一、干细胞研究进退两难（论文文献综述）
杨永祥[1]（2019）在《外泌体源性miR-124对创伤性脑损伤后海马区神经炎症和神经再生的作用和机制研究》文中认为背景创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）是由突然的外力作用导致的急性神经损伤性疾病,是世界范围内致死致残的主要病因之一。目前,尚没有治疗措施能够在TBI后有效的修复神经损伤和改善神经功能恢复。新近的研究发现存在于成体哺乳动物中枢神经再生区域之一的海马齿状回（dentate gyrus,DG）颗粒层下区的神经干细胞（neural stem cells,NSCs）在TBI后神经损伤修复和神经功能重建过程中发挥积极作用,从而使得海马区神经再生逐渐成为一个研究焦点。致力于TBI后海马神经再生的研究者们都在不遗余力的探索能够促进NSCs增殖和向神经元分化的新策略。TBI后海马区NSCs的增殖分化能力受到许多病理因素的影响,其再生修复潜能比较低下,不足以修复受损的神经。其中,TBI后海马区的神经炎症是制约NSCs发挥修复损伤能力的重要因素之一。神经炎症在TBI的病理生理机制中发挥重要作用,其在某种程度上对于损伤脑组织具有一定的保护作用,但通常情况下神经炎症会过度反应并降低海马区NSCs的再生修复能力和导致更差的神经功能恢复。小胶质细胞（microglia,MG）在激活和调节神经炎症反应的过程中发挥关键作用。目前的研究发现MG对海马区神经再生具有“双刃剑”作用。活化的MG有M1型和M2型两种极化状态,M1型是促炎类型,M2型是抑炎类型。MG向M1型极化不利于海马区NSCs发挥再生修复功能,而MG向M2型极化则能够促进海马区NSCs增殖分化。因此,探索能够在TBI后促进海马区MG由M1型向M2型转化的新策略对于抑制过度的神经炎症反应并提升NSCs再生修复能力和改善神经功能恢复具有重要意义。微小核糖核酸（microRNAs,miRNAs）是脑组织富含并对MG极化状态具有重要调控作用的生物活性分子。其中,miR-124是脑组织特异性表达并在MG中呈高表达的miRNA。在生理情况下,miR-124可以调控MG的生物学功能并维持其处于静息状态。在病理情况下,下调miR-124的表达可以促进MG由M2型向M1型极化并增加神经炎症;而上调miR-124的表达可以促进MG由M1型向M2型极化并减轻神经炎症。鉴于此,在TBI后将miR-124输送至中枢神经系统以提高海马区miR-124的含量可能是一种促进MG由M1型向M2型转化并进而提升NSCs再生修复能力的有力策略。然而,裸露miR-124的生化性质极不稳定而脆弱,很容易被降解而失去作用。因此,寻求能够将miR-124完整递送至中枢神经系统并发挥其生物学作用的可行方法具有重要的基础研究和实际应用价值。最新研究提示外泌体也许有希望成为一种可以将miR-124输送至中枢神经系统并使其发挥功能的重要载体。外泌体是由细胞分泌的直径为30-100nm的微粒,它具有磷脂包膜并富含蛋白质、磷脂、mRNAs和miRNAs等生物活性分子。外泌体的诸多优点使得其具有递送miR-124至中枢神经系统的潜能。首先,外泌体能够自由通过血脑屏障,这使得输送miR-124至中枢神经系统成为可能;其次,外泌体的磷脂包膜可以保护其内含物在输送过程中不被分解破坏,这使得miR-124在被输送至大脑后仍然能够保持结构完整和具有生物学功能。已有研究发现富含miR-124的外泌体可以促进N9型MG由M1型向M2型极化。然而,外泌体源性miR-124（exosome miR-124,Exo-miR-124）是否能够调控TBI后海马区MG的极化状态并进而影响神经再生,以及潜在的作用机制是什么尚不清楚。基于其他研究者的发现,Toll样受体4（Toll like receptor 4,TLR4）信号通路可能与Exo-miR-124调控TBI后海马区MG极化状态的作用机制相关。首先,TLR4特异性激活分子磷酸脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）可以活化海马区MG并抑制神经再生。其次,LPS可以增加TLR4信号通路下游分子NF-κB的表达水平,并最终诱导了不利于神经再生的炎症因子IL-6和TNF-α的释放。此外,新近的研究发现抑制TLR4的表达可以诱导MG向M2型极化并减轻了神经炎症,且过表达miR-124可以通过作用于TLR4的方式抑制LPS引起的MG活化。因此,TLR4通路可能在Exo-miR-124调控TBI后海马区MG极化状态并影响神经再生的机制中发挥重要作用。目的本研究的目的是探索利用Exo-miR-124调控TBI后海马区MG的极化状态并进而影响神经炎症、神经再生的可能性;并探讨Exo-miR-124是否是通过作用于TLR4信号通路调控了MG的极化状态。本研究结果将有望为探索利用外泌体将miR-124输送至大脑并改善TBI后神经功能恢复的新策略提供理论参考。方法1.利用装载miR-124的质粒或空载质粒（Control）转染大鼠骨髓来源的间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSCs）,通过实时定量聚合酶链法（quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR）鉴定转染效果。然后应用ExoQuick-TC外泌体提取试剂盒从转染了miR-124或miR-Con的MSCs培养液上清中提取外泌体,通过电镜观察和蛋白印迹法（Western Blotting,WB）鉴定提取的外泌体,并应用qRT-PCR检测Exo-miR-124和Exo-Con这两种外泌体中miR-124的含量。2.将168只大鼠随机分为假损伤组（Sham）、TBI组、TBI+Exo-Con组和TBI+Exo-miR-124组,每组42只。利用控制性皮层损伤方法构建TBI大鼠模型,通过尾静脉在TBI构建后24小时将Exo-Con或Exo-miR-124注射入大鼠体内。在TBI后第3/7/14/28天,利用qRT-PCR检测miR-124的表达量;利用反转录聚合酶链法（reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）检测M1型MG特征性分子CD32、IL-1β和M2型MG特征性分子CD206、Arginase-1的表达水平;并利用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA）以检测促炎因子IL-1、IL-6、TNF-α和抑炎因子IL-4、IL-10、TGF-β的表达水平。