PCR-RDB技术快速产前基因诊断β-地中海贫血

一、应用PCR-RDB技术对β地中海贫血进行快速产前基因诊断（论文文献综述）

刘春林,陈培松,何小洪,余学高,黄浩,黄彬^[1]（2021）在《PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血产前基因诊断中的应用价值》文中认为目的:探讨PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血产前基因诊断中的临床价值。方法:选取2016年1月-2019年8月在中山大学附属第一医院进行常规产前检查或优生遗传咨询的孕妇及其配偶1 001例,受检夫妻双方均为地中海贫血基因携带者,适时抽取羊水等样本,提取基因组DNA,采用PCR-流式荧光杂交技术和传统多重Gap-PCR和PCR-RDB技术对样本进行α和β-地中海贫血基因平行检测,分析基因诊断结果,评估两者在地中海贫血基因诊断中的一致性。结果:2种方法均检出正常基因型389 （占38.86%,389/1001）例,异常基因型59种,共612 （占61.14%,612/1001）例,包括α-地中海贫血416例、β-地中海贫血162例和αβ-复合地中海贫血34例。α-地中海贫血基因型主要为--SEA、-α3.7和-α4.2;β-地中海贫血中检出Cd41-42突变频率最高,其次是IVS-Ⅱ-654和CD17。检出罕见型HKαα/--SEA1例。与Gap-PCR和PCR-RDB技术相比,PCR-流式荧光杂交法的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值和总符合率均为100%,这2种检测方法结果一致性很好。结论:PCR-流式荧光杂交技术操作简便快速,与传统技术联合平行检测有助于提高地中海贫血孕妇产前诊断的准确性。

李佳^[2]（2020）在《三重TaqMan实时荧光定量PCR在缺失型α-地中海贫血临床诊断中的应用研究》文中指出目的:应用本研究团队已成功建立的非常见缺失型α-地中海贫血基因检测技术——三重TaqMan实时荧光定量PCR体系对临床样本进行检测,并采用Gap-PCR法进行验证,探讨行地中海贫血基因检测的婚检、孕检、优生遗传门诊等人群中常见和非常见缺失型α-地中海贫血的阳性检出率及基因型分布情况。方法:抽取2018年8月～2019年7月到广西百色市右江民族医学院附属医院和百色市妇幼保健院进行婚检、孕检、优生遗传咨询等,并行地中海贫血基因检测的人群作为研究对象,采集外周血样本,并收集其平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白量（MCH）及血红蛋白A2（Hb A2）临床数据,对存在部分项目空白的数据完善其血常规和血红蛋白电泳检查,应用三重TaqMan实时荧光定量PCR法及Gap-PCR法进行缺失型α-地中海贫血基因检测,同时分析比较MCV、MCH和Hb A2检验结果。结果:（1）本研究共纳入行地中海贫血基因检测样本1568例。应用三重TaqMan实时荧光定量PCR检出缺失型α-地中海贫血452例,检出率为28.83%。其中,静止型164例,轻型250例,中间型38例。（2）经Gap-PCR分析验证,164例静止型中有126例-α3.7/αα和38例-α4.2/αα;250例轻型中有243例--SEA/αα,5例-α3.7/-α3.7,1例-α3.7/-α4.2和1例--Thai/αα;38例中间型中有28例--SEA/-α3.7,8例--SEA/-α4.2,1例--Thai/-α3.7和1例--SEA/-α21.9。（3）MCV、MCH和Hb A2单项指标或多项指标联合筛查缺失型α-地中海贫血的漏诊率均较高,大于10%;对静止型α-地中海贫血的漏诊率最高。结论:（1）本研究提示三重TaqMan实时荧光定量PCR法不仅能检测出临床上常见缺失型α-地中海贫血,还能检测出罕见缺失型α-地中海贫血。（2）与传统初筛方法相比,三重TaqMan实时荧光定量PCR能够减少漏诊,特别是对静止型α-地中海贫血的漏诊。

