一、应激对大鼠海马金属硫蛋白亚型表达的影响（论文文献综述）
吴遵桃[1]（2020）在《生命早期铅致SD大鼠学习记忆损伤及白藜芦醇的保护作用》文中提出目的生命早期铅暴露会对海马突触可塑性造成不可逆的影响,最终导致学习记忆功能障碍。然而,其损伤的具体机制尚未阐明。本研究通过建立生命早期铅暴露模型,以探究生命早期铅暴露对大鼠海马组织中SIRT1及其相关信号通路分子表达变化和由该通路调控的下游突触相关蛋白的表达差异,找寻铅暴露致突触可塑性损伤的具体机制。研究白藜芦醇在生命早期铅暴露诱导学习记忆损伤中的具体作用,为生命早期铅暴露致认知功能障碍的防治提供依据。方法以Sprague-Dawley大鼠为研究对象建立生命早期铅暴露模型,选用出生后21天断乳子代雄性大鼠进行后续实验。采用Morris水迷宫检测生命早期铅暴露对各组大鼠空间学习记忆能力的影响,用石墨炉原子吸收光谱法检测大鼠血铅含量,RT-qPCR检测海马组织中SIRT1/CREB/BDNF通路分子及其调控的突触前蛋白Syn-1、LIMK1及突触后蛋白PSD-95、NL-1的mRNA的变化趋势,采用Western blot检测这些目的基因蛋白的表达。结果1.生命早期铅暴露对大鼠空间学习记忆的影响水迷宫结果显示,与对照组相比,0.2%染铅组大鼠在定位导航实验中的潜伏期明显延长（P<0.05）,空间探索实验中第一次上平台时间显着增加（P<0.01）,穿越平台次数和在目标象限停留时间百分比明显降低（P<0.01;P<0.001）。此外,与0.05%染铅组相比,其逃避潜伏期延长（P<0.05）,穿越平台次数和目标象限停留时间百分比也显着降低（P<0.05;P<0.01）。与0.2%染铅组相比,0.2%染铅+Res组大鼠的逃避潜伏期和第一次上台前时间均明显缩短（P<0.05;P<0.05）,穿越平台次数及目标象限停留时间百分比都显着增加（P<0.05;P<0.05）。2.石墨炉原子吸收光谱法检测大鼠血铅含量三个不同浓度染铅组的血铅含量相对于对照组而言均显着增加（P0.05%vs对照<0.001;P0.1%vs对照<0.001;P0.2%vs对照<0.001）,且增加的趋势与染铅浓度呈正相关（P0.1%vs 0.05%<0.001;P0.2%vs 0.05%<0.001;P0.2%vs0.1%<0.001）。与 0.2%染铅组相比,0.2%染铅+Res组和0.2%染铅+EDTA组的血铅含量均明显降低（P<0.001;P<0.001）,但仍比对照组高（P<0.001;P<0.01）。3.各组大鼠海马组织中目的基因mRNA的表达情况RT-qPCR 结果显示,0.2%染铅组的 SIRT1、CREB、BDNF、Syn-1、LIMK1、PSD-95、NL-1的mRNA表达水平与对照组和0.05%组相比均明显下调,且差异都具有统计学意义。此外,与0.1%染铅组相比,0.2%染铅组中SIRT1、Syn-1、LIMK1、PSD-95和NL-1的表达水平也显着降低（P<0.05;P<0.01）。0.2%染铅+Res 组中 SIRT1、CREB、BDNF、Syn-1、LIMK1、PSD-95、NL-1 的 mRNA表达水平与0.2%染铅组相比均显着增加,且差异都具有统计学意义。4.各组大鼠海马组织中目的基因蛋白的表达水平Western blot结果显示,与对照组相比,0.2%染铅组的SIRT1、p-CREB、BDNF、Syn-1、LIMK1、PSD-95、NL-1的蛋白表达水平与对照组和0.05%组相比均下调,且差异都具有统计学意义。与0.2%染铅组相比,0.2%染铅+Res组的SIRT1、p-CREB、BDNF、Syn-1、LIMK1、PSD-95、NL-1的蛋白表达水平均明显上调,且差异均具有统计学意义。与对照组相比,0.05%染铅组Pro-BDNF表达水平显着降低（P<0.01）。0.2%染铅组的表达水平与对照组、0.05%染铅组及0.1%染铅组相比均明显增加（P<0.001;P<0.001;P<0.001）,且Res可以削弱其因铅暴露导致的上调（P<0.001）。结论1.生命早期铅暴露对突触可塑性的损伤与SIRT1/CREB/BDNF信号通路分子及其调控的突触前后蛋白的表达下降有关。2.白藜芦醇可以通过激活SIRT1/CREB/BDNF信号通路进而上调突触前和突触后蛋白的表达从而改善铅暴露导致的学习记忆损伤。
王道合[2]（2020）在《低氧预处理和七氟醚预处理对成年大鼠短暂性全脑缺血的保护作用及对Jun-B mRNA表达的影响》文中研究指明目的:观察低氧预处理和七氟醚预处理对成年大鼠短暂性全脑缺血（Transient global cerebral ischemia,tGCI）的保护作用及对Jun-B mRNA表达的影响。方法:成年健康雄性（Sprague Dawley,SD）大鼠,48只,体重240～250g,随机分4组:全脑缺血再灌注组（tGCI组）,低氧预处理（Hypoxic preconditioning,HPC）组,七氟醚预处理（Sevoflurane,SEV）组,低氧+七氟醚预处理组（H+S组）,每组大鼠12只。tGCI组:用Pulsinelli四血管闭塞法（4VO）建立10 min tGCI大鼠模型;HPC组:反复暴露于减压舱内模拟海拔4000m,每天1 h,连续5 d;SEV组:大鼠接受2.4%七氟醚与100%氧气混合气体的预处理,1h/d,连续5d;H+S组:低氧预处理联合七氟醚预处理,连续5天,1 h/d。缺血再灌注4 h（T1）、24 h（T2）、7 d（T3）分别处死大鼠,制作海马组织冰冻切片,行（Fluoro-Jade B,FJB）荧光染色,观察海马组织神经细胞凋亡,通过Trizol提取海马组织RNA,使用q PCR方法检测分析海马组织中Jun-B mRNA相对表达含量,最后采用统计软件进行数据分析。结果:（1）FJB荧光染色结果:HPC组、SEV组、H+S组与tGCI组比较:T1、T2、T3时间点,HPC组、SEV组、H+S组FJB阳性细胞数目均明显减少,差异有显着性（P<0.01）;H+S组与HPC组比较:T1、T2、T3时间点,H+S组FJB阳性细胞数目明显减少,有差异显着性（P<0.05）;H+S组与SEV组比较:在T1、T2时间点,FJB阳性细胞数目均无明显变化,差异无显着性（P>0.05）,在T3时间点,H+S组FJB阳性细胞数目有明显减少,差异有显着性（P<0.05）。（2）q PCR检测结果:HPC组、SEV组、H+S组与tGCI组相比:T1、T2、T3时间点,HPC组、SEV组、H+S组Jun-B mRNA相对表达量均显着降低,差异有显着性（P<0.01）;H+S组与HPC组比较:T1、T2、T3时间点,H+S组Jun-B mRNA相对表达量均明显下降,差异有显着性（P<0.05）;H+S组与SEV组比较:T1、T2时间点,H+S组Jun-B mRNA相对表达量均明显下降,差异有显着性（P<0.05）;T3时间点,H+S组Jun-B mRNA相对表达量无明显变化,差异无显着性（P>0.05）。结论:（1）低氧预处理、七氟醚预处理和低氧预处理+七氟醚预处理均对tGCI大鼠模型后海马组织神经细胞有保护作用,且低氧预处理+七氟醚预处理的保护作用可能强于低氧预处理、七氟醚预处理保护作用;（2）低氧预处理、七氟醚预处理对tGCI大鼠模型后海马组织神经细胞保护作用的机制可能是通过调控Jun-B mRNA的表达。