3.为了分析Exo-miR-124对TBI后海马MG的调控机制以及TLR4信号通路在其中的作用,首先利用RT-PCR检测TBI后第3/7/14/28天海马组织内TLR4信号通路分子TLR4、MyD88、IRAK-1、TRAF6和NF-κB的表达水平。然后在体外将BV2型MG分为BV2（空白对照）组、BV2+LPS组、BV2+LPS+Exo-Con组和BV2+LPS+Exo-miR-124组。利用qRT-PCR检测BV2细胞内miR-124的表达水平;利用WB检测前述TLR4信号通路分子的表达水平;利用RT-PCR检测M1型MG特征性分子CD32、IL-1β和M2型MG特征性分子Arginase-1、CD206的表达水平;利用ELISA检测促炎因子IL-1、IL-6、TNF-α和抑炎因子IL-4、IL-10、TGF-β的表达水平。4.为了探讨Exo-miR-124调控TBI大鼠海马区MG极化状态后对NSCs增殖分化能力的作用。首先,利用免疫荧光（immunofluorescence,IF）检测TBI后第7天海马区新生NSCs即BrdU+/SOX2+细胞和TBI后第28天由NSCs分化的神经元即BrdU+/NeuN+细胞数量。然后,利用神经功能评分（Neurological severity score,NSS）方法在TBI后7/14/21/28天评估运动、感觉等神经功能恢复情况;利用Morris水迷宫实验（Morris water maze,MWM）在TBI后24-28天评估认知记忆恢复情况。结果1.成功构建了高表达miR-124的外泌体即Exo-miR-124和Exo-Con,电镜图像显示外泌体为30-100nm的膜性微粒,WB提示CD9、CD63和CD81呈高表达,qRT-PCR提示Exo-miR-124中miR-124的表达水平明显高于Exo-Con。2.TBI后海马组织内M1型MG特征性分子CD32、IL-1β和M2型MG特征性分子Arginase-1、CD206的表达水平升高;且促炎因子IL-1、IL-6、TNF-α和抑炎因子IL-4、IL-10、TGF-β的表达水平也升高。与Exo-Con相比,将Exo-miR-124输送入TBI大鼠体内后,海马组织内miR-124的表达量升高;M2型MG特征性分子Arginase-1、CD206和抑炎因子IL-4、IL-10、TGF-β的表达水平升高,而M1型MG特征性分子CD32、IL-1β和促炎因子IL-1、IL-6、TNF-α的表达水平降低。3.TBI后海马组织内TLR4信号通路分子TLR4、MyD88、IRAK-1、TRAF6和NF-κB的表达水平升高。与Exo-Con相比,将Exo-miR-124输送入TBI大鼠体内降低了TLR4信号通路分子的表达水平。利用LPS刺激BV2细胞后,TLR4信号通路分子的表达水平升高。与Exo-Con相比,Exo-miR-124处理提高了BV2细胞中miR-124的表达水平并降低了TLR4信号通路分子的表达水平。LPS刺激BV2细胞后M1型MG特征性分子CD32、IL-1β和促炎因子IL-1、IL-6、TNF-α的表达水平升高。与Exo-Con相比,Exo-miR-124处理降低了前述M1型MG特征性分子和促炎因子的表达水平,并提高了M2型MG特征性分子Arginase-1、CD206和抑炎因子IL-4、IL-10、TGF-β的表达水平。4.TBI后海马区新生NSCs即BrdU+/SOX2+细胞和NSCs分化为神经元即BrdU+/NeuN+细胞的数量均增多。与Exo-Con相比,将Exo-miR-124输送入TBI大鼠体内后,新生NSCs和NSCs分化为神经元的数量进一步升高。NSS和MWM评分提示TBI后大鼠的神经功能、认知记忆能力均受损;与Exo-Con相比,Exo-miR-124促进了神经功能和认知记忆能力的恢复。结论TBI后大鼠海马区M1型和M2型MG均活化,将Exo-miR-124输送入TBI大鼠体内促进了MG由M1型向M2型极化;且体内外实验均提示Exo-miR-124是通过抑制TLR4信号通路的活性促进了MG由M1型向M2型极化。进一步研究发现,Exo-miR-124促进TBI大鼠海马区MG由M1型向M2型极化后提高了NSCs的增殖分化能力和改善了神经功能恢复。
唐锦程[2]（2019）在《改性介孔生物活性玻璃纳米颗粒强化的明胶基骨粘合剂的制备和研究》文中研究指明目的:以醛基葡聚糖交联的明胶基组织粘合剂（GelDex）为基础,通过添加表面氨基化的介孔生物活性玻璃纳米颗粒（AMBGN）,改善粘合剂的力学、黏附性能、生物相容性、促成骨能力,制备一种适合于非承重部位骨折固定修复的骨粘合剂。方法:通过运用3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTES）对介孔生物活性玻璃纳米颗粒（MBGN）进行改性,得到氨基化生物活性玻璃纳米颗粒（AMBGN）,使之可通过共价键的形式整合进明胶基组织粘合剂中,通过流变学测试、傅氏转换红外线光谱分析仪（FTIR）、扫描电镜（SEM）、力学及黏附力学测试研究添加了 AMBGN后骨粘合剂的理化性能,同时通过体外大鼠间充质干细胞（BMSC）的增殖实验及成骨分化实验研究骨粘合剂在生物相容性及促成骨活性上的变化,最后通过家兔的桡骨骨折模型,研究骨粘合剂的体内固定效果及促进骨折愈合的生物活性。结果:AMBGN的添加相较于添加未改性的MBGN,可显着降低了骨粘合剂的流变学成胶时间,提高了成胶后压缩模量与拉伸模量,强化骨粘合剂的生理环境下的结构稳定性,并提高了该粘合剂在体外环境下对骨组织的最大粘合强度;体外实验表明,添加了 AMBGN的骨粘合剂具有更高的细胞增殖率、碱性磷酸酶活动及钙结节形成程度;同时,体内实验表明:AMBGN强化的骨粘合剂可显着提高骨折缺损部位的新生骨含量（BV/TV）及骨矿密度（BMD）。结论:AMBGN强化的骨粘合剂,具有显着强化的力学性能,更加稳定的生物相容性及促成骨活性,并可在兔的桡骨骨折模型中起到临时固定并促进骨再生的作用。
