一、抑制血管紧张素II药物在延缓肾脏病进展中的作用（论文文献综述）
杨洁珂[1]（2021）在《原儿茶醛抑制lncRNA9884介导的炎症以改善肾脏纤维化的研究》文中指出目的:慢性肾脏病（CKD）及其引起的终末期肾病（ESRD）是危害人类健康的主要疾病之一,其发病率高、并发症多,已经成为引起全球性关注的公共健康问题,给家庭和社会造成了巨大的经济负担。根据美国肾脏数据系统（USRDS）2019年的年报,目前CKD在全球一般人群患病率约为14.5%,其中每100名患者中就有三分之二的病人会发展为不可逆的肾功能衰竭,需要引起广泛的重视。然而目前慢性肾脏病的防治手段较为局限,口服药物和替代治疗方法的选择面都很狭窄,且费用昂贵,亟需开发新药或者新的治疗手段来降低患者治疗成本并有效缓解疾病的进展。长久以来,我国多年来的深厚中医文化底蕴沉淀出了许多对于慢性肾病有效的经方,但因其中药成分繁多,治疗机制复杂难辨,难以形成国际认可并统一的治疗准则。亟待我们深入挖掘其中的小分子成分并探索研究其具体的分子机制。本研究通过构建单侧输尿管阻塞（UUO）诱导的小鼠体内纤维化及炎症的模型和体外提取原代肾小管上皮细胞（TECs）使用TGF-β1诱导刺激纤维化以及IL-1β诱导刺激炎症模型,使用血清肾功能检测、组织切片病理染色、Western Blot、Real-time PCR、ELISA、CCK8毒性分析、免疫组织化学染色和免疫荧光标记、过表达质粒等实验方法和指标,旨在探讨中草药丹参的主要单体成分原儿茶醛（PCA）治疗梗阻性肾病的作用,以及调控lnc RNA9884（LRNA9884）发挥抗炎和抗纤维化的潜在分子机制。方法:首先建立体内SPF级C57BL/6小鼠的梗阻性肾病UUO模型,30只雄性小鼠被随机分为假手术组（Sham组）、梗阻性肾病模型组（UUO组）、低剂量原儿茶醛治疗组（10 mg/kg/d PCA,UUO+PCA 10）和高剂量原儿茶醛治疗组（40 mg/kg/d PCA,UUO+PCA 40）。PCA治疗组手术前腹腔注射给药一次,之后连续注射7天,每日一次,其余各组小鼠每日给予等体积生理盐水腹腔注射。7日之后,麻醉小鼠心脏采血并处死小鼠收集血清和处理肾脏用于开展实验。检测小鼠血清肌酐、尿素氮肾功能指标,组织切片行HE、Masson染色观察肾脏病理学改变情况;免疫组化、免疫荧光或者蛋白印迹,realtime-PCR检测α-SMA、Fibronectin、Smad3、NF-κB、Collagen I及MCP-1、i NOS、COX-2、IL-1β、TNF-α和IL-6的表达;利用realtime-PCR检测LRNA9884表达情况;ELISA测定血清中促炎细胞因子IL-1β,TNF-α和IL-6的分泌情况。在体外利用TECs分别建立IL-1β刺激诱导的细胞炎症模型和TGF-β1刺激诱导的细胞纤维化模型,并同时予以PCA不同浓度治疗组（20μM,40μM,80μM）一同处理24小时后,收集细胞上清和细胞,并及时提取蛋白、RNA冻存用于后续的实验。免疫荧光染色近端肾小管标志物AQP1、CK18以检测所提取TECs细胞纯度;CCK-8检测不同浓度PCA干预后的细胞活力并筛选出适宜浓度作为体外治疗的剂量;利用蛋白印迹,realtime-PCR实验方法检测各组细胞中α-SMA,Fibronectin,Collagen I,Smad3,NF-κB及MCP-1,i NOS,COX2,TNF-α和IL-6的表达;通过realtime-PCR检测各组细胞中LRNA9884的表达情况;ELISA测定细胞上清液中促炎细胞因子TNF-α和IL-6的分泌情况;进一步通过体外转染pc DNA3.1-LRNA9884质粒在TECs中过表达LRNA9884,检测上述指标的变化情况。结果:通过血清肌酐、尿素氮的检测结果以及观察组织切片HE染色情况我们发现予以PCA治疗可部分逆转UUO引起的肾功能不全和病理改变。Masson染色及纤维化代表指标α-SMA,Fibronectin,Collagen I蛋白和m RNA水平realtime-PCR检测发现予以PCA治疗可显着减轻UUO所引起的纤维沉积。通过免疫荧光、蛋白印迹,realtime-PCR以及ELISA检测发现PCA干预后在蛋白和m RNA水平上均降低了UUO所引起的炎症细胞因子的过度表达。进一步检测发现PCA降低了NF-κB和Smad3通路的活化以及LRNA9884的表达。根据CCK-8检测结果筛选出药物适宜治疗浓度（20μM,40μM,80μM）,通过蛋白印迹,realtime-PCR检测发现PCA可以抑制IL-1β诱导的TECs中i NOS、COX2、MCP-1、TNF-α、IL-6、IL-1β促炎细胞因子在蛋白和m RNA水平上的表达。ELISA检测细胞上清发现促炎细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β的表达同样被PCA干预后抑制。蛋白印迹检测进一步发现磷酸化的NF-κB激活受到抑制,realtime-PCR检测发现LRNA9884的表达在PCA干预后呈剂量依赖性下降,结果提示我们PCA的抗炎作用于调控LRNA9884有着密切关系。进一步通过转染pc DNA3.1-LRNA9884质粒在TECs中过表达LRNA9884时,上述指标在蛋白和m RNA水平上的表达均显着逆转,表明PCA的确可通过介导LRNA9884/MCP-1信号通路来抑制炎症反应。进一步使用PCA干预TGF-β1刺激的TECs,我们发现PCA能抑制TGF-β1诱导的纤维化模型中磷酸化的Smad3的活化,在蛋白和m RNA水平上均减轻纤维相关指标α-SMA,Fibronectin,Collagen I的表达,从而阻止上皮-间质转化（EMT）。结论:1.原儿茶醛可改善UUO小鼠肾功能损害,减轻肾小管的坏死。2.原儿茶醛在体内外均可抑制小鼠肾脏上皮-间质转化的发生和促炎因子的浸润。3.原儿茶醛可通过下调LRNA9884/MCP-1信号途径减轻炎症以改善肾间质纤维化。总之,原儿茶醛可通过抑制LRNA9884和NFκB信号途径引起的炎症反应以减轻阻塞性肾病的纤维化,研究结果为PCA在未来应用于临床治疗奠定了新的理论基础。
楚鎏慈[2]（2021）在《宋立群教授辨治糖尿病肾病Ⅲ-Ⅳ期验方的挖掘及其网络药理学机制探讨》文中研究指明目的:收集宋立群教授辨治糖尿病肾病Ⅲ-Ⅳ期的医案进行数据挖掘,总结其临床经验与核心验方;对宋师治疗糖尿病肾病Ⅲ-Ⅳ期的核心经验方进行网络药理学分析及分子对接技术验证,探讨宋师经验方治疗糖尿病肾病的作用机制。方法:1.收集2010年1月-2020年9月于黑龙江中医药大学附属第一医院肾病科门诊就诊,由导师宋立群教授诊治的567例糖尿病肾病Ⅲ-Ⅳ期患者作为研究对象,将病例进行标准化处理后,运用中医传承计算平台（V3.0）对于症候、方药等进行数据挖掘,结合宋师相关医案、论着进行研读,对挖掘结果进行分析,从中提炼宋师辨治经验及核心经验方。2.选取宋立群教授辨治糖尿病肾病Ⅲ-Ⅳ期的核心经验方进行网络药理学分析及分子对接技术验证,我们利用TCMSP数据库筛选宋师经验方中的生物活性成分及作用靶点,利用GeneCard5、OMIM、Pharm GKB等数据库检索糖尿病肾病的基因靶点,使用Uniprot、Perl及R软件将药物相关成分靶点及疾病相关基因靶点进行整合汇总,筛选出共同作用靶点,借助Cytoscape构建药物与疾病调控网络,利用STRNG数据库构建蛋白互作网络,运用R软件进行GO与KEGG基因功能富集分析并可视化,使用Autodock vina对活性成分及靶点蛋白进行分子对接。结果:1.一般情况:本研究最终纳入567例糖尿病肾病Ⅲ-Ⅳ期首诊处方,共计诊次2194次,男性（358例,63.14%）多于女性（209例,36.86%）;宋师辨证分型后将本虚证型分为脾肾亏虚证（401例,70.72%）和肝脾肾虚证（166例,29.27%）,兼夹的标实证分为水湿证（259例,46.67%）、血瘀证（156例,27.51%）及不兼实证（152例,26.82%）。2.症状情况:本研究纳入的567例病例中,主要症候为腰膝酸软、尿多泡沫、呕恶纳呆、小便清长、夜尿频多、腹胀便溏、神疲乏力、手足浮肿、肢体浮肿、面目浮肿等;脾肾亏虚证的主要症候为腹胀便溏、少气懒言、呕恶纳呆、面色萎黄等;肝脾肾虚证的主要症候为咽干口燥、盗汗、视物模糊、大便干结、头晕目眩、五心烦热、口渴喜饮等;水湿证的主要症候为肢体浮肿、手足浮肿、肢体困重、形体肥胖、胸闷不舒等;血瘀证的主要症候为皮下瘀斑、口唇紫暗、定位刺痛、夜间加重、肌肤甲错、肢体麻木、尿血等。