叶彩霞^[3]（2020）在《锚定多重PCR联合二代测序法检测母体血浆胎儿游离DNA中父源性突变基因的β-地中海贫血无创性产前检测》文中进行了进一步梳理目的探索β-地中海贫血的无创性产前检测技术,利用孕妇血浆胎儿游离DNA和父亲外周血开发一种对胎儿进行非侵入性产前诊断的临床应用研究。进一步探讨孕妇血浆胎儿游离DNA对胎儿β-地中海贫血非侵入性产前诊断的临床应用价值。方法从海南医学院第一附属医院产前诊断中心就诊的孕妇中,收集了10例夫妇双方携带非同型的β-地贫突变基因的志愿者家系,经孕妇和她的丈夫双方知情同意后签署知情同意书。在妊娠17周至28周时经腹穿刺羊膜腔抽取羊水这一常规的有创性产前检测的方法,应用反向斑点杂交技术检测出羊水细胞的β-地中海贫血基因型,判断有无携带父源性β-地中海贫血突变基因,将此作为金标准;采用乙二胺四乙酸二钾采血管采集孕妇静脉血10ml,同时采集丈夫静脉血2ml,提取孕妇血浆胎儿游离DNA及夫妇双方DNA,应用锚定多重PCR联合二代测序（高通量测序）技术,经过对比计算得出孕妇血浆胎儿游离DNA中是否存在父源性β-地中海贫血突变基因,将其与上述金标准进行对比分析,比较两者的一致性,从而验证应用锚定多重PCR联合二代测序法在孕妇血浆胎儿游离DNA中无创性产前检测胎儿β-地中海贫血的准确性和稳定性。结果1、在10例夫妇非同型β-地中海贫血的高危家系的孕妇血浆胎儿游离DNA中应用锚定多重PCR联合二代测序法经对比计算得出,4个β-地中海贫血高危家系的胎儿存在父源性β-地中海贫血突变基因,其余6个β-地中海贫血高危家系的胎儿不存在父源性β-地中海贫血突变基因。2、存在父源性β-地中海贫血突变基因的4个胎儿,其羊水细胞的β-地中海贫血基因型均遗传了来自其父亲的β-地中海贫血的突变基因;而其余6个胎儿不存在父源性β-地中海贫血突变基因的胎儿,其羊水细胞β-地中海贫血基因型中均没有遗传来自其父亲的β-地中海贫血的突变基因。结论1、应用锚定多重PCR联合二代测序法这一无创性产前检测技术,经对比计算分析后得出胎儿游离DNA中是否存在父源性β-地中海贫血的突变基因,其判断与运用反向斑点杂交技术检测羊水细胞的β-地中海贫血父系遗传结果相一致;2、锚定多重PCR联合二代测序技术是一种无创性产前检测β-地中海贫血的方法,在夫妇携带非同型的β-地中海贫血突变基因的高危家系中,可用于胎儿重型β-地中海贫血的排除。