曹晴[3]（2020）在《过氧化物还原酶6敲除减轻癫痫大鼠海马区神经元损伤》文中指出癫痫是一种神经系统疾病,其特征在于中枢神经系统的兴奋性和抑制性神经递质失衡引起的神经元异常放电。其发病机制非常复杂,与神经递质失衡,氧化应激和免疫炎症关系密切。氧化应激会产生大量氧自由基,在正常的生理条件下,机体会利用和消除多余的自由基,然而,过量的有害刺激,如癫痫会导致组织和细胞缺氧,损伤甚至坏死。据报道,在海人酸（Kainic acid,KA）诱导的大鼠癫痫模型中发现氧化应激损伤,并分布在大脑的所有区域。过氧化物还原酶6（peroxiredoxin6,PRDX6）属于巯基特异性过氧化物还原酶家族中的一员,含有两个结构功能域,分别是具有抗氧化功能的过氧化物还原酶活性和促进炎症发生的非钙依赖性磷脂酶A2的活性。因此,PRDX6一方面能通过消除活性氧（reactive oxygen species,ROS）,参与过氧化细胞膜的修复和细胞磷脂的转运,在抗氧化应激中发挥重要作用;另一方面,能通过其磷脂酶A2的活性促进炎症发生。2008年Myung-Jeom Ryu等人在Neurochem上发表了一篇关于stargazer（stg）突变小鼠表型的文章,该突变小鼠中表达钙通道γ2亚基stargazin的基因发生突变,表现出几种神经系统疾病的症状,包括自发性癫痫发作、小脑性共济失调和头部扭动。蛋白组学结果显示小鼠下丘脑中与氧化应激相关的两种蛋白:磷朊蛋白1和PRDX6表达水平均明显降低,但PRDX6是否参与癫痫的发病过程或发病机制未见报道。因此,本实验拟观察PRDX6在KA诱导的癫痫鼠中的表达变化、细胞定位并探讨其在癫痫发病中的可能作用机制,为癫痫的疾病机制研究和治疗药物靶点筛选提供理论基础和实验依据。目的:1.观察PRDX6在癫痫大鼠模型中的表达变化;2.观察PRDX6在癫痫鼠中的表达定位;3.探讨PRDX6在癫痫发病中的作用及其可能机制。方法:分别采用野生型和PRDX6敲除的SD大鼠侧脑室注射KA诱导癫痫模型,癫痫评分大于4分的作为成功模型入组,分别在注射KA后1天,3天,7天处死大鼠并留取脑组织样本。采用FJB染色（Fluoro-Jade B staining）检测神经元损伤情况;尼氏染色（Nissl staining）检测神经元功能损伤;免疫组化（Immunohistochemistry,IHC）观察PRDX6在癫痫大鼠脑中的表达水平、脑区定位;免疫荧光（Immunofluorescence technique,IF）观察PRDX6的细胞定位。蛋白免疫印迹（western blot,WB）检测癫痫大鼠海马组织中PRDX6的蛋白表达情况;酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测癫痫大鼠血清中PRDX6水平;荧光定量-逆转录聚合酶链式反应（quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测癫痫大鼠海马组织中PRDX6以及其他过氧化物还原酶家族成员的m RNA水平、氧化应激相关因子、炎症相关因子的m RNA水平;转录组测序（RNA sequencing,RNA-seq）检测PRDX6敲除鼠癫痫模型海马中基因表达变化。结果:1.PRDX6在KA诱导的癫痫大鼠海马中表达上调根据大鼠癫痫评分等级,挑选4分及以上的癫痫大鼠入组,并分别在注射KA后的1天,3天,7天处死并留取脑组织样本。FJB染色显示,KA诱导的癫痫鼠神经元损伤严重,功能退化的神经元主要分布在海马CA3和CA1区;Nissl染色显示癫痫大鼠脑海马CA3和CA1区神经元缺失明显;IHC结果显示PRDX6在癫痫大鼠脑中的表达显着增多,且主要定位于海马和皮层,在侧脑室周围也有表达;WB显示癫痫大鼠海马组织中PRDX6的表达上调,在KA1d时开始增加,KA3d时表达显着上调,KA7d时仍维持较高水平;因PRDX6是分泌性蛋白,我们用ELISA检测血清中PRDX6水平,结果显示癫痫大鼠血清中PRDX6在KA3d明显升高;qRT-PCR的结果也显示,癫痫大鼠海马组织中PRDX6的m RNA水平在KA3d时显着增加。2.PRDX6在癫痫鼠脑中的星形胶质细胞中表达为了探究PRDX6的细胞定位,我们使用胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）作为星形胶质细胞的标记物。PRDX6与GFAP免疫荧光共标结果显示,在大脑皮层、海马、侧脑室均存在PRDX6与GFAP的共定位,提示PRDX6表达在星形胶质细胞中。3.在KA诱导的癫痫鼠脑中,PRDX6不在小胶质细胞和神经元中表达我们使用离子钙接头蛋白-1（Ionized calcium binding adaptor molecule-1,Iba-1）来标记小胶质细胞。免疫荧光双标结果显示,PRDX6与Iba-1没有共定位,表明PRDX6不在小胶质细胞中表达。神经元特异性核蛋白（Neural nuclei protein,Neu N）是成熟神经元的标记物,PRDX6与Neu N免疫荧光双标的结果显示,PRDX6和Neu N也没有共定位,提示PRDX6也不在神经元中表达。4.氧化应激相关因子i NOS和4-HNE均表达在癫痫大鼠脑星形胶质细胞中为了了解KA诱导的癫痫大鼠脑中是否存在氧化应激。我们使用免疫荧光双标检测氧化应激相关因子:诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,i NOS）和4-羟基壬烯醛（4-hydroxynonenal,4-HNE）的细胞定位。结果发现,i NOS和4-HNE均表达在GFAP阳性细胞内。与PRDX6共定位,提示癫痫能诱导星形胶质细胞中氧化应激水平上调。5.PRDX6敲除能减少再发癫痫次数,降低死亡率,减轻神经元丢失我们采用PRDX6敲除鼠同前建立癫痫模型。与野生型鼠相比,PRDX6敲除鼠在KA给药后3小时内的癫痫评分无明显变化。但3h后的大鼠再发癫痫次数明显降低（P<0.05）,死亡率也显着减少（P<0.001）。FJB染色和尼氏染色结果显示,PRDX6敲除鼠的海马区神经元丢失明显减轻。以上结果提示PRDX6敲除能减轻KA导致的癫痫大鼠海马神经元损伤。6.PRDX6敲除对KA诱导的癫痫鼠脑中胶质细胞的影响胶质细胞反应性增生并形成胶质瘢痕是癫痫的重要病理特征,为了了解PRDX6敲除对胶质细胞数量或增殖的影响,我们首先使用GFAP与Iba-1分别标记星形胶质细胞和小胶质细胞,比较在不造模的情况下,PRDX6对胶质细胞数量或增殖的影响。结果表明,仅PRDX6敲除对胶质细胞数量无明显影响。为了继续探究PRDX6敲除对癫痫大鼠胶质细胞的数量或增殖有无影响,我们采用增殖细胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA）与GFAP或Iba-1共标,结果发现,PRDX6敲除鼠星形胶质细胞的数量无明显改变;而小胶质细胞数量明显低于野生鼠,且其增殖程度也降低。