3.处方用药情况:首诊处方567张,共涉及中药217味,总使用频数9831次,频次排名前10味的中药为:黄芪、白术、金樱子、女贞子、芡实、茯苓、覆盆子、沙苑子、菟丝子、白果;脾肾亏虚证特色用药为:陈皮、锁阳、石莲子、桑螵蛸;肝脾肾虚证特色用药为:桑椹、墨旱莲、山茱萸、牛膝、山楂、鸡内金;水湿证特色用药为:桑白皮、路路通、穿山龙、苏木;血瘀证特色用药为:生地黄炭、熟地黄炭、大蓟炭、小蓟炭、丹参、郁金、鸡血藤、瓜萎;用药药性主要为平性药,其次为温性药、寒性药,药味以甘性药、苦性药、酸性药为主,归经以肾经,脾经和肝经为主,宋立群教授常用药对组合6对,药物组合9组,567首方剂聚类分析共聚为4类。4.网络药理学研究及分子对接技术验证:经过筛选得知,宋师经验方中46种活性成分可作用于糖尿病肾病的223个靶点,主要活性成分为β-胡萝卜素、β-谷苗醇、鞣花酸、刺芒柄花素、异鼠李素、山柰酚、木犀草素、苦参碱、槲皮苷、芝麻素等;核心靶点为MYC、JUN、CCND1、TP53、CDKN1A、RB1、AKT1、MAPk1、RELA、CTNNB1 等;GO功能富集分析主要涉及聚合酶Ⅱ转录调节复合物活化、细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶全酶复合物、转录调节复合物等生物学过程;KEGG通路富集分析主要涉及糖尿病并发症AGE-RAGE信号通路,人巨细胞病毒感染信号通路,胰岛素抵抗,IL-17信号通路,TNF信号通路,PI3 K-Akt信号通路,Th 17细胞分化机制,p53信号通路等;度值最高的有效成分配体与受体进行分子对接,得到19对配体-受体（结合自由能≤-5.0KJ·mol-1）的分子对接结果。结论:1.黄芪、白术、茯苓、覆盆子、女贞子、芡实、金樱子、菟丝子、沙苑子为宋立群教授治疗糖尿病肾病Ⅲ-Ⅳ期的核心经验方。2.宋师认为糖尿病肾病Ⅲ-Ⅳ期的病机为“本虚标实”,治疗时始终秉承“肝脾肾同调,补虚扶正;湿与瘀并治,泻实祛邪”的诊疗思路。3.宋师经验方治疗糖尿病肾病具有“多成分-多靶点-多途径”的特点,网络药理学及分子对接结果显示该方主要通过调节AGE-RAGE、IL-17、TNF等信号通路参与炎症反应、氧化应激反应、糖脂代谢反应、胰岛素效应及细胞生长因子等生物学功能,从而作用于糖尿病肾病,以达到控制其发生、发展的目的。
聂闻达[3]（2021）在《补肾活血祛湿化浊法治疗CKD4期伴高尿酸血症临床疗效观察》文中指出目的:本课题以国医大师张大宁教授及我师司福全教授治疗CKD4期伴高尿酸血症的中医辨证论治理论体系为指导,充分认识慢性肾脏病（Chronic kidney disease,CKD）肾虚血瘀的基本病机,探究“补肾活血祛湿化浊法”治疗CKD4期伴高尿酸血症的临床疗效。通过分析两组受试者治疗前后肾功能、24小时尿尿酸及糖、脂代谢水平、中医症状积分的变化来反映治疗效果,以期达到改善该病临床症状、延缓疾病进展,达到截断病势、既病防变的目的。为预防及治疗治CKD伴高尿酸血症,延缓肾功能损伤,改善疾病预后提供有效方法。方法:通过收集2018年11月至2020年6月就诊于天津市中医药研究院附属医院肾病科的患者,符合本课题设定的纳入和排除标准的CKD4期伴高尿酸血症患者60例,按简单随机分组法分为治疗组与对照组,每组30例。对照组予非布司他片口服并予对症治疗,治疗组在对照组基础上予中药方剂加减治疗,观察周期均为8周。经脱落、剔除,最终纳入患者59例。记录两组患者治疗前后24小时尿尿酸、肾功能、糖、脂代谢水平等相关试验指标和中医症状积分的情况,利用SPSS 24.0统计软件分析数据,得出结论。结果:1.实验室指标:组间比较,治疗后Scr、BUN、SUA、24h UUA、e GFR、GLU、TC、收缩压组间对比,差异有统计学意义（P<0.05）;2.中医症状疗效:治疗组临床痊愈0例,显效2例,有效22例,无效6例,总有效率为83.3%;对照组临床痊愈0例,显效0例,有效14例,无效15例,总有效率为48.3%。两组中医症状积分治疗前后差值比较有显着统计学意义（P<0.01）。3.高尿酸血症临床疗效:治疗组显效9例,有效17例,无效4例,总有效率为86.7%;对照组显效7例,有效12例,无效10例,总有效率为65.5%,治疗组优于对照组。4.CKD临床疗效:治疗组显效5例,有效18例,稳定7例,无效0例,总有效率为76.7%;对照组显效0例,有效13例,稳定8例,无效8例,总有效率为44.8%,治疗组优于对照组。5.安全性指标:两组治疗前后AST、ALT的差异无统计学意义（P>0.05）。结论:补肾活血祛湿化浊法治疗CKD4期伴高尿酸血症证患者,不仅能够改善患者腰膝酸软、关节疼痛、面色晦暗、倦怠乏力、气短懒言、舌质紫暗、脘腹胀满、食欲不振、便溏的临床症状,且能降低Scr、BUN、HUA、GLU、TC、24h UUA、收缩压等实验室指标,有效提高肾小球滤过率,且不良反应少,安全可行,体现出中医药在治疗CKD4期伴高能尿酸血症中的特有优势。
刘海雯[4]（2021）在《益肾降糖饮对气阴两虚夹瘀型糖尿病肾脏病G3A2-3期患者的临床疗效观察以及对AIF-1的影响》文中进行了进一步梳理目的:观察运用益肾降糖饮治疗气阴两虚夹瘀型G3A2-3期糖尿病肾脏病的临床疗效;并观察治疗前后患者的血清同种异体移植物炎性因子-1（AIF-1）的变化,探讨AIF-1与糖尿病肾脏病之间的关系,以及益肾降糖饮治疗糖尿病肾脏病的可能作用机制,以期为益肾降糖饮的临床应用提供参考依据。方法:将符合本课题纳入标准的62例G3A2-3期DKD患者,随机分为对照组31例,试验组31例。对照组予常规西药治疗,试验组在对照组基础上加用益肾降糖饮治疗,2组疗程均为8周,观察2组治疗前后血清同种异体移植物炎性因子-1（AIF-1）、C反应蛋白（CRP）、糖化血红蛋白（Hb Alc）、空腹血糖（FPG）、24h尿蛋白定量（24h UTP）、尿白蛋白/肌酐比值（ACR）、血肌酐（Scr）、估算的肾小球滤过率（e GFR）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）及中医证候积分的变化情况。同时纳入20例健康者作为健康对照组,与DKD组患者相关实验室指标相比较。结果:1、治疗前,对照组、试验组的一般资料（性别、年龄、BMI）、相关实验室指标、中医证候积分差异均无统计学意义（P>0.05）,具有可比性。2、DKD组AIF-1明显高于健康对照组（P<0.01）,有显着统计学差异。3、益肾降糖饮联合常规西药治疗G3A2-3期气阴两虚夹瘀型糖尿病肾脏病临床总有效率为86.67%,对照组为73.33%,试验组优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;试验组中医证候总有效率为96.67%,对照组为83.33%,试验组优于对照组,有统计学差异（P<0.05）。两组的中医证候积分较治疗前均有显着改善（P<0.01）,试验组改善幅度优于对照组,有显着统计学差异（P<0.01）。4、两组ACR、24h UTP、AIF-1、CRP、TC、TG等指标较治疗前均有改善,试验组改善程度优于对照组,差异有显着性（P<0.01）。5、AIF-1与ACR、24h UTP、CRP、Hb A1c、FPG呈正相关（P<0.05）,偏相关分析显示AIF-1与CRP、24h UTP、ACR相关性更为密切（P<0.01）,AIF-1与ACR、24h UTP、CRP的关系,可以用回归方程表述为:AIF-1=-70.497+0.096ACR+302.965（24h UTP）+23.775CRP,三个变量对AIF-1影响作用合计达到91.8%。结论:1、益肾降糖饮联合常规西药治疗气阴两虚夹瘀型G3A2-3期DKD患者疗效显着,相比常规西药治疗,在改善中医证候疗效方面有更好的效果。2、试验组治疗后ACR、24h UTP、AIF-1、CRP、TC、TG较前降低,提示益肾降糖饮对减少蛋白尿、调节脂代谢、改善微炎症状态方面有一定的效果。3、AIF-1与24h UTP、ACR、CRP显着相关,或可在一定程度上反应早期DKD微炎症情况。4、本次研究过程中短期内未发现益肾降糖饮联合常规西药治疗有明显副作用,安全性较好,可在临床推广使用。