沈艺南[3]（2016）在《Kr（?）ppel样因子8对肝癌细胞干细胞样特性影响的研究》文中认为研究背景及目的:肝细胞癌（Hepatocelluar carcinoma,HCC）是在肝脏中最常见的原发性恶性肿瘤,其发病率在全球癌症中位列第五,同时也是最常见的肿瘤致死原因之一。HCC的恶性程度极高,由于早期不具有明显的临床症状,许多HCC患者确诊时往往已处于晚期。现阶段,针对HCC的治疗已取得了较大的进展,可以选择的治疗方式也相对较多,手术仍然是首选的治疗方式。然而,由于外科手术的低切除率和高复发率,导致HCC的治疗效果并不十分理想,这迫使人们不得不深入研究其发生、发展、侵袭和转移过程中的分子机制,以期能进一步开发更有效的早期诊断和治疗手段。近年来,随着对肿瘤干细胞（Cancer stem cells,CSCs）研究的不断深入,越来越多的证据表明肿瘤的异质性与CSCs的分化密切相关。在肿瘤组织中,虽然CSCs所占比例很少,但已有的研究认为其不仅具有自我更新能力,还具备了多向分化以及无限增殖的潜力。此外,CSCs在肿瘤的多步骤转移、耐药以及复发过程中发挥了重要的作用。具有干细胞样特性的肝脏肿瘤细胞即为肝癌干细胞（Liver cancer stem cells,LCSCs）。深入研究LCSCs的控机制并找到合适的干预靶点有望为HCC的治疗提供新的思路。参与多种重要基因转录的Kruppel样转录因子8（Kruppel like factor 8,KLF8）在HCC发生、增殖和侵袭等恶性生物学行为中起到重要的作用。在既往的研究中,我们首次发现Wnt/β-catenin途径是KLF8蛋白在HCC细胞中潜在的下游信号通路之一,Wnt/β-catenin在HCC细胞中的活性失调可能与KLF8蛋白高表达直接相关,因此KLF8蛋白表达水平异常可能与HCC癌变、侵袭和转移有着直接的联系。但到目前为止,KLF8在干细胞中的研究还很少,其对LCSCs的调控也尚未见报道。本次研究的目的在于探究KLF8成为新型LCSCs标志物的可能性,并阐明其在临床用药指征和联合化疗中的价值,为HCC的诊断和治疗提供新的思路。研究方法:1.临床资料及样本的收集:收集了80例于2008年3月至2011年10月在我院行手术治疗的HCC患者的临床资料及肿瘤组织样本。通过检测这些患者肿瘤组织中KLF8的表达水平并结合所记录的随访资料,分析KLF8的表达与患者预后的关系。2.KLF8对HCC细胞系干细胞样特性的影响分析及机制研究:通过低粘附成球培养实验富集LCSCs,并通过qRT-PCR检测LCSCs中KLF8的表达情况;使用慢病毒干扰HCC细胞株中KLF8的表达,然后通过qRT-PCR、流式细胞实验、成球能力实验等多种方式来探究KLF8干扰后对HCC细胞系干细胞样特性的影响;并进一步探究KLF8与Wnt/β-catenin信号通路在HCC细胞干细胞样特性调控中的相互关系。3.KLF8在肝癌细胞耐药中的影响分析:通过流式细胞实验、CCK8实验以及WB实验检测KLF8低表达HCC细胞系对临床常用药物索拉菲尼和顺珀作用的敏感性。实验结果:1.qRT-PCR检测80例HCC组织及对应癌旁组织中KLF8的mRNA表达水平,发现KLF8在76.3%（61/80）HCC组织中的表达量高于癌旁组织;通过WB检测22例HCC组织及对应癌旁组织,发现81.8%（18/22）的样本中,KLF8在肿瘤组织中的蛋白表达水平明显高于其癌旁组织;通过qRT-PCR分别检测了40例HCC患者的肿瘤组织、癌旁组织及门静脉癌栓（Portal vein tumor thrombus,PVTT）中KLF8的mRNA表达水平,发现KLF8在PVTT中的表达显着高于HCC及癌旁组织;通过对80例HCC患者的组织标本及其随访记录进行检测及统计分析,发现KLF8（+）患者的预后更差。2.通过低粘附成球培养及qRT-PCR检测,发现KLF8在三种不同的HCC细胞系（SMMC-7721、MHCC-LM3、HepG2）成球细胞中的mRNA表达水平明显高于贴壁细胞;从原代HCC细胞中分离出相应的成球细胞,发现KLF8在HCC患者原代成球细胞中的mRNA表达水平同样也高于原代贴壁细胞;通过qRT-PCR检测,发现KLF8在CD24（+）、CD90（+）和EpCAM（+）HCC细胞中的mRNA表达水平均明显高于CD24（-）、CD90（-）和EpCAM（-）的HCC细胞。3.通过qRT-PCR检测,发现KLF8被干扰后,两种HCC细胞系（SMMC-7721和MHCC-LM3）的EpCAM、CD24、CD90、CD133的mRNA表达水平均显着下调;利用流式细胞仪对相应HCC细胞进行分析和分选后发现,KLF8被干扰后可降低LM3细胞株中EpCAM（+）细胞的比例;通过6孔板低粘附成球实验以及体外低粘附有限稀释实验,发现KLF8（-）HCC细胞系的成球能力被显着抑制,其成球的数量明显较对照细胞系少;通过qRT-PCR检测证实在KLF8干扰后,一系列HCC细胞的干性基因诸如Lin28、Bamil、Sox-2、OCT4、Nanog也显着下调。4.通过qRT-PCR检测发现,KLF8在索拉菲尼和顺珀耐药的HCC细胞中的mRNA水平显着高于正常HCC细胞;通过流式检测发现相对于对照细胞系,KLF8（-）HCC细胞系在固定浓度的索拉菲尼（5μM）、顺珀（2μg/ml）作用下的凋亡细胞比例显着增加;通过CCK8实验发现,KLF8（-）HCC细胞相对于对照细胞系,其凋亡比例随着时间的推移而显着增加;PARP是常见的细胞凋亡标志。通过WB实验发现相对于正常细胞系,KLF8（-）HCC细胞系在一定浓度的索拉菲尼（10μM）或顺珀（2μg/ml）的作用下PARP的蛋白表达水平显着升高。5.通过WB实验发现,β-catenin的蛋白表达水平在KLF8（-）HCC细胞系中显着下调;通过qRT-PCR检测发现,KLF8干扰后的HCC细胞中β-catenin下游分子C-myc,Cyclin D1,Survivin的mRNA水平显着下调;FH535是一种常用的Wnt/β-catenin信号传导抑制剂,添加FH535（40nM）后进行了流式细胞检测,发现添加FH535的实验组中KLF8（-）HCC细胞系中EpCAM（+）细胞比例与KLF8（+）HCC系中EpCAM（+）细胞比例基本持平;低粘附成球实验进一步证实FH535抵消了KLF8（-）HCC细胞系与对照细胞系之间成球能力的差异。结论:1.KLF8在HCC及远端转移组织中呈高表达,且KLF8高表达的HCC患者预后更差。2.KLF8在LCSCs中高表达,且通过Wnt/β-catenin信号通路来促进了HCC细胞系的干细胞样特性。3.KLF8促进了HCC细胞对索拉菲尼以及顺珀的耐药。
李惠钰[4]（2015）在《干细胞药物亟待穿越“死亡谷”》文中指出取消造血干细胞医疗技术准入审批，责任主体将由医疗机构承担，有利于政府简政放权、加强监管。根据英国Visiongain公司的调研数据，预计到2016年，中国干细胞产业市场规模将达千亿元。面对这块诱人的“蛋糕”，国内多家公司纷纷砸入重金向干细胞药物开发“押注”。然?