魏小凤^[4]（2020）在《基于SNPscan及CNVplex技术的地中海贫血突变分子诊断技术研究一例Hb Agrinio合并东南亚型缺失导致Hb H病的分子遗传学研究》文中研究指明研究背景与目的地中海贫血（thalassemia简称地贫）是一组由于α/β珠蛋白基因簇缺失或者突变导致造血障碍从而引起小细胞低色素性的溶血性贫血。地中海贫血通常为常染色体隐性遗传病,男女双方均携带了同型珠蛋白（同为α或者同为β）基因的点突变或者缺失突变,则该夫妇对为高风险夫妇对,有可能生出Hb Bart’s水肿胎、Hb H病以及中间型或重型β地中海贫血患儿。目前地中海贫血的治疗是规律输血配合铁螯合剂进行去铁治疗,对家庭、对社会来说都是沉重的经济负担以及巨大的精神压力。针对地中海贫血而言,预防的重要性胜于治疗。开展人群普查以及遗传咨询,全面普及婚前以及产前检查,以预防Hb Bart’s水肿胎的发生以及中间型或重型β地中海贫血患儿的出生,是我国公共卫生的重要组成部分。根据最新的 HbVar 数据（http://globin.bx.psu.edu/cgi-bin/hbvar）,全世界已经发现超过500种与地贫相关的突变类型。其中中国人群中最常见的α缺失有（--SEA/）,此外还有（-α3.7/）、（-α4.2/）、（--THAI/）、（--FIL/）、（--11.1kb/）和（-α27.6kb/）等,最常见的α点突变有αQSα/、αCSα/、αWSα/,此外还有αCD31α和αCD78α/等。中国人群中已报道过的β地中海贫血点突变至少有54种,其中以下这八种突变大约占全部突变类型93%以上:HBB:c.126129delCTTT,HBB:c.52A>T,HBB:c.316-197C>T,HBB:c.-78A>G,HBB:c.216217insA,HBB:c.79G>A,HBB:c.92+1G>T和HBB:c.-79A>G,此外还有HBB:c.-123A>T、HBB:c.-140C>T和HBB:c.162delT等;中国人群中已报道过的缺失型β-地中海贫血有5种突变类型,包括Chinese缺失、东南亚型HPFH缺失、Taiwanese缺失、Gantonese 缺失和 Yunnanese 缺失。地中海贫血点突变的基因检测方法目前主要是PCR-RDB、Sanger测序、荧光PCR熔炼曲线法、HPLC、HRM和ARMS-PCR等,缺失型地中海贫血的突变检测方法主要有Southern blot、Gap-PCR、MLPA、荧光定量PCR和array-CGH等。它们或操作繁琐,或检测通量低,虽可以应用于常规临床检测,但不适用于大人群的基因筛查。近年热门的二代测序以其高准确性、高灵敏性以及高通量可以应用于大人群的基因筛查,但是费用昂贵,难以大范围推广应用。建立简单快捷、准确可靠、经济实用的高通量检测技术,既满足地中海贫血大规模人群筛查的公共卫生需要,也是目前地贫基因诊断技术创新的新挑战。本研究的目标即建立一种基于同一检测平台的地贫分子诊断新途径与新方法,准确可靠、简单实用、高通量、低成本,适合当前地贫大规模人群筛查和常规分子诊断。研究方法与内容根据地贫的发病机制及分子基础,针对中国人群中已报道（截止本研究启动时）的α/β地贫点突变以及缺失突变,本研究具体实施了以下研究方案。1.SNPscan的地中海贫血点突变检测技术--利用连接酶的高特异性识别SNP位点的等位基因,在连接探针末端加入长度不同的非特异性序列,然后通过连接酶的连接反应获得不同位点所对应的不同长度的连接产物,接着利用带有荧光标记的通用引物把连接产物作为模板再进行PCR反应,把连接产物扩增出出来,接下来进行毛细管电泳,使不同荧光标记的不同序列分离出来,最后对电泳图谱进行分析以达到对不同SNP位点的基因型分型的目的。2.CNVplex的地中海贫血缺失突变检测技术--利用连接酶的高特异性连接反应使目的片段通过杂交、连接,从而在连接探针末端引入长度不同的非特异性序列以及利用连接酶的特异性连接反应获得不同位点所对应的长度各异的连接产物,再通过带有不同标记荧光的通用引物通过PCR反应将连接产物进行扩增,然后把PCR产物上测序仪跑毛细管电泳从而把不同长度的片段分离出来,最后对毛细管电泳图谱进行分析读取各个位点的峰值,通过计算各个目标区峰相对参照峰的比值,算出待检区域的拷贝数。3.诊断方法初步评价。为当前地贫大规模人群筛查提供简单实用的分子诊断方法,是本研究的目标之一,为初步评价新诊断方法用于地贫人群筛查的实用性与可行性,本研究抽取100份婚前/产前检查标本,应用新诊断方法及gap-PCR、Sanger测序同时进行检测,对检测结果进行比较。4.诊断方法的大样本盲法分析评价。准备了 1747份表型资料齐全、已采用gap-PCR、RDB、Sanger测序等方法进行地贫分子诊断的待检样本,将这些样本进行盲法编号后,应用新诊断方法进行检测分析;然后对比分析相对应的基因检测结果,对于结果不相符的标本,再用gap-PCR或Sanger测序进行对比检测,以全面评价新诊断方法进行地贫分子诊断的灵敏度、准确性及实用性。研究结果根据研究目标,通过实施具体研究方案,所获得的研究结果如下:1.建立了稳定可靠的地中海贫血点突变检测技术--SNPscan。该体系基于ABI 3130xl PRISM的遗传分析系统,共分两个panel,panelA1可检测38个不同的地贫点突变位点,panelA2可检测29个不同的地贫点突变位点,经验证,其特异性可靠。2.建立了稳定可靠的地中海贫血缺失突变检测技术--CNVplex。该体系基于ABI 3130xl PRISM的遗传分析系统,通过对HBB、HBA1、HBA2的基因拷贝数检测进行缺失型地贫诊断,经验证,其特异性可靠。3.初步评价实验中,应用新方法和gap—PCR及Sanger测序法,同步检测100例婚检/产检gDNA标本,分别检出α地贫杂合子16例,β地贫杂合子5例,经对比分析,两方法的检测结果相符,且均为中国人群常见的变异基因型,新方法的准确性为100%。新技术简单易行、通量高,检测结果准确可靠,初步说明了新方法进行大规模人群筛查的可行性与实用性。4.诊断方法的大样本盲法分析评价:1747例样本的基因分析结果为正常对照样本100例;Hb H病样本636例,其中HbH病合并β地中海贫血杂合子样本31例;中间型/重型β地中海贫血样本1011例,其中中间型/重型β地中海贫血合并轻型/静止型α地中海贫血样本155例,中间型/重型β地中海贫血合并Hb H病5例。SNPscan及CNVplex检测方法检测结果与传统方法基因分型结果相符1737例,不相符10例。经进一步验证,不相符的10例样本检测结果与SNPscan及CNVplex检测结果一致。SNPscan及CNVplex检测方法进行地中海贫血点突变、缺失检测的准确率达到100%,SNPscan及CNVplex检测方法稳定、可靠。结论本研究建立了 SNPscan及CNVplex方法检测地中海贫血点突变、缺失或重复。SNPscan检测方法可检测α/β-地中海贫血67个点突变位点,CNVplex检测方法可检测缺失型α/β-地中海贫血。通过对特异性与准确性的全面评价,以及人群筛查的实用性初步评价,充分说明了本研究建立的分子诊断新方法准确可靠、简单实用、高通量、低成本,适合地贫的大规模人群筛查和常规诊断。SNPscan具有通量高、操作简单、准确率高、成本低、耗时短的优点,CNVplex具有通量高、操作简单、准确率高、成本低的优点,既适用于临床基因分型检测,更适用于大人群基因筛查。研究背景与目的α地中海贫血是α珠蛋白基因突变使α珠蛋白链的合成完全或部分抑制而引起的遗传性溶血性贫血,是我国南方最常见的单基因遗传病之一。该病主要是由于α珠蛋白基因的缺失引起,少部分是由于α珠蛋白基因点突变导致的。本研究结合血液学表型和珠蛋白基因型数据,对一例广东的重度贫血患儿实施准确诊断。研究方法与内容采集该患儿的家系成员的外周血,采用全自动三分类血液分析仪及HPLC血红蛋白分析系统进行红细胞参数和血红蛋白组分分析,采用传统的酚-氯仿法提取基因组DNA,采用Gap-PCR、反向点杂交及Sanger测序等方法分析家系成员的珠蛋白基因型。研究结果血液学表型数据显示该患儿表现为小细胞低色素的重度贫血（MCV60.6pg,MCH18.1fL,Hb50g/L）,血红蛋白组分分析发现异常血红蛋白H带阳性;患儿外婆表型无异常,患儿父母及舅舅均表现出小细胞低色素特征。基因分析发现患儿基因型为--SEA/ααCD29,其父亲基因型是--SEA/αα,其母亲及舅舅基因型均为ααCD29/αα。结论Hb Agrinio（HBA1:CD29T>C）为不稳定异常血红蛋白,血红蛋白组分检测为阴性,必须通过基因分析的方法才能诊断。该突变复合α0地贫表现为HbH病,且贫血程度偏重。