李娟[5]（2021）在《沙库巴曲缬沙坦对心力衰竭患者肾脏保护作用的的Meta分析》文中研究说明目的:应用Meta分析评估与单用肾素-血管紧张素系统（RAS）抑制剂相比,沙库巴曲缬沙坦（LCZ696）是否在延缓心力衰竭患者的肾功能的进一步恶化方面更有优势。方法:我们在PUBMED、EMBASE、MEDLINE、Cochrane图书馆等在线数据库中搜索相关研究,根据纳入和排除标准筛选文章,并进行数据提取和质量评价,采用stata12.0软件进行Meta分析。结果:我们共检索到4485篇相关文献,经过选择后最终有10篇符合我们的纳入标准而纳入,共28657名受试者。有4项研究对比药物为ACEI类,6项研究对比药物为ARB类。大多数研究是对心力衰竭患者进行研究（n=8）,其中5项研究受试者射血分数≤40%,而另外3项研究受试者人群射血分数>45%。与单用RAS抑制剂相比,LCZ696导致肾功能恶化的风险较低[OR=0.767（95%IC 0.624-0.942）,P=0.011]。相对于射血分数≤40%的HF患者,射血分数>40%的HF患者肾脏恶化的风险更低。而对于RAS对比剂种类,与ACEI类药物对比的研究和与ARB类药物对比的研究相比,肾脏的恶化风险没有发现差异。患者肾脏恶化的风险随年龄的增加而降低,女性占比越多而患者肾脏恶化的风险下降,而随访时间无明显影响。结论:与单用肾素-血管紧张素系统（RAS）抑制剂相比,沙库巴曲缬沙坦（LCZ696）在延缓心力衰竭患者的肾功能的进一步恶化方面更有优势。
吴宇[6]（2021）在《老年慢性肾脏病病因演变及中西医结合治疗方法》文中认为目的:近年来随着我国经济水平的提高,糖尿病、高血压在人群中发病率与患病率逐渐攀升,慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）患者病因构成与既往相比发生了一些改变。中医药是我国传统医学宝库,本研究的主要目的是在明确CKD病因谱的基础上观察中西医结合治疗CKD的有效性、安全性。方法:研究分为三部分,第一部分为疾病谱研究:通过对我院1990-1991年、2009-2010年及2018-2019年3个时间段CKD住院患者病因进行分析,对比中青年组（18≤年龄≤ 60岁）与老年组（年龄>60岁）CKD的病因构成和演变。第二部分为循证医学研究:在线检索主要中英文数据库,包括中国知网、万方数据库、维普数据库、中国生物医学文献数据库、the Cochrane Library、Medline、EMBase和Web of Science,筛选雷公藤制剂联合ACEI/ARB类药物与单独应用ACEI/ARB类药物治疗糖尿病肾病（diabetic nephrology,DN）的随机对照研究,纳入治疗前后血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量下降水平、不良事件发生率及总有效率等指标进行荟萃分析。第三部分为临床疗效观察,将我院近5年住院治疗的老年CKD 3-4期患者根据用药情况分为对照组、肾康注射液组和肾康注射液联合前列地尔组,分析治疗前后患者肾功能情况及总体治疗缓解率。结果:第一部分疾病谱研究中,1990-1991年、2009-2010年和2018-2019年CKD的首位病因分别为慢性肾炎（52%）、慢性肾炎（35%）和糖尿病（36%）。3个时间段的CKD病因构成有显着差异（P<0.001）。糖尿病和高血压导致的CKD占比呈上升趋势,慢性肾炎占比呈下降趋势。老年组中,3个时间段CKD的首位病因分别为慢性肾炎（34%）、糖尿病（40%）和糖尿病（43%）,高血压在2009-2010年和2018-2019年这两个时间段超过慢性肾炎,成为CKD的第二位病因。中青年组3个时间段中,慢性肾炎虽然呈现下降趋势,但始终是CKD的首位病因。第二部分荟萃分析共纳入23项研究,1878例患者,与单用ACEI/ARB相比,加用雷公藤制剂能更显着降低患者血肌酐（MD=-6.06,95%CI:-10.89～-1.22,P=0.01）、24h尿蛋白定量（MD=-0.70,95%CI:-0.87～-0.53,P<0.00001）水平,提高患者血清白蛋白水平（MD=2.83,95%CI:1.66～4.01,P<0.00001）,获得更高临床缓解率（OR=3.05,95%CI:1.87～4.97,P<0.00001）。但同时联合用药组白细胞均值下降水平、不良事件发生率均高于单用ACEI、ARB组。第三部分疗效观察中结果表明:对照组患者治疗前后肾功能未见明显改善,肾康注射液组治疗后血清肌酐平均下降21.04±34.35 umol/L,eGFR升高6.04±10.03ml/min/1.73m2,联合治疗组治疗后血清肌酐平均下降27.23±25.03 umol/L,eGFR 升高 7.14±5.89 ml/min/1.73 m2。三组的总有效率分别为 18.0%、50.0%、60.0%,差异具有统计学意义（P=0.000）。结论:糖尿病是目前CKD的最主要病因。糖尿病和高血压导致的肾损害是老年CKD的主要病因,虽然占比呈下降趋势但慢性肾炎仍是中青年CKD的首位病因。雷公藤制剂与ACEI/ARB类药物联合使用治疗糖尿病肾病能获得更高的总有效率,但也增加了不良事件发生率,临床应谨慎使用。与常规治疗相比,加用肾康注射液或联合应用肾康注射液和前列地尔,能显着改善CKD3-4期老年患者肾功能,治疗总体有效率更高。
李慧敏[7]（2021）在《STAT3调控的自噬在血管紧张素Ⅱ诱导的肾小管上皮细胞衰老过程中的作用及氯沙坦对其的影响》文中指出目的:人口老龄化是目前全球人口趋势,这给世界各国社会医疗、养老、劳动力、经济发展等方面带来诸多挑战,因此研究衰老导致的相关疾病具有十分重要意义。肾脏具有排泄代谢废物、维持水、电解质平衡的重要功能,其衰老对机体影响不容忽视。肾脏衰老包括随年龄增加导致的生理性衰老和由于一些疾病,如高血压、糖尿病等疾病导致的早老性衰老,它可增加慢性肾脏病（CKD）的发病率,给社会带来沉重的医疗负担。衰老在组织水平表现为DNA、蛋白质和脂质、细胞器损伤以及毒性修饰的聚集;而自噬正是一种涉及蛋白质和细胞器降解的细胞途径,它可维持细胞稳态,参与机体衰老、炎症、肿瘤、免疫等多种病理生理过程。STAT3作为JAK/STATs通路的重要成员,参与多种肾脏疾病的发生及自噬、衰老等过程。肾素-血管紧张素-醛固酮系统是维持肾脏正常生理功能的主要系统,其异常亦可导致多种肾脏疾病的发生,该系统的主要效应因子为血管紧张素II（Ang II）。STAT3参与调控的自噬在血管紧张素II诱导的肾小管上皮细胞衰老过程中的作用尚未阐明。因此本文着重于研究血管紧张素II诱导的肾小管上皮细胞衰老过程中STAT3通路、自噬参与的调控作用和机制,并观察应用血管紧张素II受体拮抗剂氯沙坦在改善肾小管上皮细胞衰老过程中的作用和机制,并在小鼠体内进行验证,以期为延缓肾脏衰老、慢性肾脏病防治提供策略。研究方法:1.建立血管紧张素Ⅱ诱导的人肾小管上皮细胞衰老模型并观察自噬在其衰老过程中的变化及对衰老的影响。应用10-6mol/L浓度的Ang II作用于人HK-2细胞0h至72h,采用流式细胞术检测细胞周期、Western blot法检测衰老相关蛋白P21表达水平、衰老相关β-半乳糖苷酶染色（SAβ-gal）检测衰老细胞阳性率方法以建立人肾小管上皮细胞衰老模型。此后应用Ang II、3-MA作用于人HK-2细胞,并应用Western blot法检测自噬相关蛋白LC3II、P62、衰老相关蛋白P21表达水平、电镜检测自噬体数量、LC3-GFP-m RFP自噬双标腺病毒转染及激光共聚焦显微镜观察自噬光斑数量、SAβ-gal检测衰老细胞阳性率,以观察Ang II诱导的人肾小管上皮细胞自噬的变化及对衰老的影响。2.调控STAT3通路并观察其在血管紧张素Ⅱ诱导的人肾小管上皮细胞衰老过程中的作用及氯沙坦干预对人肾小管上皮细胞STAT3通路、自噬、衰老的影响。应用Ang II诱导人肾小管上皮细胞衰老,使用Western blot法检测STAT3/PI3KC3通路变化,并应用S3I-201药物阻断及si RNA-STAT3基因阻断STAT3并应用Western blot法观察p STAT3蛋白、PI3KC3蛋白、衰老相关蛋白P21、自噬相关蛋白LC3II、P62表达水平、电镜检测自噬体数量,LC3-GFP-m RFP自噬双标腺病毒转染观察自噬光斑数量、β-半乳糖苷酶染色检测衰老细胞阳性率等指标。