7.PRDX6敲除对海马氧化应激水平的影响PRDX6只是哺乳动物体内过氧化物还原酶家族中的一员,那么,PRDX6基因敲除是否会影响其他过氧化物还原酶的表达?为此,我们采用qRT-PCR首先检测了野生型和PRDX6敲除未造模组海马组织中其他PRDXs及氧化应激相关因子的m RNA水平,结果发现,PRDX6敲除后,PRDX1的m RNA表达下降,PRDX2及PRDX4的m RNA表达上调,海马中氧化应激相关因子无明显变化。之后,我们又检测了WT和PRDX6敲除鼠给予KA后3天海马组织中其他PRDXs及氧化应激相关因子的m RNA水平,结果发现,PRDX6敲除后,PRDX1基因的m RNA表达下降,PRDX5 m RNA表达上调,海马中氧化应激相关因子水平无明显变化。8.PRDX6敲除对海马炎症水平的影响为了探究PRDX6敲除对大鼠的炎症水平有无影响,我们使用qRT-PCR检测未造模组野生型和PRDX6敲除鼠海马组织中炎症相关因子的m RNA水平,结果发现,PRDX6敲除对海马炎症水平无明显影响;为了探究PRDX6敲除对癫痫大鼠的炎症水平有无影响,我们使用qRT-PCR检测给予KA后3天的野生型和PRDX6敲除鼠海马组织中炎症相关因子的m RNA水平,结果发现,PRDX6敲除对海马炎症水平无明显影响。同时,我们利用RNA-seq去筛选表达差异显着的基因,发现PRDX6敲除鼠中趋化因子CCL2和CCL7表达明显下调。结论:1.在KA诱导的大鼠癫痫模型中,海马区PRDX6显着上调;2.在KA诱导的癫痫鼠脑中,PRDX6特异性表达在星形胶质细胞中;3.过氧化物还原酶6敲除减轻癫痫大鼠海马区神经元损伤;4.PRDX6可能通过降低小胶质细胞的增殖,减少趋化因子的水平进而减轻癫痫过程中神经元的损伤。
李柯桦[4]（2019）在《壮族孕妇铅镉锰暴露及金属硫蛋白基因多态性与新生儿出生缺陷的关系》文中研究指明目的探讨铅镉锰暴露及金属硫蛋白基因多态性与新生儿出生缺陷的关系,为出生缺陷的防治以及制定干预措施提供参考依据。方法本研究基于广西壮族人群出生队列,该队列于2015年9月至今在广西壮族人群聚居的德保、靖西、隆安、平果、田东等县的人民医院及妇幼保健院,将孕周≤22周、首次建卡的孕妇纳入队列,然后随访其妊娠结局,并同时收集研究对象相关生物标本。本研究采用巢式病例对照研究方法,选取广西壮族人群出生队列中,妊娠结局为出生缺陷的孕妇作为病例组,按照同一县、同孕龄选取妊娠结局正常的孕妇作为对照组。采用原子吸收分光光度计（石墨炉法）测定孕妇血浆中铅、镉、锰的含量,采用PCR-RFLP法检测金属硫蛋白基因单核苷酸多态性位点。Epidata3.0进行问卷录入,运用SPSS22.0软件包进行统计分析,使用单因素卡方检验、Spearman相关和多因素Logistic回归模型分析孕妇血中铅、镉、锰水平的影响因素,采用多因素Logistic回归模型分析孕妇血浆中铅、镉、锰与出生缺陷的关系及铅、镉、锰暴露与金属硫蛋白基因多态性对出生缺陷的交互作用,检验水准α=0.05。结果1.本研究共纳入300例壮族孕妇（病例、对照组各150例）。研究对象年龄分布在14～42岁之间,平均年龄（28.76±5.51）岁。其中病例组年龄14～42岁,平均年龄（29.15±5.89）岁。对照组年龄17～41岁,平均年龄（28.37±5.09）岁。经均衡性检验,病例组与对照组在年龄、职业、产次、孕次、孕前半年及孕期补充叶酸、孕前半年及孕期辐射暴露、孕前半年及孕期农药暴露、住宅附近有工厂、孕期烹饪、烹饪燃料、厨房有通风设备、孕期感冒发烧、孕期被动吸烟、孕期化妆、近五年居住新装修房子、平时规律运动等情况上分布差异均无统计学意义。2.孕妇血铅中位数为18.61μg/L,P25～P75为9.33μg/L～32.15μg/L。孕妇血镉中位数为0.76μg/L,P25～P75为0.51μg/L～1.09μg/L。孕妇血锰中位数为4.12μg/L,P25～P75为2.12μg/L～18.5μg/L。3.Spearman相关分析显示:孕妇血中铅含量与镉含量正相关（相关系数r=0.304,P<0.01）,铅含量与锰含量负相关（相关系数r=-0.131,P<0.05）。多因素Logistic回归分析显示,孕妇血中重金属含量的影响因素中,厨房有通风设备可能是孕妇血铅浓度的影响因素（P<0.01,OR=0.30,95%CI:0.16-0.55）,同时也可能是孕妇血镉浓度的影响因素（P<0.01,OR=0.41,95%CI:0.23-0.76）。4.卡方检验结果显示:病例组与对照组MT-2A基因rs10636位点基因型频率分布差异有统计学意义（P<0.05）。病例组与对照组MT-2A基因rs10636位点等位基因频率分布差异有统计学意义（P<0.05）。5.Mann-Whitney U检验显示:病例组与对照组孕妇的血铅含量在面部畸形（P=0.019）、心血管畸形（P=0.045）出生缺陷亚型中差异有统计学意义;病例组与对照组孕妇的血镉含量只有在四肢畸形（P=0.021）出生缺陷亚型中差异有统计学意义;对于血锰含量,则病例组与对照组孕妇只有在丙苯酮尿症出生缺陷亚型中差异无统计学意义（P<0.05）,而其他出生缺陷亚型的孕妇血镉含量均存在统计学差异（P>0.05）。6.单因素Logistic回归分析显示:孕妇血镉升高是出生缺陷发生的危险因素（P<0.05,OR=1.88,95%CI:1.15-3.06）、血锰升高是出生缺陷发生的危险因素的危险因素（P<0.01,OR=1.19,95%CI:1.09-1.30）。将年龄、职业作为调整因素,多因素Logistic回归分析显示:孕妇血镉值升高（P<0.05,OR=1.93,95%CI:1.11-3.36）、血锰值升高（P<0.01,OR=1.22,95%CI:1.12-1.34）、携带 MT-2A rs10636 位点突变型基因型（P<0.05,OR=3.96,95%CI:1.02-15.39）是出生缺陷发生的危险因素。7.金属暴露-基因多态性交互作用分析:将孕妇铅镉锰暴露水平分别与MT-1A rs11076161、MT-2A rs10636两两乘积组合。结果显示,孕妇锰暴露与MT-2A rs10636在出生缺陷发生中存在交互作用。结论 1.铅与镉对人体的暴露可能具有同源性,厨房有通风设备与孕妇铅、镉暴露水平有关;2.镉、锰高暴露可能是出生缺陷的危险因素;3.携带MT-2A rs10636位点突变型基因型可能是出生缺陷发生的危险因素,且孕妇锰暴露与MT-2A rs10636在出生缺陷发生中存在交互作用。