陈小洁,陆小燕,曾海莲,蒋丽,陶华青,孟燕萍^[5]（2019）在《广东省清远市清城区地中海贫血产前基因诊断的临床研究》文中指出目的分析对孕妇产前行地中海贫血基因诊断的意义。方法 288例行地中海贫血基因诊断的孕妇作为研究对象,对孕周<16周的孕妇行绒毛穿刺活检,孕周>16周的孕妇行脐血或羊水穿刺检查。分别统计α、β地中海贫血基因携带者数量及基因类型占比情况。对轻中度地中海贫血胎儿产后进行3～12个月随访并观察婴儿情况。结果α地中海贫血基因携带者共有107例,其中:-SEA/αα基因类型约占69.16%,αα/-α3.7基因类型约占9.35%,ααα/-α基因类型约占6.54%,-SEA/-α4.2基因类型约占4.67%,-SEA/-α3.7基因类型约占2.82%,αCSα/αα基因类型约占1.88%,αQSα/αα基因类型约占1.88%,αWSα/αα基因类型约占0.93%,-α3.7/-α3.7基因类型约占0.93%,-α3.7/-α4.2基因类型约占0.93%,αQSα/-α4.2基因类型约占0.93%。β地中海贫血基因携带者共有44例,其中:CD41-42（-TCTT）基因类型约占52.27%,CD17（A→T）基因类型约占11.36%,IVS2-654（C→T）基因类型约占9.09%,-28（A→G）基因类型约占9.09%,CD71-72（+A）基因类型约占6.82%,CD41-42/CD41-42基因类型约占4.55%,CD41-42/CD17基因类型约占4.55%,CD27/28基因类型约占2.27%。顺利产出胎儿284例,有1例为中间型β地中海贫血,于医院接受输血治疗。有2对夫妻双方均患有α地中海贫血,产前基因诊断结果显示胎儿均无重型地中海贫血。结论通过对有同类型地中海贫血基因夫妇产前进行基因诊断,能有效了解胎儿贫血情况,从而利于临床对重度地中海贫血者早期给予终止妊娠,以避免对母体造成伤害。