在Ang II诱导人肾小管上皮细胞衰老过程中应用氯沙坦处理人HK-2细胞,并应用Western blot法观察p STAT3、P21、LC3II、P62表达水平、电镜检测自噬体数量,LC3-GFP-m RFP自噬双标腺病毒转染观察自噬光斑数量、SAβ-gal染色检测衰老细胞阳性率等方法观察氯沙坦对HK-2细胞STAT3通路、自噬、衰老的影响及作用。3.体内验证血管紧张素Ⅱ诱导小鼠肾脏衰老过程肾小管上皮细胞STAT3通路、自噬及衰老的变化及氯沙坦对其影响。18只雄性C57BL/6J小鼠适应性饲养1周后将小鼠随机分为3组,即:年轻对照组（小鼠不做任何处理,正常饲养4周）、Ang II组（输注Ang II:Alzet微渗透泵输注Ang II,以1000 ng/kg/min速率连续输注Ang II,共4周）、Ang II+氯沙坦组（输注Ang II+灌胃氯沙坦;Ang II通过Alzet微渗透泵以1000 ng/kg/min速率连续输注4周,开始输注2周后,开始给予氯沙坦以30 mg/kg/d给予小鼠连续灌胃2周）,每组均为6只。每周监测小鼠血压变化。第4周结束后收集小鼠血液、尿液标本并检测小鼠血尿素氮、血肌酐、24h尿蛋白、尿NAG变化,留取肾脏标本并采用Masson染色、SAβ-gal染色、免疫组化、Western blot法检测P21、LC3、p STAT3变化以观察小鼠肾脏STAT3通路、自噬、衰老变化。结果:1.血管紧张素Ⅱ诱导人肾小管上皮细胞衰老过程中自噬活性增强并介导其衰老。10-6mol/L浓度的Ang II作用于人HK-2细胞,CCK-8法结果显示Ang II 0-72h促进人HK-2细胞增殖,此后抑制细胞增殖;细胞周期检测发现Ang II作用于人HK-2细胞72h后超过80%的细胞进入G0-G1期,显着高于正常对照组;Western blot结果显示,与正常对照组相比,人HK-2细胞衰老相关蛋白P21表达水平呈时间依赖性增加,72h时P21蛋白表达水平显着高于正常对照组;SAβ-gal染色发现,与正常对照组相比,人HK-2细胞β-半乳糖苷酶染色细胞阳性率呈时间依赖性增加,48h、72h时与对照组相比均显着增加,72小时达最高值。应用10-6mol/L浓度的AngⅡ诱导人HK-2细胞衰老过程中,与正常对照组相比,Western blot结果显示自噬相关蛋白LC3II/LC3Ι比值呈时间依赖性增加、72h时与正常对照组相比显着增加,P62蛋白表达24h开始显着减少、72h达最低;电镜检测显示在72h时HK-2细胞自噬体数量明显增加;LC3-GFP-m RFP自噬双标腺病毒转染显示在72h时HK-2细胞LC3荧光点数量显着增多。加入3-MA抑制人HK-2细胞自噬后,与Ang II组相比（72h）,Ang II+3-MA组Western blot结果显示LC3II蛋白表达明显下降,P62蛋白表达明显增多,P21蛋白表达明显下降,电镜检测自噬体数量明显减少,LC3-GFP-m RFP自噬双标腺病毒转染LC3荧光点数量显着减少,SAβ-gal染色细胞阳性率显着减少。2.血管紧张素Ⅱ诱导人肾小管上皮细胞衰老过程中STAT3/PI3KC3通路激活,药物抑制和基因沉默STAT3表达可抑制血管紧张素Ⅱ诱导的人肾小管上皮细胞自噬激活,减轻细胞衰老应用10-6mol/L浓度Ang II作用于人HK-2细胞,Western blot结果显示p STAT3蛋白在第24h开始呈时间依赖性表达增加,72h时p STAT3蛋白表达与正常对照组相比显着增加;随着p STAT3的激活,PI3KC3蛋白在48h开始表达显着增加,72h时表达显着高于正常对照组。提示血管紧张素II诱导人肾小管上皮细胞衰老过程中STAT3/PI3KC3通路激活。在10-6mol/LAng II作用的人HK-2细胞中加入S3I-201、si RNA-STAT3、氯沙坦后,与Ang II组（72h）相比,Ang II+S3I-201组、Ang II+si RNA-STAT3组、Ang II+氯沙坦组Western blot结果显示p STAT3蛋白表达被显着抑制、LC3II蛋白表达明显下降、P62蛋白表达明显增加、P21蛋白表达明显下降,电镜检测发现自噬体数量均显着减少,LC3-GFP-m RFP自噬双标腺病毒转染LC3荧光点数量均显着减少,SAβ-gal染色阳性率均显着减低。3.氯沙坦可抑制血管紧张素Ⅱ诱导小鼠肾脏衰老过程中STAT3激活、自噬激活并延缓小鼠肾小管上皮细胞衰老Ang II诱导小鼠肾脏衰老过程中,随着小鼠周龄的增加,与年轻对照组相比,Ang II组小鼠收缩压及舒张压均逐渐增高,第4周龄时Ang II组小鼠收缩压、舒张压均显着高于年轻对照组,血尿素氮、血肌酐、24h尿蛋白、尿NAG均显着高于年轻对照组,Masson染色显示肾小管间质纤维化程度明显加重,β-半乳糖苷酶染色阳性率显着增加,免疫组化显示肾小管上皮细胞P21表达水平显着升高,p STAT3、LC3表达水平亦显着高于年轻对照组,Western blot结果显示肾小管上皮细胞P21蛋白表达水平显着升高,p STAT3、LC3蛋白表达水平亦显着高于年轻对照组。而应用氯沙坦后,在第4周龄时,与Ang II组相比,Ang II+氯沙坦组小鼠收缩压、血尿素氮、24h尿蛋白、尿NAG均显着下降,但舒张压、血肌酐下降无统计学差异,Masson染色显示肾小管间质纤维化程度明显减轻,SAβ-gal染色阳性率显着下降,免疫组化显示肾小管上皮细胞P21表达水平显着减低、p STAT3、LC3表达水平显着下降,Western blot结果显示肾小管上皮细胞P21蛋白表达水平显着下降,p STAT3、LC3蛋白表达水平显着下降。结论:1、Ang II可通过促进自噬的方式诱导人肾小管上皮细胞衰老,使用3-MA抑制自噬、可减轻Ang II诱导的人肾小管上皮细胞衰老。2、Ang II诱导人肾小管上皮细胞衰老过程中STAT3/PI3KC3通路激活,S3I-201、si RNA-STAT3、氯沙坦均可通过抑制STAT3的激活,进而抑制Ang II诱导的人肾小管上皮细胞自噬并减轻细胞衰老。3、STAT3通路及自噬激活参与了Ang II诱导的小鼠肾小管上皮细胞衰老过程,氯沙坦可抑制此过程中STAT3的激活、抑制自噬过度激活并延缓小鼠肾小管上皮细胞衰老,为第一部分和第二部分论文提供了体内验证支持。
胡欢[8]（2021）在《Adropin在高血压心肌重构中的作用及机制研究》文中认为研究背景:高血压心肌重构主要的特征表现为左心室肥厚和间质纤维化,是心力衰竭发生的主要原因之一。在高血压心肌重构进程中,压力负荷、神经体液及细胞因子等各种刺激因素引起心肌组织中氧化应激增强和炎症反应的激活,进一步导致心肌细胞肥大、心肌成纤维细胞的活化和细胞外基质成分的合成。因此,抑制氧化应激及炎症是减轻高血压心肌重构的重要途径之一。Adropin是由能量稳态相关基因（Enho）编码的一种肽类激素,早期研究发现其在维持能量代谢平衡和改善胰岛素抵抗过程中发挥重要作用。近期越来越多的研究表明Adropin同样可以通过抗氧化应激和抗炎作用参与多种疾病的发生与发展过程,然而其在高血压心肌重构中的作用及调节机制并不明确。本研究团队前期研究发现Adropin可能在肥胖青少年患者的血管内皮功能中发挥保护作用。基于Adropin在抗氧化应激、抗炎、维持能量代谢平衡、改善胰岛素抵抗及保护血管内皮功能等诸多病理生理过程中发挥重要作用,本研究团队推测Adropin可能参与了高血压心肌重构进程。本研究从临床、动物及细胞水平探究了Adropin在高血压心肌重构中的作用及其相关机制。第一部分高血压左室肥厚患者外周血Adropin水平的变化及意义目的:探讨高血压左室肥厚患者外周血Adropin水平的变化及意义。方法:本研究纳入于南昌大学第二附属医院心血管内科就诊的高血压患者86例以及于南昌大学第二附属医院体检科就诊的健康对照者12例,收集入组人群一般资料、临床指标结果、心脏彩超数据等。采用ELISA法检测入组人群血清Adropin水平,分析其在高血压患者和健康对照人群中的变化,进一步探究Adropin在高血压伴左室肥厚患者和高血压不伴左室肥厚对照人群血清中的变化,采用多元线性回归分析Adropin与左室肥厚标志物左室质量指数的关系,采用ROC曲线分析检测Adropin在高血压LVH中可能的诊断价值。结果:1.与健康对照人群相比,高血压患者血清Adropin表达水平显着降低,健康对照组Adropin水平:9.06±2.80 pg/mL;高血压组Adropin水平:4.64±0.64 pg/mL。2.