李莹杰[5]（2013）在《心理应激对大鼠锌代谢的影响及其机制研究》文中研究说明背景心理应激（psychological stress，PS）是指机体在受到某种环境刺激作用时引起的心理及生理机能改变的过程，是由于客观要求和应付能力不平衡所产生的一种适应环境的紧张反应状态。伴随社会的快速发展及各方面压力的激增，社会的精神心理因素引起的应激在人类健康方面的影响越来越多。诸多研究证实，应激虽不像生物或理化因素可以导致特定的疾病，却可以非特异性的方式导致机体损害，如诱发冠心病、高血压、消化性溃疡、神经精神疾病等疾病的发生等。锌作为人体的必需微量元素之一，在机体众多生物反应中均发挥重要作用，同时它又具有各类生物功能。一些锌代谢相关功能蛋白在锌稳态的维持中发挥重要的作用，包括金属硫蛋白（metallothionein, MT）和两类跨膜转运体，后者包括锌转运体（zinctransportors，ZnT）家族和锌铁调控蛋白（zrt,irt-like protein, ZIP）。细胞锌稳态容易受到胞外各种病理生理环境因素的影响，如炎症，氧化应激等，实验证明，在应激条件下，胞内游离锌离子浓度可显着上升，进而导致细胞损伤[1-2]。既往研究也发现热环境、加速度刺激、噪声等均可导致血清锌水平显着下降[3-4]。结合上述研究，我们推测微量元素锌在应激过程中可能具有重要作用。一方面，各种应激导致胞内游离锌浓度上升，使锌在胞内产生毒性作用，造成细胞损伤；另一方面，应激导致机体血清锌下降，并可能导致体内锌的重新分布，从而影响体内的抗氧化能力等，进而影响机体的抗应激能力。因此，了解心理应激过程中机体锌代谢的变化特点及其可能机制，有助于为研究解决应激诱发损伤提供线索。实验目的本研究拟通过观察心理应激对大鼠锌代谢，尤其是海马锌水平变化的规律，并对上述变化的可能机制进行探讨，不仅有助于了解心理应激过程中锌代谢的变化特点及其机制，而且在此基础上为心理应激相关疾病的进一步研究提供实验依据和理论参考。实验方法1.动物分组及喂养健康雄性SD大鼠，体重180-200g，适应喂养3-5天后按体重随机分为4组，每组分为两小组：正常对照7天组、心理应激7天组；正常对照14天组、心理应激14天组；心理应激14天脱应激7天组，相应对照组；心理应激14天脱应激14天组，相应对照组。每小组15只大鼠。2.心理应激动物模型的建立通过Communication Box System制作大鼠心理应激模型。放免试剂盒测定血清皮质酮（CORT）含量。3.大鼠各组织锌和血清锌含量的测定采用原子吸收分光光度计火焰法测定。1g/L锌标准贮备液由国家标准物质中心提供。4.大鼠锌表观吸收率的计算锌表观吸收率=（膳食锌含量—粪便锌含量）/膳食锌含量×100%。5.大鼠肝脏ZIP14和海马ZnT1、ZnT3和ZIP1mRNA表达量的测定采用实时定量荧光PCR法测定大鼠肝脏ZIP14和海马ZnT1、ZnT3和ZIP1mRNA表达水平。6.大鼠肝脏和海马MT蛋白含量的测定ELISA法测定大鼠肝和海马MT蛋白含量。7.大鼠海马组织内游离锌离子的测定TSQ荧光染色法测定大鼠海马组织冰冻切片游离锌离子的含量。8.检测大鼠心理应激后行为学的变化。利用自发活动和强迫游泳实验检测大鼠行为学指标。9.统计方法使用统计软件SPSS16.0进行统计分析，利用Excel2007进行数据汇总及绘图，检验水准α=0.05；采用两样本t检验和one-wayANVOA进行比较。实验结果1.心理应激对大鼠血清CORT含量的影响心理应激7天和14天组大鼠血清CORT含量较对照组明显升高（P<0.05）。脱应激7天和14天后大鼠血清CORT含量恢复至正常水平，与相应对照组相比，差异无统计学意义（P>0.05）。2.心理应激对大鼠体增重的影响实验组大鼠与空白对照组大鼠的体增重相比，差异无统计学意义（P>0.05）3.心理应激对大鼠锌吸收的影响心理应激7天组和14天组与相应对照组的鼠粮摄入量相比无明显差异（P>0.05），说明各组大鼠锌摄入量均无明显差异。而心理应激7天后大鼠粪锌排出量有所增加但无统计学意义（P>0.05），心理应激14天后大鼠粪锌排出量增加，与对照组相比，差异有统计学意义（P<0.05）。心理应激7天组和14天组与相应对照组相比锌表观吸收率均下降（P<0.05），脱应激7天和14天后，大鼠锌表观吸收率恢复至正常水平，与相应对照组相比无明显差异（P>0.05）。4.心理应激对大鼠血清和组织锌含量的影响4.1.心理应激对大鼠血清锌含量的影响实验结果显示，与对照组相比，连续心理应激7天和14天后，大鼠血清锌含量显着降低，差异有统计学意义（P<0.05）。脱应激7天和14天后，大鼠血清锌含量恢复至正常水平，与相应对照组差异无统计学意义（P>0.05）。4.2.心理应激对大鼠各组织锌含量的影响4.2.1.心理应激对大鼠心、肝、脾、肾和小肠锌含量的影响与空白对照组相比，大鼠心、脾、肾和肠锌含量在连续7天和14天心理应激后无变化，大鼠肝锌含量在连续心理应激7天后无显着变化，但大鼠肝锌含量在连续应激14天后显着上升，差异有统计学意义（P<0.05）。脱应激7天和14天后肝锌含量恢复至正常水平，与相应对照组无统计学差异（P>0.05）。4.2.2.心理应激对大鼠各脑区锌含量的影响与空白对照组相比，在连续7天和14天心理应激后，大鼠小脑、皮层锌含量无变化，连续心理应激7天及14天后海马锌含量均下降，差异有统计学意义（P<0.05）。脱应激7天和14天后，海马血清锌含量恢复至正常水平，与相应对照组无统计学差异（P>0.05）。5.心理应激对大鼠肝组织MT蛋白含量的影响心理应激7天后大鼠肝MT蛋白含量上升，但差异无统计学意义（P>0.05）。心理应激14天后，与对照组相比，大鼠肝组织内MT蛋白含量明显增加，差异有统计学意义（P<0.05）。脱应激7天和14天后大鼠肝组织MT蛋白含量恢复至正常水平，与相应对照组相比，差异无统计学意义（P>0.05）。6.心理应激对大鼠肝组织ZIP14mRNA水平的影响与空白对照组相比，7天应激组大鼠肝ZIP14mRNA表达水平上升，差异有统计学意义（P<0.05），14天应激组大鼠肝组织ZIP14mRNA水平无显着变化（P>0.05）。7.心理应激对大鼠海马ZnT3、ZnT1和ZIP1mRNA水平的影响荧光实时定量PCR实验结果显示，与空白对照组比较，心理应激7天组和14天组大鼠海马内ZnT3和ZnT1mRNA水平下降，差异有统计学意义（P<0.05）。脱应激7天和14天后恢复至正常水平，与相应对照组大鼠相比，差异无统计学意义（P>0.05）。心理应激7天组大鼠海马组织内ZIP1mRNA水平下降差异有统计学差异（P<0.05），14天组大鼠水平恢复至正常水平，脱应激7天和14后大鼠恢复至正常水平，与相应对照组相比，差异无统计学意义（P>0.05）。8.心理应激对大鼠海马MT蛋白含量的影响与空白对照组比较，心理应激7天和14天组大鼠海马组织内MT蛋白含量均下降，差异有统计学意义（P<0.05）。脱应激7天和14天后，与相应对照组相比，海马内MT蛋白含量恢复至正常水平，差异无统计学意义（P>0.05）。9.心理应激对大鼠海马内游离锌离子的影响TSQ荧光染色结果显示，心理应激组海马的荧光染色程度明显高于对照组。10.心理应激对大鼠在强迫游泳与自发活动实验中行为的影响连续心理应激7天和14天后的大鼠在强迫游泳实验中不动的时间明显长于相应的空白对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。与空白对照组大鼠相比，连续心理应激7天和14天后，大鼠在自发活动箱内行进的总路程明显更短，休息时间更长，速度更慢，且以上差异均有统计学意义（P<0.05）结论本实验利用Communication Box成功建立了心理应激动物模型，通过对在心理应激情况下大鼠的锌代谢变化的观察，同时利用荧光实时定量PCR和ELISA观察了心理应激对与锌代谢密切相关的主要分子的表达变化，并进一步观察PS对大鼠行为学的影响。主要结论如下：1．心理应激引起大鼠锌表观吸收率的下降，这与心理应激导致大鼠粪锌排出量增加相关。2．心理应激导致大鼠血清锌含量下降，这与大鼠锌表观吸收率下降以及肝锌蓄积相关，肝锌蓄积与MT以及锌转运体ZIP14表达升高相关。3．心理应激可导致海马锌含量下降，可能受到海马内锌稳态相关调节分子MT、ZnT1、ZnT3和ZIP1的表达下降的影响。4．心理应激后大鼠行为学发生了变化，可能与心理应激导致的大鼠海马锌含量下降以及游离锌离子上升影响了海马功能有关。