黄琦玲^[6]（2019）在《500例孕妇地中海贫血筛查与产前诊断分析》文中提出目的研究孕妇地中海贫血筛查与产前诊断的意义。方法 500例孕妇均进行产前地中海贫血筛查,对孕妇先行血常规检测,若其中一方平均红细胞体积（MCV）≤82 fl或平均血红蛋白含量（MCH）≤27 pg,则夫妇双方均进行血红蛋白电泳分析,若双方血红蛋白电泳分析结果均异常,则需接受地中海贫血基因检测。观察血常规检查结果、基因检测结果及随访结果。结果 500对夫妇中, 148对夫妇需做地中海贫血血红蛋白电泳分析筛查,阳性99例,其中孕妇55例,配偶44例。25对夫妇需做地中海贫血基因检测,显示同型的10对夫妇产前基因检测结果轻度α地中海贫血3对（12%）,中度α地中海贫血2对（8%）,重度α地中海贫血5对（20%）。此10对夫妇生产后,发现胎儿患有血红蛋白H病1例（4%）、正常胎儿4例（16%）。另外15对夫妇产前β基因检测结果孕妇正常6例（24%）、重度β地中海贫血3例（12%）、轻度β地中海贫血4例（16%）、中度β地中海贫血2例（8%）。8例重度地中海贫血孕妇接受建议均已引产,基因检测7例轻度地中海贫血孕妇产后胎儿随访,绝大多数无明显异常表现,有1例为中度β地中海贫血,于医院接受输血治疗。结论通过对有同类型地中海贫血基因夫妇产前进行基因诊断,能有效了解胎儿贫血情况,利于临床对重度地中海贫血者早期给予终止妊娠,避免对母体造成伤害。

张卫娜^[7]（2019）在《江西成人地中海贫血基因缺陷分析及利用红细胞参数建立β-地中海贫血与缺铁性贫血鉴别公式》文中研究说明目的:了解江西成人地中海贫血基因缺陷类型,并建立新的红细胞参数运算公式以鉴别成人β-地中海贫血（β-thalassemia,β-TT）与缺铁性贫血（iron-deficiency anemia,IDA）。方法:对2013年6月至2017年12月南昌大学第二附属医院门诊及住院部的小细胞低色素性贫血患者进行铁蛋白及地中海贫血基因检测。同时收集TT、IDA及健康体检者的红细胞（RBC）、血红蛋白（HB）、平均红细胞体积（mean corpuscular volume,MCV）、平均红细胞血红蛋白含量（mean corpuscular hemoglobin,MCH）、平均红细胞血红蛋白浓度（mean corpuscular hemoglobin concentration,MCHC）、红细胞分布宽度-变异系数（red blood cell distribution width-coefficient of variation,RDW-CV）、红细胞分布宽度-标准差（red blood cell distribution width-standard deviation,RDW-SD）等参数数据。分析不同分组间红细胞参数的差异及在两者鉴别中的作用;通过绘制AUC曲线,得出各单个红细胞参数在鉴别β-TT及IDA时的敏感度、特异度、约登指数及AUC曲线下面积。利用多参数logistic回归分析建立鉴别β-TT及IDA的数学模型,并与国外报道的12个鉴别公式进行对比。结果:共确诊地中海贫血245例,其中包括ɑ-地中海贫血（ɑ-thalassemia,ɑ-TT）119例,β-TT 117例,αβ复合型地贫9例,江西成人最常见的α-TT是--SEA/αα,--SEA/-α3.7,-α3.7/αα。β-TT最常见的基因缺陷是IVS-II-654、CD41/42及CD17。ɑ-TT静止型、标准型、HBH型间红细胞参数存在差异。3种最常见的β-TT患者的RBC、Hb、MCV差异均无统计学意义。正常人、β-TT及IDA组红细胞参数存在差异,在IDA与正常人红细胞参数的比较中,年龄,RBC,HB,MCV,MCH,MCHC,RDW-CV,RDW-SD均具有统计学差异。在β-TT与正常人红细胞参数的比较中,除年龄及RBC外,均具有统计学差异。在IDA及β-TT的比较中,除外MCH,均具有统计学差异。单个红细胞参数中,红细胞分布宽度-标准差（red blood cell distribution width-standard deviation,RDW-SD）鉴别效能较好。通过多参数logistic回归分析建立鉴别β-TT及IDA的数学模型为LZ=-134.616+8.092×RBC-0.359×HB+1.093×MCV-2.343×MCH+0.35×MCHC+0.511×（RDW-CV）-0.215×（RDW-SD）,相比其他鉴别公式,本文利用多个红细胞参数建立的公式,其ROC曲线下面积（area under the ROC curve,AUC）、约登指数均最高。结论:--SEA/αα,--SEA/-α3.7,-α3.7/αα,IVS-II-654,CD41/42及CD17是江西地中海贫血最常见的基因缺陷。ɑ-地中海贫血静止型、标准型、HBH型间红细胞参数存在统计学差异。3种最常见的β-TT类型的RBC、Hb、MCV差异均无统计学意义。正常人、β-TT及IDA组红细胞参数存在统计学差异。单个红细胞参数中,红细胞分布宽度-标准差鉴别β-TT及IDA效能最好。本研究建立的新的红细胞参数公式对β-TT及IDA鉴别具有有较高应用价值。