刘晓霖[5]（2014）在《2013年科学事件回顾》文中进行了进一步梳理美国政府关门大吉、干细胞疗法取得新突破……2013年的365天已经充分展示出了科学界的命运多舛。政府关门,致命病毒,台风,还有陨石——2013年科学界的新闻大部分都似乎取材于好莱坞的一系列灾难片。当然大部分都还是美好时刻。太空探索创下新高,针对最神秘的人体器官——大脑——的研究,政府开始注入大量资金,干细胞的治疗和艾滋病治疗也取得了巨大飞跃。下面,我们为大家盘点一些2013年你应该知道的科学界所发生的大事。
姚琳[6]（2013）在《人类多能干细胞在神经管畸形发生及预防机制研究中的应用》文中研究表明研究背景神经管畸形（neural tube defects， NTDs）是最常见、最严重的出生缺陷之一。NTDs的发生是由于囊胚期神经管闭合异常所导致的神经管开放。在世界范围内，其发生率仅次于先天性心脏病，而我国的发生率为全世界最高。除致死性NTDs外，轻型闭合型NTDs不仅将给患儿带来伴随终生的先天残疾及严重的心理缺陷，也会给患儿家庭及社会带来沉重的经济负担。随着孕期叶酸（folic acid，FA）补充的推广，NTDs的流行趋势明显下降，但大规模的研究证实使用FA补充剂后仍有30-50%的NTDs无法预防。另外过量补充FA还可能引起包括新生儿胰岛素抵抗或肥胖在内的一系列非治疗作用，因此FA补充是否应当成为强制饮食添加剂，何种剂量为适宜补充剂量，在国际上引起了广泛的争议。除叶酸缺乏外，一线抗癫痫药物丙戊酸（Valproic acid，VPA）的应用也是NTDs的诱因之一。对小鼠模型的研究提示，VPA可能通过FA代谢途径导致NTDs，并且给予FA补充可能在一定程度上起到保护作用，从而避免NTDs发生。反对使用VPA的学者强调其致畸性对胎儿的严重影响，但是对于部分常见癫痫类型VPA仍然是无法替代的最佳选择。因此很难在妊娠前期或妊娠期更换其他药物，这使VPA在妊娠期的使用陷入进退两难的境地。神经管闭合这一过程始于胚胎第20天，且是贯续发生的发育过程，这使以往的观察研究遇到了很大的困难。同时由于研究对象的特殊性，特别是人类研究存在的伦理问题，使我们无法直接对人类胚胎进行在体实验。此外由于胚胎发育的不可逆性，我们亦无法获知神经管畸形的发生的真实过程，只能通过回顾性分析获得间接的证据。这就使动物模型中获得的信息无法在人类中获得验证。因此如何建立一个人类的NTDs体外研究模型，成为亟待解决的问题。本研究探索利用胚胎干细胞（ES cell）和体细胞来源的诱导多能性干细胞（iPScell）,结合体外神经系定向诱导分化技术，建立人类干细胞来源神经管研究模型。尝试通过不同组别的药物作用实验，了解FA及VPA对神经管形成及神经系发育的作用。同时在此基础上进行药物浓度筛选的初步应用研究，为在人类系统中验证动物模型中所获理论创造条件。第一部分人类多能干细胞来源神经管体外模型建立方法：对人类多能干细胞系H1；H9；iPS4进行培养传代。同时进行神经系分化：去除bFGF，悬浮培养细胞，诱导EB形成；利用神经上皮干细胞（NSC）培养基对EB进行贴壁培养，诱导玫瑰花环样神经管结构（RS）形成,利用NSC标记物进行免疫荧光染色鉴定；利用定向诱导分化技术进行进一步分化：缺省分化大脑皮质大椎体细胞；腹侧尾侧化脊髓前脚运动神经元；神经胶质细胞系定向诱导分化；神经脊系细胞定向诱导分化；对分化获得细胞进行特异性标记物免疫荧光染色鉴定。结果：人类多能干细胞系体外培养传代后仍表达多能转录因子Oct4, Nanog；H1；H9；iPS4均能形成EB；三系均能在诱导条件下形成RS结构，且Pax6，Nestin阳性；定向诱导分化：获得前脑皮质大椎体细胞，Pax6阳性；获得人γ-氨基丁酸能神经元，GABA阳性；获得多巴胺能神经元，TH阳性；获得脊髓前脚运动神经元,ChAT阳性；获得星形胶质细胞，GFAP，S100阳性；获得神经脊细胞，P75，Sox10，SMA阳性。结论：利用三个人类多能干细胞系，通过定向诱导分化，我们首次提出建立人类干细胞来源神经管样结构模型。此模型可以在发育时间，细胞构成，分化潜能上模拟在体神经管的发育过程。它的建立为后续药物浓度筛选提供了条件，为NTDs发生及预防机制研究奠定了基础。第二部分叶酸缺乏及补充对神经管结构形成及神经发育的影响方法：利用第一部分中建立的人类多能干细胞体外神经管分化模型，选择iPS4作为研究对象，使用无FA的PRIM1640培养基作为空白对照组，根据FA梯度分组：0.02uM组，0.2uM组，2uM组，20uM组，80uM组，160uM组。在无FA的PRIM1640培养基中加入相应浓度FA，对iPS4细胞进行分化。分化过程中比较不同FA分组的：EB形成情况；EB中多能标记物Oct4，Nanog和Sox2的mRNA及蛋白质表达水平；RS形成情况；RS中NSCs标记物Pax6及Nestin的mRNA及蛋白质表达水平；远期神经分化率差别；神经胶质细胞分化率差别；神经脊细胞分化率差别。结果：FA缺乏组（0-2uM）：人类诱导多能干细胞分化EB形成率降低（P＜0.05），多能因子表达量下降；RS形成明显减少（P＜0.05）,结构紊乱；NSCs标记物Pax6，Nestin的mRNA，蛋白质表达下调；远期神经元，神经脊分化率呈剂量依赖性降低。FA补充组（20-160uM）：EB形成率升高，多能因子表达量与iPS细胞相似，RS形成数量增多（P＜0.05），神经系标记物表达量上调，远期神经元及神经脊系分化率上升。但在FA补充组中，组间差异均无统计意义。FA缺乏组及FA补充组间神经胶质细胞分化率无显着差别。结论：在人类胚胎发育过程中，FA缺乏或缺失将影响早期神经发育。FA缺乏或缺失将抑制NSCs分化，引起RS形成障碍，进而影响远期神经元及神经脊系的分化，最终导致一系列先天缺陷及综合征。对于FA代谢正常围孕期女性，补充FA使其维持在正常或稍高水平（20uM-80uM，即常规富含FA饮食或400ug/day补充剂量）将有利于神经分化及神经管的形成，而无需给予更高剂量FA（160uM或600ug/day），带来不必要的非治疗作用。第三部分VPA及叶酸对神经系发育的影响及其相互作用方法：利用第一部分中建立的人类多能干细胞体外神经管分化模型，选择iPS4作为研究对象，使用DMEM/F12+N2培养基作为空白对照组，实验分组：VPA组（1mM VPA），VPA+FA组（1mM VPA+160uM FA）。