齐悦如[6]（2011）在《清开灵注射液对大鼠缺血性脑损伤时离子稳态失衡的调控机制研究》文中研究表明缺血性脑血管疾病是临床常见病、多发病,其致死率和致残率高,严重威胁人类的健康。因此,对缺血性脑血管疾病的研究是医学领域的重要研究课题之一。近年来许多研究者将目光集中在各种离子在缺血性脑病中的作用上面。本实验在中医“毒损脑络”病机理论的指导下,以各种离子为切入点,研究脑缺血后各离子稳态失衡,以及清开灵注射液（Qingkailing Injection, QKL）对其的影响,以期对络脉瘀阻导致营卫失和提供生物学依据。探讨中医药通过解毒通络、调和营卫,从而在脑缺血发生后维持各离子的稳态,发挥神经元保护作用的机制,为研究中药治疗中枢神经系统疾病的作用途径与靶点提供有意义的思路。目的1、确认缺血性脑损伤时大鼠脑内离子稳态失衡的特征及QKL对其的调控作用。以锌离子为代表进一步验证其在缺血性脑损伤后的变化特征以及QKL对其的影响。2、初步阐明在缺血性脑损伤时由于星形胶质细胞（astrocytes, Ast）状态、钙超载等原因致使金属硫蛋白表达变化引发锌离子稳态失衡的发生机制,同时探讨QKL维持脑内离子稳态平衡的作用机制。方法1、利用永久性大脑中动脉栓塞（MCAO）（?）（?）造成局灶性脑缺血损伤模型,并采用神经功能评分对其进行评价和筛选,利用光镜、透射电镜对N组、M组和T组大鼠顶叶皮层区细胞进行形态学观察。2、利用全自动生化分析仪和电感耦合等离子体质谱仪（Inductively coupled plasma mass spectrometer, ICP-MS）对正常组（N组）、脑缺血损伤模型组（M组）和QKL治疗组（T组）大鼠脑组织、血清、脑脊液中常规离子K+、Na+、Cl-、Ca2+和微量元素Zn2+、Cu2+、Mg2+、Fe2+的含量进行检测。利用透射电镜对N组、M组和T组大鼠顶叶皮层区神经元、Ast中线粒体状态进行形态学观察。利用ICP-MS对QKL中K+、Na+、Ca2+、Zn2+、Cu2+、Mg2+、Fe2+七种离子的含量进行检测。3、利用硫化钠灌流金属自显影法对N组、M组和T组大鼠脑组织中Zn2+进行染色,采用光镜对Zn2+在脑组织中的表达情况进行观察。4、利用免疫组织化学方法对N组、M组和T组大鼠脑组织中胶质纤维酸性蛋白（Glial Fibrillay Acidic Protein, GFAP）进行染色,采用光镜对GFAP在脑组织中的表达情况进行观察。利用免疫组织化学方法对N组、M组和T组和MK组（钙离子拮抗剂治疗组）大鼠脑组织中金属硫蛋白（methallothionein, MT）进行染色,采用光镜对MT在大鼠脑组织中的表达情况进行观察。利用电感耦合等离子体发射光谱仪（Inductively coupled plasma atomic emission spectrometer, ICP-AES）对N组、M组、MK组、T组大鼠脑组织中Ca2+和Zn2+的含量进行检测。结果1、光镜观察发现：M组大鼠皮层顶叶区组织结构紊乱神经元丢失明显,胞体缩小胞核皱缩为三角形。Ast胞体肿胀,胞核肿大。T组大鼠脑组织损伤显着减轻,顶叶皮层区各层神经元丢失减少,Ast肿胀程度显着减轻。电镜观察发现：M组大鼠皮层顶叶区神经元固缩,胞浆电子密度增高,胞核结构及核仁皆消失。T组大鼠顶叶皮层区神经元基本胞核呈卵圆形,胞浆内细胞器丰富,基本恢复到正常状态。该结果与神经功能评分结果相一致。2、QKL中各离子含量Na+>K+>Ca2+>Zn2+>Fe2+>Mg2+>Cu2+。电镜观察发现：M组大鼠皮层顶叶区神经元和Ast中线粒体肿胀,内脊断裂,T组大鼠神经元和Ast的线粒体呈棒形或圆形,内脊排列整齐,基本恢复到正常状态。QKL可纠正因缺血性脑损伤引发的血清中K+、Na+、Cl-、Ca2+、Mg2+、Fe2+（?）急态的失衡,脑脊液中K+、Na+、Ca2+稳态的失衡,脑组织中K+、Ca2+、Zn2+稳态的失衡。3、缺血性脑损伤24h,脑组织中Zn2+表达强度极显着降低（P<0.01）,而QKL治疗后脑组织中Zn2+表达强度极显着升高（P<0.01）4、脑缺血24h时大鼠脑组织中MT表达量极显着性升高（P<0.01）,给与QKL后MT表达量极显着性降低（P<0.01）,给与钙拮抗剂后MT表达量极显着性降低（P<0.01）；脑缺血24h时大鼠脑组织中GFAP表达量极显着性升高（P<0.01）,给与QKL后GFAP表达量极显着降低（P<0.01）；脑缺血24h时大鼠脑组织中Ca2+含量极显着升高（P<0.01）,Zn2+含量降低,二者呈负相关关系。给与钙拮抗剂后脑缺血24h大鼠脑组织中Ca2+含量极显着降低（P<0.01）,Zn2+含量极显着升高（P<0.01）,二者呈负相关关系。结论1、大鼠缺血性脑损伤24h时,神经元受损明显,QKL发挥确切的神经保护作用。2、缺血性脑损伤24h时,血清、脑脊液和脑组织中多种离子稳态发生失衡,QKL作用于缺血级联反应过程中离子稳态失衡环节,可维持离子稳态,QKL可通过调控神经元、Ast线粒体的状态为细胞提供能量继而恢复离子稳态。QKL中离子有可能是发挥作用的药效物质之一3、缺血性脑损伤可引起Zn2+稳态失衡而QKL有维持Zn2+稳态的作用。4、缺血性脑损伤后MT应激性的过量表达致使Zn2+含量降低,而MT的过量表达有可能是通过Ast的反应性增加和钙超载来实现的。QKL一方面可通过发挥与钙拮抗剂类似的作用以缓解钙超载进而抑制MT的过表达,另一方面可抑制Ast的反应性增生进而抑制MT的过表达,从而恢复Zn2+的稳态。