庄倩梅^[8]（2019）在《地中海贫血几种筛查模式的应用效果比较》文中进行了进一步梳理目的对四种地中海贫血筛查模式的应用效果进行比较,为更好地防控地中海贫血提供临床依据。方法收集2017年7月至2018年12月,来自泉州市12个县区的参与婚检、优检、产检的已确诊的670对地贫基因携带夫妇和568对非地贫基因携带夫妇作为研究对象,以夫妇的地贫基因诊断结果为金标准,对研究对象同时进行血常规分析、Hb分析以及对双方为携带同型地贫基因夫妇进行产前诊断。四种地贫筛查模式:筛查模式一:妻子进行血常规筛查,若妻子血常规MCV<80fl和（或）MCH<27pg,则进行血红蛋白电泳分析;若血红蛋白电泳分析Hb A2≤2.5或Hb A2≥3.5或Hb F≥2.0或出现异常血红蛋白带,则丈夫进行血常规和血红蛋白电泳分析,若丈夫血常规筛查或血红蛋白电泳分析任一项筛查指标阳性,夫妻双方同时进行地贫基因检测。筛查模式二:妻子同时进行血常规和血红蛋白电泳分析,若妻子血常规MCV<80fl和（或）MCH<27pg或血红蛋白分析Hb A2≤2.5或Hb A2≥3.5或Hb F≥2.0或出现异常血红蛋白带,丈夫同时进行血常规和血红蛋白电泳分析,若丈夫血常规筛查或血红蛋白电泳分析任一项筛查指标阳性,夫妻双方同时进行地贫基因检测。筛查模式三:妻子进行血常规筛查,若妻子MCV<80fl和（或）MCH<27pg,则进行血红蛋白电泳分析;若血红蛋白电泳分析Hb A2≤2.5或Hb A2≥3.5或Hb F≥2.0或出现异常血红蛋白带,则丈夫进行血常规筛查,若丈夫血常规MCV<80fl和（或）MCH<27pg,则进行血红蛋白电泳分析;若丈夫若血红蛋白电泳分析Hb A2≤2.5或Hb A2≥3.5或Hb F≥2.0或出现异常血红蛋白带,夫妻双方同时进行地贫基因检测。筛查模式四:夫妻双方同时进行血常规筛查,若任一方血常规MCV<80fl和（或）MCH<27pg,夫妻双方同时进行血红蛋白电泳分析,若任一方Hb A2≤2.5或Hb A2≥3.5或Hb F≥2.0或出现异常血红蛋白带,夫妻双方同时进行地贫基因检测。结果筛查模式一:阳性预测值为7.39%（43/582）,阴性预测值为94.66%（621/656）,特异度为53.53%（621/1160）,灵敏度为55.13%（43/78）,漏诊率为44.87%（35/78）;筛查模式二:阳性预测值为7.25%（75/1035）,阴性预测值为98.52%（200/203）,特异度为17.24%（200/1160）,灵敏度为96.15%（75/78）,漏诊率为3.85%（3/78）;筛查模式三:阳性预测值为7.86%（11/140）,阴性预测值为93.90%（1031/1098）,特异度为88.88%（1031/1160）,灵敏度为14.10%（11/78）,漏诊率为85.90%（67/78）;筛查模式四:阳性预测值为6.76%（73/1080）,阴性预测值为96.84%（153/158）,特异度为13.19%（153/1160）,灵敏度为93.59%（73/78）,漏诊率为6.41%（5/78）,数据显示筛查模式二的阴性预测值最高,漏诊率最低。结论筛查模式二为地中海贫血最佳筛查模式,在条件允许下,应选择筛查模式二（妻子血常规和血红蛋白电泳并联+丈夫血常规和血红蛋白电泳并联）的模式。