与高血压不伴左室肥厚对照人群相比,高血压伴左室肥厚人群年龄更高,Adropin表达水平显着降低,其中高血压不伴左室肥厚对照组Adropin水平:4.79±0.65 pg/mL;高血压伴左室肥厚组:4.15±0.21 pg/mL。3.运用多元线性回归分析发现Adropin与左心室质量指数（LVMI）呈负相关性。当调整年龄、性别和身体质量指数（Body Mass Index,BMI）混杂因素后,血清Adropin水平每增加一个单位,LVMI下降7.31个单位:β（95%CI）=-7.31（-13.95,-0.67）,P=0.034。进一步将Adropin水平按三分位处理,与T1组（<4.36pg/mL）人群相比,T2（4.36 to<4.61 pg/mL）组和T3（≥4.61 pg/mL）组人群中的LVMI水平均显着降低[T2:β（95%CI）=-18.82（-28.21,-9.42）,P<0.001;T3:β（95%CI）=-20.76（-30.36,-11.15）,P<0.001]。进一步调整年龄、性别、BMI、收缩压、舒张压、总胆固醇、血糖、谷草转氨酶及谷丙转氨酶混杂因素后,血清Adropin水平每增加一个单位,LVMI下降7.52个单位:β（95%CI）=-7.52（-14.32,-0.71）,P=0.034。进一步将Adropin水平按三分位处理,与T1组（<4.36 pg/mL）人群相比,T2（4.36 to<4.61 pg/mL）组和T3（≥4.61 pg/mL）组人群中的LVMI水平均显着降低[T2:β（95%CI）=-17.59（-27.53,-7.65）,P=0.001;T3:β（95%CI）=-20.72（-30.41,-11.04）,P<0.001]。4.ROC曲线分析Adropin水平在高血压左室肥厚中的诊断价值:血清Adropin的曲线下面积为0.936,在4.265 pg/mL临界点处,特异性为89.5%,敏感性为91%,且具有统计学意义。结论:高血压患者血清Adropin水平低于健康对照者,高血压伴左室肥厚患者血清Adropin低于高血压不伴左室肥厚对照者,Adropin与LVMI呈负相关,且其具有作为诊断高血压左室肥厚标志物的可能性。第二部分重组Adropin对自发性高血压大鼠心肌重构的影响目的:探究自发性高血压大鼠血清Adropin水平的变化并观察重组Adropin治疗12周后对自发性高血压大鼠心肌重构的作用及其相关机制。方法:1.纳入6只16周龄的雄性自发性高血压大鼠（Spontaneously Hypertensive Rat,Rat）为实验组即高血压组（SHR）,6只同周龄的雄性Wistar-Kyoto大鼠为对照组即正常血压组（WKY）。使用无创血压仪测量大鼠血压,超声心动仪检测心脏功能指标,HE染色观察心肌组织病理变化,WGA染色观察心肌细胞大小变化,Masson染色观察心肌组织纤维化水平,RT-PCR法检测心肌组织中肥厚标志物ANP、BNP、β-MHC及纤维化标志物Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CTGF的mRNA表达水平,验证自发性高血压大鼠心肌重构模型。通过ELISA法,免疫组织化学法,RT-PCR法及Western Blot法检测自发性高血压大鼠心脏组织中Adropin的表达变化。2.我们构建并合成具有Adropin蛋白生物学活性的重组Adropin34-76多肽,纳入12只4周龄的雄性SHR及6只雄性WKY作为对照组。进一步将SHR分为2组:SHR组（n=6）和SHR接受Adropin处理组（n=6）。Adropin处理组腹腔注射Adropin（2.1μg/kg/d）,SHR组注射同等剂量的赋形剂。处理过程中每两周检测一次血压,处理12周后完成各项反映心肌重构的指标检测。通过ELISA法及Western Blot法检测大鼠血清及心肌组织中炎症因子IL-6及TNF-α的表达水平。通过DHE染色、组织MDA和SOD含量检测法进一步探究大鼠心肌组织中的氧化应激水平。结果:1.相比16周WKY组,16周SHR组大鼠SBP,DBP,心率及心脏重量及心指数（HW/BW）显着增高。彩超分析发现,相比WKY组,SHR组大鼠舒张末期室间隔厚度（IVS;d）,舒张末期左室后壁厚度（LVPW;d）显着增加,舒张末期左室内径（LVID;d）显着降低,而二者左心室射血分数（EF）和缩短分数（FS）无明显差异。组织病理染色发现,相比WKY组,HE染色提示SHR组大鼠心肌组织出现排列紊乱甚至断裂现象,WGA染色提示SHR组大鼠心肌细胞相对面积更大,Masson染色提示SHR组大鼠心肌组织纤维化水平显着增加,RT-PCR法提示SHR组大鼠心肌组织ANP、BNP、β-MHC、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CTGF的mRNA表达水平更高。ELISA,免疫组织化学染色及RT-PCR检测提示SHR大鼠血清及心脏组织中Adropin表达水平显着降低。2.4周龄的大鼠分为三组:WKY组;SHR组;SHR+Adropin组。Adropin处理过程中,相比WKY组,SHR组大鼠的SBP和DBP水平随着年龄的增加显着升高,而Adropin持续处理12周能显着延缓SHR的SBP和DBP的水平增加进展。彩超分析发现,三组在4周龄基线水平时的IVS;d、LVPW;d、LVID;d、EF及FS水平无明显统计学差异。而在Adropin处理12周后的16周龄时,相比WKY组,SHR组的IVS;d,LVPW;d水平显着增高,LVID;d水平显着下降,而SHR+Adropin组的IVS;d,LVPW;d水平较SHR组显着降低,LVID;d水平显着增高。三组的EF和FS水平无明显统计学差异。HE、WGA及Masson染色发现,相比WKY组,SHR组心肌细胞相对面积显着增大,心肌组织纤维化水平显着增高,而Adropin干预能显着降低SHR组大鼠心肌肥大和纤维化水平。RT-PCR法提示,相比WKY组,SHR组心肌组织ANP、BNP、β-MHC、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CTGF的mRNA表达水平更高,而Adropin干预能显着降低其水平。进一步通过ELISA和Western Blot分析发现,相比WKY组,SHR组血清及心肌组织炎症因子IL-6和TNF-α的表达水平显着增高,而Adropin干预能显着降低二者的表达水平。心肌组织DHE染色、MDA和SOD含量检测提示,相比WKY组,SHR组大鼠心肌组织活性氧水平显着增加,MDA水平显着增高,SOD水平显着下降,而Adropin处理能显着降低心肌组织活性氧水平,降低MDA含量,提高SOD的表达水平。结论:16周龄的自发性高血压大鼠伴有心肌重构,Adropin表达水平的下降。重组Adropin治疗12周后显着减轻自发性高血压大鼠的心肌重构水平,降低心脏组织炎症水平及改善氧化应激。第三部分Adropin在小鼠病理性心肌重构中的作用及机制目的:探究高血压心肌重构常见刺激因素压力负荷增加和血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠病理性心肌重构过程中Adropin水平的变化,观察重组Adropin腹腔注射对病理性心肌重构的作用,观察Adropin敲除对病理性心肌重构的作用及其相关机制。方法:1.纳入28只8周龄的C57BL/6小鼠行主动脉弓缩窄（Transverse Aortic Constriction）手术及皮下埋植入式胶囊渗透压泵持续灌注血管紧张素Ⅱ构建小鼠病理性心肌重构模型。小鼠分为4组:假手术Sham组（n=8）,TAC组（n=8）;胶囊渗透压泵持续灌注生理盐水（Normal Saline,NS）组（n=6）,胶囊渗透压泵持续灌注血管紧张素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ）组（n=6）。超声心动仪检测心脏功能指标,HE染色观察心肌组织病理变化,WGA染色观察心肌细胞大小变化,Masson染色观察心肌组织纤维化水平,验证小鼠病理性心肌重构模型。通过ELISA法,RT-PCR法及Western Blot法检测小鼠病理性心肌重构中Adropin的表达变化。2.构建并合成具有Adropin蛋白生物学活性的重组Adropin34-76多肽,纳入48只8周龄的C57BL/6小鼠。