对不同处理组别的iPS细胞进行神经分化，分化过程中比较不同分组的： RS形成情况；RS中NSCs标记物的mRNA及蛋白质表达水平；NSCs殖及凋亡情况；NSCs细胞周期；FA受体Forl在mRNA及蛋白质水平的表达情况；及远期神经分化率差别。结果：与对照组相比，VPA处理组：RS形成明显减少（P＜0.01）,结构紊乱；NSCs标记物Pax6，Nestin的mRNA，蛋白质表达下调（P＜0.001）；NSCs增殖减少（41.01±3.53%VS.80.09±4.1%，P＜0.01）；凋亡显着增多（21.38%VS.3.71%，P＜0.01），凋亡早期细胞亦增高（29.64%VS.9.76%，P＜0.05）；处于G2-S期细胞比例下降（34.75%VS.63.67%，P＜0.05），G0-G1期细胞增多（65.25%vs.36.33%，P＜0.05）；FA受体Forl mRNA及蛋白质表达量下调；远期神经元分化率降低。VPA+FA组：RS形成较VPA单独处理组增多,但较对照组仍减少（P＜0.05），但RS结构较对照无明显差别；NSCs标记物Pax6，Nestin mRNA，蛋白质表达较VPA组明显升高（P＜0.01），与对照组差异无统计学意义；NSCs增殖较VPA单独处理组高，但仍低于对照（58.0±4.67%VS.80.09±4.1%，P＜0.05）；与VPA单药组相比，凋亡稍降低，但差别不具有统计学意义，与对照组相比，细胞死亡多（15.46%VS.3.71%，P＜0.01），但凋亡早期细胞比例无明显差别（9.76%VS.9.86%，P＞0.05）；与VPA单独处理组相比，处于G2-S期细胞比例增多（43.35%VS.34.75%），G0/G1期的细胞比例减少（56.65%VS.65.25%），但与对照组相比，G0-G1期细胞仍高（56.651%VS.36.34%，P＜0.05）；FA受体Forl的mRNA及蛋白质表达量下调；与对照相比，远期神经元分化率仍降低。结论：结果证实治疗剂量的VPA抑制人类多能干细胞的体外神经分化。其通过抑制细胞增殖，促进细胞凋亡，阻碍FA代谢，破坏正常神经管样结构的形成，导致NTDs的发生，同时影响远期神经分化。补充FA实验组证明FA在其他致畸诱因的存在下，可以在一定程度上保护早期神经胚发育，弥补细胞增殖，抑制细胞凋亡，促进FA代谢，但与对照相比仍存在一定异常。这为解决临床治疗存在的矛盾提供了新的研究平台，在药物筛选中有着一定的应用前景。创新点与小结本课题首次将人类多能干细胞体外神经管分化模型应用于出生缺陷—NTDs的研究。在建立人类干细胞来源神经管体外模型的基础上，进行了FA浓度筛选及VPA处理等药物筛选的初步应用研究。首次在人类分化发育系统中验证了动物模型中所获得的理论；为后续制备患者个体化神经管分化模型，研究NTDs发病机制，致病基因筛选，优化预防配方奠定了基础；在提高人口质量，最终避免NTDs发生的道路上，迈出了新的一步。
潘聪,杨柳,孙建平[7]（2012）在《诱导多潜能干细胞在临床治疗中的研究进展及前景分析》文中认为近年来,不同的研究组先后证实:通过转染转录因子组合可诱导终末分化的细胞重新编程为多潜能状态,由此获得的细胞无论是在表观遗传,还是在分化潜能上都与胚胎干细胞十分相似,因此被称为诱导多潜能干细胞。iPS细胞具有能分化成为三个胚层全部种类细胞的能力,并且其细胞来源不受伦理限制,所以在细胞治疗、组织工程和药物开发等领域被寄予厚望。本文综述了iPS细胞安全制备和临床应用的相关研究进展。最新的研究成果预示着不久的将来,我们能够更加高效、安全地建立疾病特异性或个体特异性iPS细胞系,这无疑会掀起一场再生医学的革命。
王东梅,郭子宽[8]（2011）在《新型干细胞治疗:科学和政策》文中研究说明以胚胎干细胞、诱导多能干细胞、间充质干细胞和神经干细胞为代表的新型干细胞治疗,已经进入临床试验阶段。然而,对干细胞本身的了解,干细胞治疗机制的阐明,干细胞安全性和有效性的保障,伦理规范的制定和干细胞治疗实施的管理政策等,亟待深入研究探讨。本文就新型干细胞治疗的上述问题进行了综述。
吕成楷[9]（2011）在《现代生物科技的伦理困境及其对策探究》文中认为现代科技的发展在人类社会的发展进步中起到了重要的推动作用,同时也带来了一些副作用,但是却从来没有像现代生物科技群那样从发展的一开始就受到严密的关注和激烈的争议,各界对现代生物科技的发展非常的敏感,现代生物科技每一次取得成果时都很容易引起哗然,特别是在近些年来的人类基因组计划、DNA重组技术、干细胞技术和克隆技术等这些前沿地带。现代生物科技给人带来了希望,同时又对社会伦理造成了巨大的冲击,使得现代生物科技的发展陷入了一个两难的境地,如何解决这一两难的问题是现代生物科技发展进程中亟需解决的问题。本文将从现代生物科技发展的前沿项目入手,概括出现代生物科技发展遇到的伦理问题,进而探究其中的缘由,最后尝试性的提出解决的办法,从而解决这一两难的问题。本文主要包括五个部分,第一部分探讨现代生物科技的发展和社会伦理建设之间的关系,对于二者关系的明确有助于本文的论述,并以此作为课题研究的切入点;第二部分从现代生物科技发展的几个前沿项目入手,简要介绍现代生物科技的发展概况,重点在于从哲学的层面概括出现代生物科技发展进程中所遇到的伦理问题;第三部分从伦理规范和法律层面来探讨现代生物科技发展进程中出现这些伦理问题的缘由;第四部分从伦理导引方面来探究解决问题的途径,提出在实践中现代生物科技合理发展的伦理依据和基本原则;第五部分从法治的角度来探究解决问题的办法,法治作为一个调整行为关系的重要途径,将会对确保现代生物科技的合理发展发挥重要作用,在这一部分笔者尝试性提出了法治途径在实践中的一些具体的措施。这是本文的行文结构和主要内容。面对既能够为人类带来希望同时也对人类社会存在威胁的现代生物科技,我们都盼望着其能够朝着完全有利于人类社会的方向发展,而避免任何危险的产生,或者将危险降到最低,而对于这一途径的探索,就是本文的写作用意之所在。