付月^[9]（2018）在《四川泸州地区228例0-18岁地中海贫血患儿基因类型分析》文中研究指明目的:地中海贫血（thalassemia）是全球分布范围最广、发病率最高、危害最严重的常染色体单基因隐形遗传性疾病之一,是因为珠蛋白基因的异常表达致使蛋白质合成紊乱造成的。地中海贫血广泛分布于世界各地,据统计全球约5%的人口携带该致病基因,其已被多个国家列为严重的公共健康问题,我国以两广地区、海南等南方地区为高发。由于珠蛋白基因突变的多样性,导致其基因型各不相同,其临床表现亦轻重不一,重型地中海贫血尚无经济有效的治疗策略,只能依靠规律输血、祛铁等以维持生命,可致残,甚至致死,给家庭和社会带来难以言喻的负担,也严重威胁人类生命健康。因此,通过遗传咨询及产前早期诊断是目前公认的能够减少地贫发病率的有效办法,本研究目的在于探讨四川泸州地区α和β地中海贫血患儿基因突变类型及频率,为泸州地区开展地中海贫血遗传咨询及预防计划提供理论参考。方法:1.病例来源:2013年1月至2015年12月由泸州市四县三区转诊或转送到西南医科大学附属医院就诊的血液学指标异常并已排除缺铁和其他贫血疾病的患儿,疑诊患儿均为泸州户籍。2.对血常规异常,即血红蛋白含量（Hb）<110g/L,平均红细胞容积（MCV）<80fl,平均红细胞血红蛋白量（MCH）<27pg的小细胞低色素贫血患儿,有必要行血红蛋白电泳检测,当HbA2<2.5%和/或出现HbH、HbBart’s或HbCS,未出现其他异常Hb带,为α-地中海贫血初筛阳性;当HbA2>3.5%和/或HbF>2%,为β-地中海贫血初筛阳性。对血液学表型阳性的患儿行α和β地中海贫血基因诊断。3.用跨越断裂位点（gap-PCR）技术检测国内常见3种缺失型α地中海贫血,包括--SEA、-α3.7、-α4.2;用PCR-RDB对国内8种常见和9种少见基因突变类型进行检测,包括CD41-42（-CTTT）、CD17（AAG>TAG）、IVS-II-654（C>T）、CD43（G-T）、-29（A-G）、-28（A-G）、CD71-72（+A）、βE、CD14-15（+G）、CD27-28（+C）、IVS-1-1（G-T）、IVS-1-5（G-C）、CD31（-C）、-30（T-C）、-32（C-A）、Int（ATG>AGG）、Cap（-AAAC）。结果:1.共检测出228例地中海贫血患儿,α-地中海贫血39人,阳性率10.21%,β-地中海贫血189人,阳性率49.47%;2.α-地中海贫血检出基因突变类型3种,基因型5种;静止型α地中海贫血共6例,分别为αα/-α3.7（12.82%）,αα/-α4.2（2.56%）,轻型α地中海贫血16例,为αα/--SEA（41.02%）,中间型α地中海贫血共17例,分别为-α3.7/--SEA（33.33%）,-α4.2/--SEA（10.27%）,以αα/--SEA最高;3.β-地中海贫血检出8种基因突变类型和13种基因型,检出突变基因分别为:CD17、CD41-42、IVS-II-654、-28、CD14-15、CD71-72、CD43、βE,分别占44.04%、25.39%、21.76%、3.62%、2.07%、1.55%、1.03%、0.52%,前3种依次为CD17（A-T）（44.04%）、CD41-42（-TCTT）（25.39%）、IVS-II-654（C-T）（21.76%）;13种基因型,其中杂合子183例,双重杂合子6例,以杂合子所占比例最高。结论:1.泸州地区β地中海贫血检出率高于α地中海贫血,最常见的β地中海贫血点突变基因分布为CD17（A-T）、CD41-42（-TCTT）、IVS-II-654;缺失型α地中海贫血突变基因以--SEA最常见。2.gap-PCR与PCR-RDB技术能够精确有效的对常见地中海贫血突变基因进行检测,具有较好的临床应用价值3.遗传咨询和产前早期的诊断对地中海贫血的预防和干预出生缺陷有着重要的意义。

