.2 TGF-β1诱导支气管上皮细胞EMT的时间筛选 |
| 3.1.3 TGF-β1 诱导支气管上皮细胞的形态学改变 |
| 3.2 TGF-β1诱导支气管上皮细胞中lncRNA PTTG3P的表达变化 |
| 3.3 敲低lncRNA PTTG3P对支气管上皮细胞EMT的影响 |
| 3.3.1 lncRNA PTTG3P的敲低效率验证 |
| 3.3.2 敲低lncRNA PTTG3P对支气管上皮细胞形态改变的影响 |
| 3.3.3 敲低lncRNA PTTG3P对支气管上皮细胞EMT标志物表达的影响 |
| 3.3.4 敲低lncRNA PTTG3P对支气管上皮细胞增殖能力的影响 |
| 3.3.5 敲低lncRNA PTTG3P对支气管上皮细胞迁移能力的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分:lncRNA PTTG3P在支气管上皮细胞EMT中作用机制的研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 主要试剂及药物 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 16HBE细胞的培养 |
| 2.2.2 细胞分组、转染及给药 |
| 2.2.3 双萤光素酶报告基因检测 |
| 2.2.4 RT-PCR |
| 2.2.5 免疫印迹检测 |
| 2.2.6 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 TGF-β1诱导支气管上皮细胞中miR-192-3p的表达变化 |
| 3.2 TGF-β1诱导支气管上皮细胞中CCNB1的表达变化 |
| 3.3 敲低lncRNA PTTG3P对支气管上皮细胞中miR-192-3p及CCNB1表达的影响 |
| 3.4 过表达miR-192-3p对支气管上皮细胞EMT的影响 |
| 3.4.1 miR-192-3p mimics及miR-192-3p inhibitor的转染效率验证 |
| 3.4.2 过表达miR-192-3p对支气管上皮细胞形态改变的影响 |
| 3.4.3 过表达miR-192-3p对支气管上皮细胞EMT标志物表达的影响 |
| 3.5 过表达miR-192-3p对支气管上皮细胞中CCNB1表达的影响 |
| 3.6 双荧光素酶报告基因检测结果 |
| 3.7 敲低lncRNAPTTG3P同时低表达miR-192-3p对支气管上皮细胞EMT及CCNB1表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 长链非编码 RNA 的免疫调节机制及其在支气管哮喘中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）巴芪辛祛风除痒止咳颗粒治疗CVA风邪恋肺兼肺肾两虚证的临床观察（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 材料与方法 |
| 1 临床资料 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 剔除、脱落标准 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 分组方法 |
| 2.2 治疗方法 |
| 2.3 观察指标 |
| 3 统计方法 |
| 第二章 研究结果 |
| 1 一般资料分析 |
| 2 疗效观察指标比较 |
| 2.1 血清皮质醇水平比较 |
| 2.2 外周血EOS比较 |
| 2.3 肺功能中的FEV1%pred及PEF日间变异率比较 |
| 2.4 咳嗽症状积分比较 |
| 2.5 中医证候积分比较 |
| 2.6 临床疗效比较 |
| 2.7 治疗期间不良反应及安全性比较 |
| 第三章 分析与讨论 |
| 1 现代医学对咳嗽变异性哮喘的认识 |
| 1.1 咳嗽变异性哮喘的致病因素 |
| 1.2 咳嗽变异性哮喘的发病机制 |
| 1.3 咳嗽变异性哮喘的治疗 |
| 2 祖国医学对咳嗽变异性哮喘的认识 |
| 2.1 咳嗽变异性哮喘的病因病机 |
| 2.2 咳嗽变异性哮喘的中医治疗 |
| 3 巴芪辛祛风除痒止咳颗粒的组方原理及特色 |
| 3.1 严老关于CVA的理论认识 |
| 3.2 巴芪辛祛风除痒止咳颗粒的组方及现代药理研究 |
| 4 研究结果分析 |
| 4.1 一般资料分析 |
| 4.2 观察治疗分析 |
| 5 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（6）基于“络风内动”病机理论的风邪实质探讨及冠心病风邪临床表征研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 中医风邪实质研究进展 |
| 1 对外风实质的认识 |
| 2 对内风实质的认识 |