进一步将小鼠分为8组:假手术Sham给予赋形剂Vehicle处理组（Vehicle+Sham,n=6）,假手术Sham给予Adropin处理组（Vehicle+Adropin,n=6）,TAC给予赋形剂处理组（Vehicle+TAC,n=6）,TAC给予Adropin处理组（Adropin+TAC,n=6）;含生理盐水（NS）泵植入术给予赋形剂Vehicle处理组（Vehicle+NS,n=6）,含生理盐水（NS）泵植入术给予Adropin处理组（Adropin+NS,n=6）,含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）泵植入术给予赋形剂Vehicle处理组（Vehicle+Ang Ⅱ,n=6）,含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）泵植入术给予Adropin处理组（Adropin+Ang Ⅱ,n=6）。Adropin处理组腹腔注射Adropin（450 nmol/kg/d）2周,Vechile组注射同等剂量的赋形剂。Ang Ⅱ组皮下灌注Ang Ⅱ（1500 ng/kg/d）2周,NS组皮下灌注等剂量的正常生理盐水。处理2周后完成各项反映心肌重构的指标检测,通过DHE染色、组织MDA含量和SOD蛋白表达水平检测法探究小鼠心肌组织中的氧化应激水平,并进一步研究Adropin治疗对Ang Ⅱ刺激引起的病理性心肌重构过程中Nrf2/HO-1信号通路的影响。3.构建Adropin基因敲除小鼠,在血管紧张素Ⅱ模型中进一步进行功能缺失性研究。纳入10只8-10周龄Adropin基因敲除小鼠和10只8-10周龄同窝出生的野生型小鼠。小鼠分为4组:含生理盐水（NS）泵植入野生型小鼠组（WT+NS,n=5）,含生理盐水（NS）泵植入Adropin基因敲除小鼠组(Adropin-/-+NS,n=5),含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）泵植入野生型小鼠组（WT+Ang Ⅱ,n=5）,含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）泵植入Adropin基因敲除小鼠组(Adropin-/-+Ang Ⅱ,n=5)。处理2周后完成各项反映心肌重构的指标检测,通过DHE染色、组织MDA含量和SOD蛋白表达水平检测法探究各组小鼠心肌组织中的氧化应激水平,并进一步研究Adropin敲除对Ang Ⅱ刺激引起的病理性心肌重构过程中Nrf2表达水平的影响。4.构建腺相关病毒AAV9-Nrf2-GFP及空载对照病毒（Vector）,经尾静脉注射特异性上调小鼠心肌组织Nrf2的表达,在Adropin基因缺失加重血管紧张素Ⅱ刺激引起的心肌重构实验中进一步进行功能回复性研究。纳入10只8-10周龄Adropin基因敲除小鼠,小鼠分为2组:尾静脉注射Vector的4周后皮下植入含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）微量泵组（Vector+Ang Ⅱ,n=5）;尾静脉注射AAV9-Nrf2-GFP的4周后皮下植入含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）微量泵组（AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ,n=5）。Ang Ⅱ处理2周后完成完成各项反映心肌重构的指标检测。通过DHE染色、组织MDA含量和SOD蛋白表达水平检测法探究小鼠心肌组织中的氧化应激水平,并进一步研究凋亡相关分子Cleaved Caspase3的蛋白表达情况。结果:1.彩超结果发现,相比Sham组,TAC组的IVS;d和LVPW;d水平显着增高,LVID;d水平下降,而EF及FS二者无明显差异;相比NS组,Ang Ⅱ组的IVS;d、LVPW;d、EF及FS水平显着增高,LVID;d水平下降。组织病理染色发现,相比Sham组,HE染色提示TAC组小鼠心肌组织出现排列明星紊乱以及断裂现象,WGA染色提示TAC组小鼠心肌细胞相对面积更大,Masson染色提示TAC组小鼠心肌组织纤维化水平显着增加。相比NS组,Ang Ⅱ组小鼠心脏出现相似的组织病理学改变。ELISA,RT-PCR及West检测提示TAC小鼠血清及心脏组织中Adropin表达水平较Sham组显着降低,而Ang Ⅱ小鼠血清及心脏组织中Adropin表达水平较NS组显着降低。2.在TAC模型实验中,彩超结果结果,相比Vehicle+Sham组,Vehicle+TAC组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平显着增高,LVID;d水平下降,而Adropin+TAC组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平较Vehicle+TAC显着下降,LVID;d水平明显上升。HE、WGA及Masson染色发现,相比Vehicle+Sham组,Vehicle+TAC组心肌细胞相对面积显着增大,心肌组织纤维化水平显着增高,而Adropin干预能显着降低TAC组小鼠心肌肥大和纤维化水平。Western Blot法进一步分析发现,相比Vehicle+Sham组,Vehicle+TAC组小鼠心肌组织肥厚标志物ANP及纤维化标志物Collagen Ⅰ蛋白表达水平明显升高,而Adropin治疗能显着降低二者水平。心肌组织DHE染色、MDA含量和SOD蛋白表达水平检测提示,相比Vehicle+Sham组,Vehicle+TAC组大鼠心肌组织活性氧水平显着增加,MDA水平显着增高,SOD蛋白表达水平显着下降,而Adropin干预能显着降低心肌组织活性氧水平,降低MDA含量,提高SOD的表达水平。在Ang Ⅱ模型实验中,可以发现类似的Adropin治疗逆转病理性心肌重构,改善氧化应激的现象。进一步通过Western Blot研究Adropin治疗对Ang Ⅱ刺激引起的病理性心肌重构过程中Nrf2/HO-1信号通路的影响发现,相比Vehicle+NS组,Vehicle+Ang Ⅱ组小鼠心肌组织中的胞核Nrf2和HO-1的表达水平显着升高,总NQO-1表达水平显着下降,而Adropin治疗组即Adropin+Ang Ⅱ小鼠心肌组织中的胞核Nrf2和HO-1的表达水平相比Vehicle+Ang Ⅱ组进一步升高,胞浆NQO-1的表达水平上升。Adropin干预同样能减轻Ang Ⅱ刺激引起的心肌组织凋亡相关分子Cleaved Caspase3的蛋白表达水平。3.构建Adropin基因敲除小鼠,验证Adropin缺失对血管紧张素Ⅱ刺激引起的心肌重构模型的影响。Western Blot研究发现,相比野生型小鼠,Adropin基因（Enho）敲除小鼠心肌组织中无Adropin蛋白的表达,证明Adropin基因敲除小鼠模型的成功构建。彩超分析发现,相比WT+NS组,WT+Ang Ⅱ组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平显着增高,LVID;d水平下降,而Adropin-/-+Ang Ⅱ组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平相比WT+Ang Ⅱ组进一步升高,LVID;d水平进一步下降,二者具有统计学意义。HE、WGA及Masson染色发现,相比WT+NS组,WT+Ang Ⅱ组心肌细胞相对面积显着增大,心肌组织纤维化水平显着增高,而Adropin敲除能进一步增加Ang Ⅱ组小鼠心肌肥大和纤维化水平。Western Blot法进一步分析发现,相比WT+NS组,WT+Ang Ⅱ组小鼠心肌组织肥厚标志物ANP及纤维化标志物Collagen I蛋白表达水平明显升高,而Adropin敲除能进一步升高二者水平,且二者具有统计学意义。心肌组织DHE染色、MDA含量和SOD蛋白表达水平检测提示,相比WT+NS组,WT+Ang Ⅱ组大鼠心肌组织活性氧水平显着增加,MDA水平显着增高,SOD蛋白表达水平显着下降,而Adropin敲除能进一步增加心肌组织活性氧水平,增加MDA含量,降低SOD的蛋白表达水平。RT-PCR和Western Blot法分析发现,相比WT+Ang Ⅱ,Adropin-/-+Ang Ⅱ组小鼠心肌组织中Nrf2的mRNA和蛋白表达水平显着下降,进一步提示Adropin可能通过Nrf2信号通路参与Ang Ⅱ刺激引起的病理性心肌重构。