陈伟强,程义勇,李树田,洪燕,侯玥[7]（2006）在《锌对体外应激海马神经元MTs亚型表达的影响》文中研究指明目的:观察不同锌水平对体外应激海马神经元金属硫蛋白（MTs）亚型表达的影响。方法:取新生1dWis-tar大鼠海马组织进行体外神经元培养,无血清培养24h后,分别向培养液中加入皮质酮、Zn2+特异鳌合剂TPEN,使二者的最终浓度均为1×10-5mol/L,然后加入不同浓度的ZnSO4溶液,使Zn2+的最终浓度分别为1×10-5mol/L、1×10-4mol/L和2×10-4mol/L,作用24h后检测培养液中IL-6和NO含量,以蛋白印迹法检测细胞MTs含量,以RT-PCR检测细胞MT-1mRNA和MT-3mRNA的表达水平。结果:在海马神经元培养液中加入TPEN后,MTs的表达出现明显降低,皮质酮刺激也未见其表达升高。在补锌组,MTs的含量均明显增加,其中以10-4mol/LZn2+组的表达量最高。海马神经元MT-1mRNA和MT-3mRNA的表达水平在皮质酮应激组和补锌组均出现明显升高。另外,锌缺乏和皮质酮刺激可使海马神经元培养上清中的IL-6和NO水平均出现明显升高。结论:不同锌水平对应激海马神经元金属硫蛋白及其亚型mRNA的表达具有调控作用,缺锌可降低金属硫蛋白的表达,而补锌可增加金属硫蛋白的表达。
陈伟强,程义勇,李树田,侯玥,洪燕,王冬兰[8]（2006）在《锌对心理应激大鼠不同脑区金属硫蛋白亚型表达的影响》文中认为目的:观察不同锌摄入水平对心理应激大鼠不同脑区金属硫蛋白亚型表达的影响。方法:将Wistar大鼠随机分为8组:正常对照组、对喂组、缺锌组和补锌组及其相应的应激组,分别给予正常、缺锌和补锌饲料,以缺锌动物当日的饲料摄入量作为对喂动物次日的给料量。动物喂饲1w后开始束缚应激,持续4w。分别以蛋白印迹法和RT-PCR测定海马、皮质、间脑和嗅球金属硫蛋白含量以及MT-1mRNA和MT-3mRNA的表达;并以ELISA法检测血浆IL-6和IL-1的含量。结果:缺锌动物的血锌含量明显降低,缺锌应激动物不同脑区金属硫蛋白及其亚型mRNA的表达均较缺锌动物明显升高,但其增加幅度低于其它应激组;而补锌应激动物的表达增加幅度最大。缺锌组和各应激组动物的血浆皮质醇、IL-1、IL-6水平出现显着升高。另外,金属硫蛋白在不同脑区的表达水平不同:海马>嗅球>皮质>间脑。结论:不同锌营养状况可影响心理应激动物不同脑区金属硫蛋白的表达,海马脑区表达水平较高可能与海马在应激反应中的重要作用相关联。糖皮质激素及IL-6、IL-1等细胞因子可能对金属硫蛋白的表达发挥了诱导作用。
陈伟强,程义勇,李树田,王冬兰,于志杰,洪燕[9]（2005）在《锌对应激大鼠海马金属硫蛋白亚型表达的调控作用及机制研究》文中提出目的 观察不同锌摄入水平对应激大鼠海马脑区不同金属硫蛋白亚型表达的影响。方法 将Wistar雄性大鼠随机分为 8组 :正常对照组、对喂组、缺锌组和补锌组及其相应的应激组 ,分别给予正常饲料、缺锌饲料和补锌饲料 ,以缺锌动物当日的饲料摄入量作为对喂动物次日的给料量。动物喂饲 1周后开始束缚应激 ,持续 4周。以血红蛋白镉饱和法测定脑组织金属硫蛋白含量 ,分离海马提取总RNA ,以RT PCR检测金属硫蛋白亚型MT -1mRNA和MT -3mRNA。结果 缺锌动物出现血锌含量明显降低 ,脑组织金属硫蛋白含量和海马金属硫蛋白mRNA的表达均出现降低 ,但其表达在缺锌应激组动物仍有明显升高 ;而补锌动物金属硫蛋白的表达有所增加 ,补锌应激组动物的表达增加更加明显。缺锌和缺锌应激组动物的血浆皮质醇、IL -1、IL- 6和NO水平也较其它组显着升高。结论 缺锌可降低动物脑和海马组织中金属硫蛋白的表达 ,但缺锌动物在接受应激刺激后 ,金属硫蛋白的表达仍可明显增加 ;而补锌可增加金属硫蛋白的表达 ,补锌应激使脑组织中金属硫蛋白的表达升高更为显着 ;应激对动物的损伤作用与其锌营养状况有关 ,缺锌可降低机体对应激的抵抗能力。
陈伟强,程义勇,李树田,王冬兰,于志杰,洪燕[10]（2005）在《锌对应激大鼠海马金属硫蛋白亚型表达的调控作用及机制研究》文中认为目的观察不同锌摄入水平对应激大鼠海马脑区不同金属硫蛋白亚型表达的影响。方法将Wistar雄性大鼠随机分为8组:正常对照组、对喂组、缺锌组和补锌组及其相应的应激组,分别给予正常饲料、缺锌饲料和补锌饲料,以缺锌动物当日的饲料摄入量作为对喂动物次日的给料量。动物喂饲1周后开始束缚应激,持续4周。以血红蛋白镉饱和法测定脑组织金属硫蛋白含量,分离海马提取总RNA,以RT-PCR检测金属硫蛋白亚型MT-1 mRNA和MT-3 mRNA。结果缺锌动物出现血锌含量明显降低,脑组织金属硫蛋白含量和海马金属硫蛋白mRNA的表达均出现降低,但其表达在缺锌应激组动物仍有明显升高;而补锌动物金属硫蛋白的表达有所增加,补锌应激组动物的表达增加更加明显。缺锌和缺锌应激组动物的血浆皮质醇、IL-1、IL-6和NO水平也较其它组显着升高。结论缺锌可降低动物脑和海马组织中金属硫蛋白的表达,但缺锌动物在接受应激刺激后,金属硫蛋白的表达仍可明显增加;而补锌可增加金属硫蛋白的表达,补锌应激使脑组织中金属硫蛋白的表达升高更为显着;应激对动物的损伤作用与其锌营养状况有关,缺锌可降低机体对应激的抵抗能力。
二、应激对大鼠海马金属硫蛋白亚型表达的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、应激对大鼠海马金属硫蛋白亚型表达的影响（论文提纲范文）
（1）生命早期铅致SD大鼠学习记忆损伤及白藜芦醇的保护作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂与耗材 |
| 2.1.3 主要仪器与设备 |
| 2.1.4 主要试剂的配置 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 动物饲养及分组 |
| 2.2.2 Morris水迷宫 |
| 2.2.3 大鼠标本的采集处理 |
| 2.2.4 大鼠血铅测定 |
| 2.2.5 组织中总RNA的提取及检测 |
| 2.2.6 RT-qPCR定量检测 |
| 2.2.7 Western blot检测海马组织中各蛋白的表达水平 |
| 2.3 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 铅暴露对大鼠空间学习记忆的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.1.1 定位导航实验 |
| 3.1.2 空间探索实验 |
| 3.2 铅暴露对大鼠血铅含量的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.3 铅暴露对大鼠海马中SIRT1、CREB和BDNF分子的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.3.1 铅暴露对大鼠海马中SIRT1表达的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.3.2 铅暴露对大鼠海马中CREB表达的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.3.3 铅暴露对大鼠海马中BDNF表达的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.4 铅暴露对大鼠海马中突触前蛋白Syn-1、LIMK1表达的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.4.1 铅暴露对大鼠海马中Syn-1表达的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.4.2 铅暴露对大鼠海马中LIMK1表达的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.5 铅暴露对大鼠海马中突触后蛋白PSD-95、NL-1表达的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.5.1 铅暴露对大鼠海马中PSD-95表达的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.5.2 铅暴露对大鼠海马中NL-1表达的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 4 讨论 |