| 3 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 气象因素与冠心病研究进展 |
| 1 风速对冠心病的影响 |
| 2 气温对冠心病的影响 |
| 3 气压对冠心病的影响 |
| 4 湿度对冠心病的影响 |
| 5 日照时数对冠心病的影响 |
| 6 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述三 炎症因子与冠心病研究进展 |
| 1 C反应蛋白(CRP) |
| 2 白细胞介素-6(IL-6) |
| 3 白介素-1β(IL-1β) |
| 4 基质金属蛋白酶-9(MMP-9) |
| 5 生长分化因子-15 (GDF-15) |
| 6 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 研究部分 |
| 研究一 基于现代文献的从风论治冠心病证治规律研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 研究二 基于“络风内动”病机理论的外风与心血管事件回顾性研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 研究三 基于“络风内动”病机理论的内风与急性冠脉综合征病例对照研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 研究四 基于“络风内动”病机理论的冠心病风邪临床表征横断面研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 研究五 基于“络风内动”病机理论的冠心病风邪临床表征前瞻性队列研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（7）基于数据挖掘的沈其霖教授治疗慢性咳嗽用药经验及药效学研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第一章 前言 |
| 1 研究背景 |
| 1.1 现代医学对慢性咳嗽的认识及治疗现状 |
| 1.2 中医对慢性咳嗽的的认识与治疗特色 |
| 2 立题依据 |
| 2.1 沈其霖教授对慢性咳嗽的辩治经验丰富 |
| 2.2 数据挖掘在中医临床经验传承中的运用 |
| 第二章 沈其霖教授治疗慢性咳嗽用药数据挖掘 |
| 1 研究资料 |
| 1.1 资科来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 资料收集方法 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 病例预处理 |
| 2.2 信息处理方法 |
| 2.3 数据分析 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 入选患者一般情况 |
| 3.2 临床症状统计 |
| 3.3 舌象脉象统计 |
| 3.4 药物频次分析 |
| 3.5 药物四气五味与归经统计 |
| 3.6 药对组合的关联规则 |
| 4 讨论与分析 |
| 4.1 一般资料分析 |
| 4.2 临床表现及舌脉统计分析 |
| 4.3 药物统计分析 |
| 4.4 中药药对数据挖掘分析 |
| 5 存在的问题与展望 |
| 6 小结 |
| 第三章 久嗽汤的药效学研究 |
| 1 实验目的 |
| 2 久嗽汤止咳作用的实验研究 |
| 2.1 对象 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 3 久嗽汤体内抗炎作用的实验研究 |
| 3.1 对象 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 4 久嗽汤体外抗炎作用的实验研究 |
| 4.1 对象 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 5 久嗽汤抗变态反应的实验研究 |
| 5.1 对象 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 6 结论 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 现代中医对慢性咳嗽的研究概述 |
| 参考文献 |
| 附1 攻读硕士学位期间取得的成果 |
（8）三拗汤加全蝎、僵蚕干预咳嗽变异性哮喘网络调控特点及配伍效应机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 综述 咳嗽变异性哮喘的研究现状 |
| 1 流行病学特点 |
| 2 发病机制 |
| 3 诊断与治疗 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第一章 风咳理论研究 |
| 第一节 古代中医对风咳的认识 |
| 1 理论源流 |
| 2 病因病机 |
| 3 治法方药 |