4.构建腺相关病毒AAV9-Nrf2-GFP,验证心肌组织Nrf2过表达在Adropin基因缺失加重血管紧张素Ⅱ刺激引起的心肌重构中的回复性作用。冰冻切片荧光显像、RT-PCR和Western Blot分析发现,相比尾静脉注射NS组,尾静脉注射AAV9-Nrf2-GFP及Vectord的Adropin敲除小鼠心脏组织出现荧光蛋白表达。相比尾静脉注射Vectro组,尾静脉注射AAV9-Nrf2-GFP组小鼠心肌组织Nrf2的mRNA和蛋白表达水平显着增高,证明了AAV9-Nrf2-GFP具有上调Adropin-/-小鼠心肌组织中Nrf2表达水平的能力。心脏彩超分析发现,相比Vector+Ang Ⅱ组,AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平显着下降,LVID;d水平升高,二者具有统计学意义。HE、WGA及Masson染色发现,相比Vector+Ang Ⅱ组,AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ组心肌细胞相对面积显着下降,心肌组织纤维化水平显着降低。RT-PCR分析发现,相比Vector+Ang Ⅱ组,AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ组心肌组织肥厚标志物ANP、BNP、β-MHC及纤维化标志物Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CTGF的mRNA水平显着降低。心肌组织DHE染色、MDA含量和SOD蛋白表达水平检测提示,相比Vector+Ang Ⅱ组,AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ组心肌组织ROS水平和MDA含量明显降低,而SOD水平明显升高。Nrf2过表达干预同样能减轻Ang Ⅱ刺激Adropin基因敲除小鼠引起的心肌组织凋亡相关分子Cleaved Caspase3的蛋白表达水平。结论:Adropin处理可以延缓压力负荷及血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠心肌病理性重构,Adropin敲除可以加重血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠心肌病理性重构,Nrf2/HO-1信号通路可能在其中发挥作用。第四部分Adropin在Ang Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用及其机制目的:细胞水平探究Adropin是否参与了Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞的增殖和胶原合成及相关机制。方法:1.探究血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）处理心肌成纤维细胞对Adropin表达水平的影响,分为四组:Control组,Ang Ⅱ 0.1μM组,Ang Ⅱ 1μM组和Ang Ⅱ 2μM组,处理时间为24小时。采用RT-PCR和Western Blot法检测Adropin的mRNA及蛋白表达水平变化。采用外源添加重组Adropin及WB的方法观察其对Ang Ⅱ刺激CFs细胞Adropin蛋白表达变化的影响。2.采用外源添加重组Adropin的方法,在Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成中进行功能型实验,分为四组:Vehicle组,Adropin组,Vehicle+Ang Ⅱ组及Adropin+Ang Ⅱ组。其中,采用噻唑蓝（MTT）法检测心肌成纤维细胞的增殖;采用Western Blot检测心肌纤维化标志分子Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ及CTGF指标的表达。3.探究Adropin对Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成进程中的氧化应激指标ROS、MDA及SOD水平的影响,Western Blot法研究外源添加重组Adropin对Nrf2/HO-1信号通路的影响。Nrf2的DNA结合活性实验分析Adropin处理对血管紧张素Ⅱ刺激心肌成纤维细胞过程中细胞内Nrf2的DNA结合活性的影响。结果:1.RT-PCR和Western Blot实验提示,Adropin的mRNA及蛋白的表达水平随着Ang Ⅱ浓度增高下降,外源添加重组Adropin处理能提高处于Ang Ⅱ刺激下的纤维细胞中的Adropin水平。2.MTT检测发现,相比对照Vehicle组,血管紧张素Ⅱ刺激可引起心肌成纤维细胞增殖水平的增加,而Adropin处理能显着降低血管紧张素Ⅱ刺激引起的增殖水平增加。Western Blot分析提示,相比Vehicle组,血管紧张素Ⅱ刺激引起心肌成纤维细胞中的Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ和CTGF蛋白表达水平增高,而Adropin处理能显着降低三者的水平。3.细胞氧化应激水平检测发现,相比Vehicle组,Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞内活性水平和MDA水显着增高,而Ang Ⅱ+Adropin组活性氧及MDA水平较Ang Ⅱ组显着下降。相比Vehicle组,Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞中SOD水平显着降低,而Ang Ⅱ+Adropin组SOD水平较Ang Ⅱ组显着上升。进一步分析Adropin干预对心肌成纤维细胞在Ang Ⅱ刺激下的Nrf2/HO-1信号通路的影响发现,相比Vehicle组,Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞胞核Nrf2和HO-1蛋白表达水平显着增高,Adropin处理进一步增加了胞核Nrf2和HO-1的蛋白表达。相比Vehicle组,Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞胞总的Nrf2蛋白表达水平增高,NQO-1表达水平下降,而Adropin处理后进一步提高总的Nrf2和NQO-1蛋白的表达。此外,Nrf2的DNA结合活性实验分析发现,相比vehicle组,Ang Ⅱ刺激引起Nrf2的转录活性增加,Adropin处理能进一步显着增加Nrf2的转录活性。结论:Adropin处理可能通过增强Nrf2/HO-1信号通路提高细胞抗氧化能力,减轻细胞活性氧水平从而抑制心肌成纤维细胞的增殖及胶原合成。
肖红霞[9]（2021）在《益气养阴活血通络法治疗糖尿病肾病（G3A2期）合并动脉粥样硬化的临床研究》文中研究指明目的:糖尿病肾病合并动脉粥样硬化患者引起的并发症及后遗症是导致肾衰死亡的重要原因,本研究通过观察益气养阴活血通络法对G3A2期糖尿病肾病合并动脉粥样硬化患者治疗前后的临床症状、体征、相关实验室等指标的影响,为中医药治疗糖尿病肾病合并动脉粥样硬化提供新的行之有效的方法,延缓慢性肾脏病的进程,提高患者的生活质量,减轻经济压力。方法:选择2019年6月到2021年1月江西中医药大学附属中医院肾病科门诊及住院G3A2期糖尿病肾病合并动脉粥样硬化患者60例。采用随机对照原则分为对照组和治疗组,每组各30例。对照组给予常规西药（缬沙坦胶囊80mg、阿托伐他汀钙片20mg）基础治疗,治疗组在上述治疗方案下运用益气养阴活血方治疗。治疗12周后,主要观察指标如下:安全性指标:血、尿、大便常规、心电图、心脏彩超、肝功能等指标,实验前后各测试一次;每周监测呼吸、心率、脉搏、血压、体温等基础生命体征。疗效性指标:主要疗效性指标:1)中医证候积分;2)脂代谢指标:甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、颈动脉中膜厚度（IMT）;次要疗效性指标:1)糖代谢指标:空腹血糖（FBG）、糖化血红蛋白（Hb A1c）;2)肾功能指标:血肌酐（Scr）、估算肾小球滤过率（e GFR）、24h尿蛋白定量。结果:1.