廖云君[10]（2011）在《应用去分化脂肪细胞构建工程化脂肪组织的实验研究》文中研究指明背景及目的随着整复重建外科的发展,自体组织移植及人工材料替代修复软组织缺损成为重要的治疗手段,尽管这能有效地改善受区的组织缺损状况,但自体移植物的来源十分有限,又常受到血供及其供区的继发畸形的限制,游离脂肪移植的自体吸收率较高,人工材料易产生排斥反应等,故目前这些方法的治疗效果均不是十分理想,难以完全满足临床的需要。组织工程技术的出现为临床上更好的解决组织缺损等难题提供了一个新的思路。近年来,组织工程技术能以少量种子细胞,经体外扩增后与生物材料复合,修复较大的组织或器官缺损,重建生理功能,为真正实现无损伤修复组织缺损和真正意义上的形态、结构与功能重建开辟了新的途径。组织工程学的发展需要几个必备的因素,即：（1）可获得的种子细胞,并能控制其生长和组织形成；（2）结构精确的三维支架,以适合再造需要的组织量和形状,而且与细胞具有良好的组织相容性；（3）适宜的微环境,能提供充分的血供和营养,维持细胞增殖和组织功能。近年来,人脂肪组织来源的干细胞（Adipose derived stem cells, ASCs）成为当今干细胞研究领域的一大热点。但ASCs是位于人脂肪组织内的一个混杂细胞群体。只有大约40%的细胞能向脂肪细胞分化。因此,ASCs并不能完全满足脂肪组织工程的发展需要。故寻找一种分离容易、增殖能力强、成脂分化率高的更优秀的种子细胞仍然是研究热点。脂肪组织内含有多种不同的细胞,主要有成熟脂肪细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞、组织细胞和干细胞等。大量的脂质聚集使脂肪细胞具有的漂浮性,导致细胞难于体外培养,因此对该细胞的特性研究很少。脂肪细胞由此被认为是处于分化终末期,缺乏增殖能力的一种细胞。有研究表明,成熟脂肪细胞在体外培养的过程中,能脱去脂滴,重新启动增殖机制,开始分裂增生。我们把这种生理转变称之为脂肪细胞去分化。脂肪细胞去分化将开创细胞生理学一个令人惊喜的领域,改变人们对于组织再生能力的许多观点。然而,关于去分化脂肪细胞（dedifferentiate adipocyte, DA）的细胞生物学特性研究还很少。前期研究证实DA在体外定向诱导培养下具有向成脂、成骨、成软骨分化等多向分化能力,且较之ASCs有更高的成脂能力。因此,DA有可能成为脂肪组织工程更具前景的种子细胞来源。组织工程常用的支架材料分为天然材料和人工合成材料,天然材料包括：天然多糖类材料有纤维素、甲壳素、透明质酸等；天然蛋白质类材料有胶原和纤维蛋白等；人工合成的材料有聚乳酸（PLA）、聚乙醇酸（PGA）或两者聚合物聚乳酸-聚乙醇酸（PLGA）、聚四氟乙烯、羟基磷灰石、聚乙烯醇、海藻酸盐等。依据他们各自特点,被不同程度地应用于组织工程的研究。由于应用脂肪细胞组织工程技术修复软组织缺损近期才引起学者们的关注,故而用于构建脂肪组织工程有效的生物材料支架研究不多,目前常用的有可降解的多孔泡沫,如PLGA、透明质酸、膨体聚四氟乙烯等,然而,究竟何种材料能成为脂肪组织工程种子细胞的理想载体尚不十分明确,如果能找出最适合构建工程化脂肪的支架材料,将能大大促进脂肪组织工程的研究。本实验拟研究人DA向脂肪细胞、成骨细胞体外定向诱导分化中相关基因表达,同时判断种子细胞与Ⅰ型固态胶原支架及纤维蛋白胶可注射支架复合后在体内构建组织工程化脂肪组织的可能性,以寻找适宜的脂肪组织工程种子细胞载体,探索构建组织工程化脂肪组织的有效方法；另外,对DA进行AD、EGFP体外荧光标记,观察该标记物对细胞生物性状的影响,为种子细胞研究寻找理想的细胞标记方法。方法1、DA、ASCs的分离、培养及检测自成人吸脂术后抽吸物提取成熟脂肪细胞及ASCs,天花板贴壁培养法诱导成熟脂肪细胞去分化,观察细胞形态变化,获得DA。同时对细胞进行体外定向成脂、成骨诱导分化,并以油红0染色、茜素红染色进行鉴定。Real-time PCR分析细胞内PPARγ、C/EBPα、C/EBPβ、Leptin、LPL、RUNX2、SOX9的表达水平。2.Ad.EGFP转染并标记DAAd.EGFP按不同感染复数（multiphcity of infection, MOI）值（MOI=0,10,20,30,50,100）体外转染DA,进行EGFP荧光标记,倒置显微镜及荧光显微镜观察细胞生长情况及传代后荧光强度的变化；测定腺病毒转染DA的效率；油红0染色检测细胞标记后成脂能力。使用MTT比色分析法检测标记前后细胞的增殖情况,同时将培养细胞上清液进行乳酸脱氢酶（LDH）含量测定,检测Ad.EGFP对细胞的毒性。3、DA与海绵状Ⅰ型胶原蛋白、纤维蛋白胶生物相容性的检测将标记后的DA分别与Ⅰ型胶原蛋白海绵支架、纤维蛋白胶体外联合培养,测定细胞在支架上的黏附率,相差显微镜及电子显微镜动态观察细胞在支架上黏附、伸展、生长和增殖情况；使用台盼蓝拒染法检测细胞活力,油红0染色检测细胞复合支架后成脂能力。4、体内工程化脂肪组织的构建将Ⅰ型胶原支架与纤维蛋白胶可注射支架分别与GFP标记的成脂诱导后DA或ASCs混合,设空白支架为对照组,同体双侧植入裸鼠背部皮下,12周后取出植入物。进行组织工程新生物大体观察和湿重测定后荧光显微镜观察大体组织标本,最后组织学检测、HE染色定性。血管计数法检测新生物血管密度。结果1.分离培养的DA形态类似于成纤维细胞,具有很强的增殖及多向分化能力。在脂肪、成骨分化诱导培养基的作用下,分化出成熟的脂肪细胞和成骨细胞,油红0、茜素红染色阳性。细胞诱导分化前,DA内PPARγ、C/EBPβ的表达高于ASCs,而RUNX2.SOX9的表达低于ASCs.细胞成脂诱导后,DA内PPARγ、C/EBPα、C/EBPβ、Leptin、LPL的基因表达始终高于ASCs,增加的幅度更大；而成骨诱导后,ASCs内RUNX2的表达水平始终高于DA。2.Ad.EGFP可成功进入DA。24h可见绿色荧光,5d荧光表达强度明显较高,DA传代后仍有强荧光表达。转染DA后,不影响其增殖活性。MOI为0、10、20、30、50、100时转染率分别为0%、11.3%、28.5%、43.7%、95.8%、96.3%。细胞标记后不影响向脂肪细胞分化的能力。3.DA可以在海绵状Ⅰ型胶原蛋白支架、纤维蛋白胶支架上生长并逐渐黏附,细胞与不同的支架混合,细胞在支架上的黏附率也不同：DA在海绵状Ⅰ型胶原蛋白支架组（n=6）的细胞黏附率为77.67%±3.33%；DA在纤维蛋白胶组（n=6）的细胞黏附率为91.83%±2.79%,两组采用独立样本t检验比较差异有统计学意义（t=7.996,P<0.001）。而DA在海绵状Ⅰ型胶原蛋白支架组（n=6）的细胞成脂分化率为63.0%±3.0%；DA在纤维蛋白胶组（n=6）的细胞成脂分化率为63.2%±3.3%,两组采用独立样本t检验比较无显着性差异（t=0.091,P=0.929）。DA与支架混合培养后不影响细胞的形态、生长增殖状况,细胞与支架复合后不影响向脂肪细胞分化的能力。4.