付月,刘文君^[10]（2018）在《地中海贫血实验室诊断研究进展》文中研究指明地中海贫血的实验室诊断方法主要包括筛查法和基因检测技术两大类。前者以红细胞形态及理化特性为其诊断依据,包括血常规检测、红细胞形态学检测、红细胞渗透脆性实验、血红蛋白分析技术等;后者主要以PCR为基础而进行的各种基因检测技术,主要包括跨越断裂位点（gap-PCR）法、PCR结合反向点杂交法（PCR-RDB）、实时荧光定量PCR、基于实时PCR的溶解曲线分析技术、基因芯片、DNA序列测定等。本文综述近年来地中海贫血的实验室诊断方法,筛查法和基因诊断技术的联合应用,为地中海贫血的诊断提供参考。

二、应用PCR-RDB技术对β地中海贫血进行快速产前基因诊断（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、应用PCR-RDB技术对β地中海贫血进行快速产前基因诊断（论文提纲范文）

（1）PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血产前基因诊断中的应用价值（论文提纲范文）

（2）三重TaqMan实时荧光定量PCR在缺失型α-地中海贫血临床诊断中的应用研究（论文提纲范文）

（3）锚定多重PCR联合二代测序法检测母体血浆胎儿游离DNA中父源性突变基因的β-地中海贫血无创性产前检测（论文提纲范文）

（4）基于SNPscan及CNVplex技术的地中海贫血突变分子诊断技术研究一例Hb Agrinio合并东南亚型缺失导致Hb H病的分子遗传学研究（论文提纲范文）

（5）广东省清远市清城区地中海贫血产前基因诊断的临床研究（论文提纲范文）

（6）500例孕妇地中海贫血筛查与产前诊断分析（论文提纲范文）

（7）江西成人地中海贫血基因缺陷分析及利用红细胞参数建立β-地中海贫血与缺铁性贫血鉴别公式（论文提纲范文）

（8）地中海贫血几种筛查模式的应用效果比较（论文提纲范文）

（9）四川泸州地区228例0-18岁地中海贫血患儿基因类型分析（论文提纲范文）

（10）地中海贫血实验室诊断研究进展（论文提纲范文）

四、应用PCR-RDB技术对β地中海贫血进行快速产前基因诊断（论文参考文献）

• [1]PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血产前基因诊断中的应用价值[J]. 刘春林,陈培松,何小洪,余学高,黄浩,黄彬. 中国实验血液学杂志, 2021(01)
• [2]三重TaqMan实时荧光定量PCR在缺失型α-地中海贫血临床诊断中的应用研究[D]. 李佳. 右江民族医学院, 2020(04)
• [3]锚定多重PCR联合二代测序法检测母体血浆胎儿游离DNA中父源性突变基因的β-地中海贫血无创性产前检测[D]. 叶彩霞. 海南医学院, 2020
• [4]基于SNPscan及CNVplex技术的地中海贫血突变分子诊断技术研究一例Hb Agrinio合并东南亚型缺失导致Hb H病的分子遗传学研究[D]. 魏小凤. 南方医科大学, 2020
• [5]广东省清远市清城区地中海贫血产前基因诊断的临床研究[J]. 陈小洁,陆小燕,曾海莲,蒋丽,陶华青,孟燕萍. 中国实用医药, 2019(34)
• [6]500例孕妇地中海贫血筛查与产前诊断分析[J]. 黄琦玲. 中国实用医药, 2019(31)
• [7]江西成人地中海贫血基因缺陷分析及利用红细胞参数建立β-地中海贫血与缺铁性贫血鉴别公式[D]. 张卫娜. 南昌大学, 2019(01)
• [8]地中海贫血几种筛查模式的应用效果比较[D]. 庄倩梅. 福建医科大学, 2019(07)
• [9]四川泸州地区228例0-18岁地中海贫血患儿基因类型分析[D]. 付月. 西南医科大学, 2018(10)
• [10]地中海贫血实验室诊断研究进展[J]. 付月,刘文君. 中国实验血液学杂志, 2018(02)

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