| 4 小结 |
| 第二节 现代中医对风咳的认识 |
| 1 理论进展 |
| 2 病因病机 |
| 3 治法方药 |
| 4 小结 |
| 第三节 三拗汤加全蝎、僵蚕配伍应用研究 |
| 1 古代文献梳理 |
| 2 现代研究 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 第二章 全方及拆方干预咳嗽变异性哮喘的网络方剂学研究 |
| 第一节 全方网络调控机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二节 拆方网络调控机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 全方干预咳嗽变异性哮喘效应与机制研究 |
| 第一节 体内实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二节 体外实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 拆方干预咳嗽变异性哮喘效应与机制特点研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1 主要内容和结果 |
| 2 创新点 |
| 3 问题与展望 |
| 附录 中英文缩略词对照表 |
| 攻读博士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（9）冬病夏治—三伏贴对雾霾暴露下支气管哮喘的防治研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 穴位贴敷治疗支气管哮喘作用机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）桑梅止咳颗粒治疗咳嗽变异性哮喘（风伏阴伤证）的临床疗效观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文对照 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 中医学对咳嗽变异性哮喘的认识及治疗现状 |
| 1. 病名 |
| 2. 病因病机 |
| 3. 中医治疗现状及发展趋势 |
| 综述二 现代医学对CVA的研究进展 |
| 1. 定义 |
| 2. 流行病学 |
| 3. 病因及发病机制 |
| 4. 诊断及鉴别诊断 |
| 5. 治疗 |
| 6. 预后 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床研究 |
| 前言 |
| 一. 研究资料 |
| 1. 病例来源 |
| 2. 病例诊断标准 |
| 3. 病例选择标准 |
| 二. 试验方案 |
| 1. 分组方法 |
| 2. 治疗方法 |
| 3. 观察指标 |
| 4. 疗效评价标准 |
| 5. 随访 |
| 6. 数据统计分析 |
| 7. 技术路线图 |
| 三. 研究结果 |
| 1. 病例纳入情况 |
| 2. 一般资料 |
| 3. 结果分析 |
| 讨论 |
| 1 研究结果分析 |
| 1.1 基线资料比较 |
| 1.2 临床疗效评价 |
| 2 理论依据 |
| 2.1 风伏阴伤证的证候特点 |
| 2.2 组方分析 |
| 2.3 现代药理学分析 |
| 3 研究结论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
四、从外周气道炎症的存在看哮喘的研究现状（论文参考文献）
- [1]疏风通络方含药血清对体外小鼠嗜酸性粒细胞粘附、迁移过程影响的分子机制研究[D]. 张瑶. 天津中医药大学, 2021(01)
- [2]屏风青龙汤对支气管哮喘慢性持续期（虚哮证）的临床疗效观察[D]. 王琼. 云南中医药大学, 2021
- [3]儿童支气管哮喘长链非编码RNA差异表达谱的筛选及其功能机制研究[D]. 代冰. 中国医科大学, 2021(02)
- [4]儿童支气管哮喘长链非编码RNA差异表达谱的筛选及其功能机制研究[D]. 代冰. 中国医科大学, 2021
- [5]巴芪辛祛风除痒止咳颗粒治疗CVA风邪恋肺兼肺肾两虚证的临床观察[D]. 李丽君. 福建中医药大学, 2020(08)
- [6]基于“络风内动”病机理论的风邪实质探讨及冠心病风邪临床表征研究[D]. 韩文博. 北京中医药大学, 2020(04)
- [7]基于数据挖掘的沈其霖教授治疗慢性咳嗽用药经验及药效学研究[D]. 邓丽. 成都中医药大学, 2020(02)
- [8]三拗汤加全蝎、僵蚕干预咳嗽变异性哮喘网络调控特点及配伍效应机制研究[D]. 王鹏丽. 南京中医药大学, 2020(08)
- [9]冬病夏治—三伏贴对雾霾暴露下支气管哮喘的防治研究[D]. 候悦悦. 河北中医学院, 2019(01)
- [10]桑梅止咳颗粒治疗咳嗽变异性哮喘（风伏阴伤证）的临床疗效观察[D]. 于小佳. 北京中医药大学, 2018(09)