术后12w取材发现,DA-胶原蛋白组、ASCs-胶原蛋白组、DA-纤维蛋白胶组、ASCs-纤维蛋白胶组于移植物包埋区均可观察到新生组织形成；空白对照组（完全培养基-胶原支架组、完全培养基-纤维蛋白胶组）均未见新生组织形成。DA-胶原蛋白组（n=6）新生组织平均湿重为0.0728±0.0184g；ASCs-胶原蛋白组（n=6）新生组织平均湿重为0.0732±0.0198g；DA-纤维蛋白胶组（n=6）新生组织平均湿重为0.1109±0.0020g, ASCs-纤维蛋白胶组（n=6）新生组织平均湿重为0.1080±0.0028g。DA-胶原蛋白组与ASCs-胶原蛋白组、DA-纤维蛋白胶组与ASCs-纤维蛋白胶组之间湿重比较,无显着性差异（均为P>0.05）。HE染色证实新生组织均为成熟脂肪组织,支架已完全吸收降解；免疫荧光染色阳性证实新生组织为外源性。各组新生微血管密度分别为：DA-胶原蛋白组11.22±2.53;ASCs-胶原蛋白组15.22±2.39；DA-纤维蛋白胶组10.72±2.42:ASCs-纤维蛋白胶组15.00±2.54。DA-胶原蛋白组与ASCs-胶原蛋白组、DA-纤维蛋白胶组与ASCs-纤维蛋白胶组之间微血管密度比较,差异有统计学意义（P均<0.05）。各组新生物纤维化程度分别为：DA-胶原蛋白组24.90%±0.49%；ASCs-胶原蛋白组25.10%±0.73%;DA-纤维蛋白胶组25.00%±0.75%；ASCs纤维蛋白胶组24.70%±0.72%。DA-胶原蛋白组与ASCs-胶原蛋白组、DA-纤维蛋白胶组与ASCs-纤维蛋白胶组之间纤维化程度比较,无显着性差异（均为P>0.05）。在体内,DA表达内皮细胞表面标记——CD31,参与血管的形成。讨论种子细胞是构建组织工程脂肪核心问题之一。在脂肪组织中成熟脂肪细胞已被证实能去分化为DA, DA具有强增殖能力,多向分化能力,高成脂分化率。本实验从人脂肪组织成功获取脂肪细胞,天花板贴壁培养诱导去分化获得DA。DA作为种子细胞与其他细胞相比具有相当的优越性,该细胞来源广泛、取材容易,大量获取,高成脂分化率。组织工程另一核心内容是寻找具有组织再生潜力的支架材料。在生物材料方面,已开发和研制了适用于不同组织构建的生物支架材料。各类材料都具有各自的优点和缺点,而胶原蛋白在组织工程构建中作为支架材料的效果已被肯定。在这个实验中,显示胶原蛋白作为支架材料与ASCs有良好的相容性及黏附性,对细胞无毒性,不影响细胞增殖。同时,细胞标记一直是困扰组织工程技术修复机制研究的一大难题,其在干细胞来源的种子细胞的缺损修复研究中尤为重要。寻找一种直观、长期稳定,同时不影响细胞组织形成能力的标记方法非常重要。在本实验中,EGFP对DA成功进行了标记,且具有上述优点。在这个实验中,脂肪分化诱导后的DA与ASCs一样,与Ⅰ型胶原、或纤维蛋白胶支架混合培养后能在裸鼠皮下新生结构功能完整的脂肪组织块。该研究提示,DA作为种子细胞的确可以应用于脂肪组织的组织工程研究,并且能合成具有三维结构及功能的脂肪组织。结论1、本实验成功地从人皮下脂肪组织中诱导培养出DA,建立了一整套有关DA分离、培养和鉴定的较简便的方法。DA具有很强的增殖和自我更新能力,具有向脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞分化的潜能,尤其是高成脂分化力。DA来源丰富、取材容易,创伤小,是理想的组织工程种子细胞,具有广阔的应用前景。2、腺病毒是较好的基因载体,是一个高效、安全快捷的基因修饰操作系统,EGFP在DA中能持续稳定表达,将为基因治疗和细胞示踪提供有效的实验方法。EGFP对细胞无毒副作用,安全性高,对细胞的生长增殖及成脂分化无明显影响。3、DA可以在海绵状Ⅰ型胶原蛋白、纤维蛋白胶支架上逐渐黏附,细胞黏附率高,生长、增殖良好。支架对细胞无毒性反应。海绵状Ⅰ型胶原蛋白、纤维蛋白胶材料与DA之间具有良好的生物相容性。4、以胶原蛋白和可注射型纤维蛋白胶为支架材料,复合体外培养的人DA,能在体内成功构建成熟的脂肪组织块,并证实细胞参与血管内皮的构成。该研究提示,DA也能为将来软组织缺损的组织工程修复提供重要的种子细胞来源,并为体内研究脂肪细胞的生长代谢提供了研究模型。
二、干细胞研究进退两难（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、干细胞研究进退两难（论文提纲范文）
（1）外泌体源性miR-124对创伤性脑损伤后海马区神经炎症和神经再生的作用和机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 第一部分 外泌体源性MIR-124 的构建、分离和鉴定 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 外泌体MIR-124 对创伤性脑损伤大鼠海马区神经炎症的调控作用研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 外泌体MIR-124 对创伤性脑损伤大鼠海马区神经炎症的调控机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第四部分 外泌体MIR-124 调控创伤性脑损伤大鼠海马区神经炎症后对神经再生的作用研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（2）改性介孔生物活性玻璃纳米颗粒强化的明胶基骨粘合剂的制备和研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 序言 |
| 第一部分 改性介孔生物活性玻璃纳米颗粒强化的明胶基骨粘合剂的制备及理化性能表征 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 改性介孔生物活性玻璃纳米颗粒强化的明胶基骨粘合剂的体外及体内生物学性能研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 用于骨折固定的医用粘合剂的研究进展 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略表 |
| 攻读学位期间发表的文章 |
| 致谢 |
（3）Kr（?）ppel样因子8对肝癌细胞干细胞样特性影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 实验结果 |
| 一、KLF8在HCC及远端转移组织中呈高表达,且KLF8高表达的HCC患者预后更差 |