| 4.1 生命早期铅暴露显着提高大鼠血铅含量 |
| 4.2 生命早期铅暴露损害大鼠空间学习记忆 |
| 4.3 白藜芦醇可下调铅暴露大鼠血铅水平及逆转铅暴露对大鼠空间学习记忆的损伤 |
| 4.4 白藜芦醇减轻因铅暴露致大鼠海马中SIRT1/CREB/BDNF通路分子的表达下调 |
| 4.5 白藜芦醇削弱铅暴露致突触前相关蛋白表达的下调 |
| 4.6 白藜芦醇削弱铅暴露致突触后相关蛋白表达的下调 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 生命早期铅暴8E致突触损伤机制以及白藜芦酵的神经保护作用 |
| 参考文献 |
| 个人简历,在学期间发表的学术论文与研究成果 |
| 致谢 |
（2）低氧预处理和七氟醚预处理对成年大鼠短暂性全脑缺血的保护作用及对Jun-B mRNA表达的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文对照 |
| 第1章 前言 |
| 1.1 缺血再灌注损伤 |
| 1.2 预处理 |
| 1.3 细胞凋亡与基因转录 |
| 第2章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验动物分组与模型制作 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 大鼠的存活率 |
| 3.2 FJB荧光染色 |
| 3.3 qPCR检测 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 低氧预处理对tGCI大鼠海马神经细胞有保护作用 |
| 4.2 七氟醚预处理对tGCI大鼠海马神经细胞有保护作用 |
| 4.3 低氧预处理+七氟醚预处理增强了神经保护作用 |
| 4.4 探讨三种预处理方式发挥神经保护作用的机制 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 脑缺血再灌注损伤的防治方法、机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（3）过氧化物还原酶6敲除减轻癫痫大鼠海马区神经元损伤（论文提纲范文）
| 英文缩略词表(Abbreviation) |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 主要药物 |
| 2.3 主要抗体 |
| 2.4 主要试剂和试剂盒 |
| 2.5 引物 |
| 2.6 主要仪器与设备 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 KA诱导癫痫大鼠模型的建立 |
| 3.1.1 KA诱导的大鼠癫痫模型 |
| 3.1.2 癫痫评分等级 |
| 3.2 石蜡切片 |
| 3.2.1 分离大鼠脑组织及固定 |
| 3.2.2 组织脱水、透明 |
| 3.2.3 组织浸蜡与包埋 |
| 3.2.4 组织切片 |
| 3.3 Nissl染色 |
| 3.4 FJB染色 |
| 3.5 .免疫组织化学染色(IHC) |
| 3.6 .免疫荧光双标染色(IF) |
| 3.7 蛋白质免疫印迹(WB) |
| 3.7.1 蛋白样品制备 |
| 3.7.2 SDS-PAGE凝胶制备 |
| 3.7.3 电泳 |
| 3.7.4 转膜 |
| 3.7.5 IB检测 |
| 3.8 实时荧光定量PCR(q RT-PCR) |
| 3.8.1 引物设计与合成 |
| 3.8.2 RNA提取 |
| 3.8.3 RT反应 |
| 3.8.4 qRT-PCR扩增 |
| 3.9 转录组测序(RNA-seq) |
| 3.10 酶联免疫吸附测定 |
| 3.11 统计分析 |
| 4 结果 |
| 4.1 PRDX6在KA诱导的癫痫大鼠海马中表达上调 |
| 4.2 PRDX6在癫痫大鼠脑星形胶质细胞中表达 |
| 4.3 在KA诱导的癫痫鼠脑中,PRDX6不在小胶质细胞及神经元中表达 |
| 4.4 在癫痫鼠脑中,氧化应激相关因子表达在星形胶质细胞内 |
| 4.5 PRDX6敲除能减少再发癫痫次数,降低死亡率,减轻神经元丢失 |
| 4.6 在癫痫持续状态下,PRDX6敲除鼠的小胶质细胞增殖程度低于野生鼠 |
| 4.7 PRDX6基因敲除对其他PRDXs家族成员及氧化应激水平的影响 |
| 4.8 PRDX6敲除对海马炎症水平无影响,但能明显降低炎性趋化因子CCL2,CCL7的水平 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 个人简历 |
| 致谢 |
| 综述 多功能蛋白MANF与疾病 |
| 参考文献 |
（4）壮族孕妇铅镉锰暴露及金属硫蛋白基因多态性与新生儿出生缺陷的关系（论文提纲范文）
| 个人简历 |
| 缩写词中英文对照表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 对象与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结与展望 |
| 结论 |
| 本研究的创新性 |
| 本研究的局限性 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（5）心理应激对大鼠锌代谢的影响及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 心理应激对大鼠组织锌代谢的影响 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 四、小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 心理应激导致大鼠锌代谢紊乱机制的研究 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 四、小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文和参加科研工作情况 |
| 致谢 |
（6）清开灵注射液对大鼠缺血性脑损伤时离子稳态失衡的调控机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 上篇 文献综述 |
| 综述一 缺血性脑血管病过程中常规离子稳态失衡的研究进展 |
| 1 与缺血性脑病相关的常规离子 |
| 2 缺血性脑损伤引起离子稳态失衡 |
| 3 调控离子稳态失衡的重要途径 |
| 4 结语 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医药防治缺血性脑血管疾病过程中微量元素稳态失衡的研究进展 |
| 1 微量元素与缺血性脑病的相关性 |
| 2 中药治疗缺血性脑病与微量元素关系密切 |
| 3 元素组学概论 |
| 4 结语 |
| 参考文献 |
| 下篇 实验研究 |
| 前言 |
| 第一部分 大鼠永久性大脑中动脉栓塞模型的复制、评价及清开灵注射液的影响 |
| 前言 |
| 实验一 大鼠永久性大脑中动脉栓塞模型的复制、评价以及清开灵注射液的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 缺血性脑损伤时脑内离子稳态的失衡及清开灵注射液的调控作用 #35前言 |
| 前言 |
| 实验一 缺血性脑损伤时血清、脑脊液和脑组织中四种常规离子含量变化及清开灵注射液的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 缺血性脑损伤时血清、脑脊液和脑组织中四种微量元素含量变化及清开灵注射液的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 清开灵注射液对缺血性脑损伤时离子稳态失衡调控机制的探讨 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 缺血性脑损伤时锌离子含量变化及清开灵注射液调控机制的初步探讨 |
| 前言 |
| 实验一 缺血性脑损伤时锌离子在脑组织中的表达情况及清开灵注射液的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 缺血性脑损伤时金属硫蛋白对脑组织中锌离子稳态失衡调控机制的探讨 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 缺氧缺糖损伤时星形胶质细胞对锌离子的调控作用 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附图 |
（7）锌对体外应激海马神经元MTs亚型表达的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 海马神经元培养及分组 |
| 1.2 指标测定 |
| 1.2.1 IL-6 (interleukin-6) 水平检测 |
| 1.2.2 NO (nitric oxide) 含量测定 |
| 1.2.3 MTs含量测定 |
| 1.2.4 MTs亚型 mRNA |
| 1.3 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 海马神经元MTs及其亚型mRNA表达的变化 |
| 2.2 海马神经元培养上清中IL-6和NO水平的变化 |
| 3 讨论 |
（8）锌对心理应激大鼠不同脑区金属硫蛋白亚型表达的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 动物分组及喂养 |
| 1.2 心理应激动物模型的建立 |
| 1.3 指标测定方法 |
| 1.3.1 血浆皮质醇： |
| 1.3.2 血浆IL-6 (interleukin-6）和IL-1 (interleukin-1）: |
| 1.3.3 MTs含量： |
| 1.4 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 大鼠血浆皮质醇、锌、IL-6和IL-1水平的变化 (表2) |
| 2.2 大鼠不同脑区MTs含量的变化（表3) |
| 2.3 不同脑区MT-1和MT-3 mRNA表达的变化（表4, 5) |
| 3 讨论 |
（9）锌对应激大鼠海马金属硫蛋白亚型表达的调控作用及机制研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 动物分组及喂养 |
| 1.2 心理应激动物模型的建立[7, 8] |
| 1.3 指标测定方法 |
| 1.3.1 血浆皮质醇 |
| 1.3.2 血浆NO (nitric oxide) |
| 1.3.3 血浆IL-6 (interleukin-6) 和IL-1 (interleukin-1) |
| 1.3.4 MTs含量 |
| 1.3.5 MTs亚型 mRNA |
| 1.4 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 实验期间大鼠体重的变化 (表2) |
| 2.2 大鼠血浆皮质醇、锌、IL-6、IL-1和NO水平变化 (表3) |
| 2.3 大鼠脑组织MTs含量和海马组织MTs亚型mRNA表达的变化 (表4) |
| 3 讨论 |
四、应激对大鼠海马金属硫蛋白亚型表达的影响（论文参考文献）
- [1]生命早期铅致SD大鼠学习记忆损伤及白藜芦醇的保护作用[D]. 吴遵桃. 郑州大学, 2020(02)
- [2]低氧预处理和七氟醚预处理对成年大鼠短暂性全脑缺血的保护作用及对Jun-B mRNA表达的影响[D]. 王道合. 青海大学, 2020(02)
- [3]过氧化物还原酶6敲除减轻癫痫大鼠海马区神经元损伤[D]. 曹晴. 安徽医科大学, 2020(02)
- [4]壮族孕妇铅镉锰暴露及金属硫蛋白基因多态性与新生儿出生缺陷的关系[D]. 李柯桦. 广西医科大学, 2019(08)
- [5]心理应激对大鼠锌代谢的影响及其机制研究[D]. 李莹杰. 第二军医大学, 2013(04)
- [6]清开灵注射液对大鼠缺血性脑损伤时离子稳态失衡的调控机制研究[D]. 齐悦如. 北京中医药大学, 2011(10)
- [7]锌对体外应激海马神经元MTs亚型表达的影响[J]. 陈伟强,程义勇,李树田,洪燕,侯玥. 中国应用生理学杂志, 2006(04)
- [8]锌对心理应激大鼠不同脑区金属硫蛋白亚型表达的影响[J]. 陈伟强,程义勇,李树田,侯玥,洪燕,王冬兰. 营养学报, 2006(04)
- [9]锌对应激大鼠海马金属硫蛋白亚型表达的调控作用及机制研究[J]. 陈伟强,程义勇,李树田,王冬兰,于志杰,洪燕. 卫生研究, 2005(02)
- [10]锌对应激大鼠海马金属硫蛋白亚型表达的调控作用及机制研究[A]. 陈伟强,程义勇,李树田,王冬兰,于志杰,洪燕. 达能营养中心青年科学工作者论坛优秀论文集2005年第2期, 2005