| 二、KLF8在LCSCs中呈高表达 |
| 三、KLF8促进了HCC细胞系的干细胞样特性 |
| 四、KLF8影响了HCC细胞对索拉菲尼以及顺珀的耐药性 |
| 五、KLF8通过Wnt/β-catenin信号通路来促进HCC细胞的干细胞样特性 |
| 讨论 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 发表论文和科研工作情况说明 |
| 致谢 |
（4）干细胞药物亟待穿越“死亡谷”（论文提纲范文）
| 产业陷困局 |
| 多因素制约 |
| 路在何方 |
（5）2013年科学事件回顾（论文提纲范文）
| 宇宙之谜 |
| 政府关门 |
| 大脑时代 |
| 打败病毒 |
| 航天边界 |
| 基因专利 |
| 摇摆中的环境 |
| 开放科学 |
| HIV研究进展 |
| 干细胞胜利 |
| 身份谜题 |
| 名言佳句 |
（6）人类多能干细胞在神经管畸形发生及预防机制研究中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写索引 |
| 前言 |
| 第一部分 人类干细胞来源神经管体外模型建立 |
| 一、前言 |
| 二、课题设计 |
| 三、实验方法 |
| 四、实验结果 |
| 五、讨论 |
| 第二部分 叶酸缺乏及补充对神经管结构形成及神经发育的影响 |
| 一、前言 |
| 二、课题设计 |
| 三、实验方法 |
| 四、实验结果 |
| 五、讨论 |
| 第三部分 VPA 及叶酸对神经系发育的影响及其相互作用 |
| 一、前言 |
| 二、课题设计 |
| 三、实验方法 |
| 四、实验结果 |
| 五、讨论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在读期间发表论文和参加科研工作情况说明 |
| 致谢 |
（8）新型干细胞治疗:科学和政策（论文提纲范文）
| 1 干细胞及新型干细胞治疗 |
| 2 干细胞治疗的安全性问题 |
| 3 伦理性问题 |
| 4 国内成体干细胞治疗:临床试验中的科学和政策问题 |
（9）现代生物科技的伦理困境及其对策探究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 导言 |
| 一、现代生物科技的发展和社会伦理建设之间的关系 |
| 二、现代生物科技的发展引发的伦理问题 |
| （一) 现代生物科技的发展情况概述 |
| （二) 现代生物科技引发的普遍性伦理问题 |
| 1. 人的自我存在问题 |
| 2. 人和科技的关系：谁服务于谁的问题 |
| 3. 竞争的问题 |
| 4. 人的责任问题 |
| 三、现代生物科技引发伦理问题的原因 |
| （一) 现代生物科技范式的构建难题 |
| （二) 现代生物科技发展下伦理的缺位 |
| （三） 实践中的困难 |
| 1. 对于和谐理念的摇摆不定 |
| 2. 缺乏明确的统一的伦理规范 |
| （四） 法律对现代生物科技的合理发展缺乏有效的规制 |
| 1. 法律规制对伦理引导的补充方面 |
| 2. 法律自身特有的调节作用方面 |
| 四、现代生物科技合理发展的伦理导引 |
| （一) 从整体出发 |
| 1. 现代生物科技的整体 |
| 2. 人类整体 |
| （二) 合理发展的伦理依据及其尝试 |
| （三) 合理发展的基本原则 |
| 1. 维护人的“目的性”原则 |
| 2. 现代生物科技发展的前瞻性原则 |
| 3. 贯彻平等的原则 |
| 4. 恪守正义的原则 |
| 五、现代生物科技合理发展的法律规制 |
| （一) 自觉和强制的结合 |
| （二) 实践中的措施 |
| 1. 推动现代生物科技的相关立法 |
| 2. 加强法律对现代生物科技发展的规制作用 |
| 3. 加强国际协商和发挥国际法的作用 |
| 结束语 |
| 主要参考文献 |
| 个人简历和攻读硕士学位期间的主要学术成果 |
| 后记 |
（10）应用去分化脂肪细胞构建工程化脂肪组织的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 去分化脂肪细胞分化过程中相关基因的检测分析 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 DA体外Ad.EGFP荧光标记及观察标记物对细胞生物性状的影响 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 DA与Ⅰ型胶原蛋白、纤维蛋白胶支架生物相容性的体外实验研究 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第四部分 DA复合Ⅰ型胶原蛋白、可注射性纤维蛋白胶为支架构建组织工程脂肪的体内实验研究 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 攻读学位期间的成果 |
| 致谢 |
| 统计学证明 |
四、干细胞研究进退两难（论文参考文献）
- [1]外泌体源性miR-124对创伤性脑损伤后海马区神经炎症和神经再生的作用和机制研究[D]. 杨永祥. 中国人民解放军空军军医大学, 2019(06)
- [2]改性介孔生物活性玻璃纳米颗粒强化的明胶基骨粘合剂的制备和研究[D]. 唐锦程. 苏州大学, 2019(07)
- [3]Kr（?）ppel样因子8对肝癌细胞干细胞样特性影响的研究[D]. 沈艺南. 第二军医大学, 2016(06)
- [4]干细胞药物亟待穿越“死亡谷”[N]. 李惠钰. 中国科学报, 2015
- [5]2013年科学事件回顾[J]. 刘晓霖. 世界科学, 2014(02)
- [6]人类多能干细胞在神经管畸形发生及预防机制研究中的应用[D]. 姚琳. 第二军医大学, 2013(04)
- [7]诱导多潜能干细胞在临床治疗中的研究进展及前景分析[J]. 潘聪,杨柳,孙建平. 中国医药指南, 2012(22)
- [8]新型干细胞治疗:科学和政策[J]. 王东梅,郭子宽. 组织工程与重建外科杂志, 2011(02)
- [9]现代生物科技的伦理困境及其对策探究[D]. 吕成楷. 中共广东省委党校, 2011(09)
- [10]应用去分化脂肪细胞构建工程化脂肪组织的实验研究[D]. 廖云君. 南方医科大学, 2011(04)