一般资料:本研究60例患者中,对照组和治疗组各脱落3例,两组以病程在10-15年最为多见。治疗组和对照组治疗前在性别、年龄、病程、中医证候积分、肾功能指标、脂代谢指标、糖代谢指标等方面均不具有统计学意义（P>0.05）,说明两组可以进行比较。2.中医证候临床疗效:治疗组中医证候临床疗效有效率88.9%,对照组有效率59.3%,采用秩和检验比较z=-2.118,P=0.034（P<0.05）,对照组和治疗组中医证候积分均有所下降,但治疗组效果更优（P<0.05）。3.肾功能变化:经12周治疗后,治疗组血肌酐、肾小球滤过率、24小时尿蛋白定量与0周时相比具有显着差异。治疗组血肌酐由95.92±12.33下降至78.14±5.91umol/l（P<0.01）。肾小球滤过率由0周时43.93±4.21上升至59.89±1.80ml/min（P<0.01）。24小时尿蛋白定量由113.11±34.27下降至47.34±16.65mg/24h（P<0.01）,且治疗组优于对照组。4.糖代谢变化:经12周治疗后,对照组与治疗组在空腹血糖方面均有一定的作用,治疗组空腹血糖从9.23±1.84下降至8.60±1.94mmol/l,对照组空腹血糖从9.10±1.46下降至8.58±1.33mmol/l,但两组之间不具有统计学意义（P>0.05）,不具有可比性;在调节糖化血红蛋白方面,治疗组由9.19±0.80下降至9.10±0.81mmol/l,治疗组具有统计学意义（P<0.01）,对照组无意义,说明对照组在降低糖化血红蛋白方面无明显作用,并且治疗组明显优于对照组。5.脂代谢变化:经12周治疗后,治疗组和对照组甘油三酯及高密度脂蛋白与0周时相比具有一定的作用。治疗组甘油三酯从3.44±0.88下降至2.66±1.01mmol/l,对照组甘油三酯从3.41±0.92下降至3.18±0.86mmol/l,治疗组高密度脂蛋白胆固醇从1.26±0.14升高至2.27±0.60mmol/l,对照组高密度脂蛋白胆固醇从1.33±0.13升高至2.54±0.31mmol/l,且治疗组比对照组疗效更明显,差异具有显着性（P<0.05）。在总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇方面,两组干预前后采用t检验,治疗组具有统计学差异（P<0.05）,但对照组无意义,说明治疗组在降低总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇方面有效,对照组无效。6.中医证候积分:经12周治疗后,对照组中医证候积分由34.52±4.10下降至18.44±8.12,治疗组中医证候积分由33.85±4.15下降至13.78±5.06,治疗组与对照组相比具有显着性差异（P<0.05）。在改善主症积分上,对照组与治疗组均有一定作用（P<0.05）,与对照组比较,治疗组主症积分改善更明显（P<0.05）,除自汗盗汗外（P>0.05）;在改善次症积分上,对照组与治疗组均有一定作用（P<0.05）,治疗组较对照组改善更明显（P<0.05）,除失眠多梦、舌有瘀斑外（P>0.05）。结论:益气养阴活血通络方能够有效改善糖尿病肾病（G3A2期）合并动脉粥样硬化患者的中医临床证候、24h尿蛋白定量、血肌酐、肾小球滤过率、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、甘油三酯、颈动脉中膜厚度水平,改善糖尿病肾病患者的肾功能,在延缓病程进展中发挥了作用,且在实验过程中无不良事件的发生,证明中医药在治疗糖尿病肾病合并动脉粥样硬化方面具有显着的优势,值得临床研究并推广。
魏照晴[10]（2021）在《原发性高血压患者肾功能影响因素及中医证候相关性分析》文中指出目的:研究原发性高血压患者肾功能的影响因素及中医证候分布,初步探讨原发性高血压患者肾功能进展的危险因素及原发性高血压患者中医证候与肾功能的相关性,为高血压肾损害的中西医预防及诊治提供新思路。方法:通过回顾性研究,纳入2016年1月至2021年1月在北京中医药大学东直门医院肾病科住院的原发性高血压患者,收集患者临床数据资料,进行中医辨证分型,根据患者 eGFR（ml/（min.1.73m2））将患者分为 eGFR≥60 组和 eGFR<60 组,运用 spss26.0进行数据统计分析,比较两组间数据指标差异,分析eGFR与各因素相关性,运用线性回归分析原发性高血压患者肾功能进展的危险因素。结果:1.一般情况:本研究共纳入原发性高血压患者180例,其中男性102例,女性78例,年龄最小为23岁,年龄最大为90岁,平均年龄为58.73±16.54岁,高血压病程为0～60年不等;2.两组患者情况比较:eGFR≥60组和eGFR<60组两组间患者年龄、吸烟情况、BMI、高血压病程、SBP、NLR、血磷、血钙、血尿素、SUA、ALB、TBIL、HDL-C存在显着差异（p<0.05）。两组间性别、饮酒情况、冠心病、脑梗死、其他心脑血管疾病、高血压家族史、肾脏病家族史、DBP、PP、TC、TG差异无统计学意义（p>0.05）;3.中医证型分布情况:eGFR≥60组的四种证型中,阴虚阳亢证所占比例最高（28.4%）,其次为肝火亢盛证（26.1%）和痰湿壅盛证（26.1%）,阴阳两虚证所占比例最低（19.3%）;eGFR<60组中,痰湿壅盛证所占比例最高（40.2%）,其次为阴虚阳亢证（26.1%）和阴阳两虚证（26.1%）,肝火亢盛证所占比例最低（7.6%）。两组间证候分布存在显着差异,进一步分析发现eGFR≥60组肝火亢盛证显着多于GFR<60组,痰湿壅盛证显着少于eGFR<60组,差异具有统计学意义（p<0.05）;4.原发性高血压患者肾功能影响因素分析:BMI、血钙、ALB、TBIL、HDL-C与eGFR呈显着正相关（p<0.05）;年龄、高血压病程、SBP、PP、NLR、血磷、血尿素、SUA与eGFR呈显着负相关（p<0.05）;性别、吸烟、饮酒、DBP、冠心病、脑梗死、其他心脑血管疾病、高血压家族史、肾脏病家族史、TG、TC等与eGFR未见显着相关性（p>0.05）。肝火亢盛证与eGFR呈正相关关系,痰湿壅盛证与eGFR呈负相关关系,相关性显着（p<0.05）。阴虚阳亢证、阴阳两虚证与eGFR未见显着相关（p>0.05）。多因素回归分析发现,血磷、NLR、年龄、SUA、SBP、低ALB、低BMI可能是肾功能进展的独立危险因素。结论:1.原发性高血压患者肾功能异常的发病以老年人为主,不同性别的肾损害发生率未见显着差异,随着高血压病程的进展,肾损害的发生率逐渐增加;2.HDL-C、TBIL和血钙与原发性高血压患者的肾功能相关,但并非肾功能进展的独立危险因素;3.年龄、SBP、NLR、低BMI、低ALB、SUA及血磷可能是原发性高血压患者肾功能进展的独立危险因素。因此及早有效控制血压、合理低蛋白饮食、补充营养、降磷、降尿酸治疗对高血压患者肾功能是获益的;4.肝火亢盛证、痰湿壅盛证与原发性高血压患者的肾功能相关,肝火亢盛证与eGFR呈正相关,痰湿壅盛证与eGFR呈负相关,临床表现为痰湿壅盛证的高血压患者应警惕肾脏损害的发生。对于未发生肾损害的患者应滋补肝肾、顾护中焦,未病先防,而对于已经出现肾损害的患者,应当注重化痰通络、活血降浊法的应用。
二、抑制血管紧张素II药物在延缓肾脏病进展中的作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、抑制血管紧张素II药物在延缓肾脏病进展中的作用（论文提纲范文）
（1）原儿茶醛抑制lncRNA9884介导的炎症以改善肾脏纤维化的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分:原儿茶醛对小鼠慢性梗阻性肾脏疾病的作用 |
| 材料与方法 |
| 1.实验动物 |
| 2.实验试剂与仪器 |
| 3.实验方法 |
| 4.统计学处理应用 |
| 结果 |
| 1.原儿茶醛对梗阻性肾病小鼠肾脏外观及功能的影响 |
| 2.原儿茶醛改善梗阻性肾病小鼠肾脏结构变化 |
| 3.原儿茶醛对梗阻性肾病小鼠肾脏上皮-间质转化所导致纤维化的作用 |
| 4.原儿茶醛对梗阻性肾病激活巨噬细胞引起的炎症反应的影响 |
| 5.原儿茶醛改善梗阻性肾病小鼠炎症因子的蛋白表达 |
| 6.原儿茶醛改善梗阻性肾病小鼠促炎细胞因子的m RNA表达 |
| 7.原儿茶醛可参与调节NF-κB和 Smad3 信号途径 |
| 8.原儿茶醛可抑制梗阻性肾病小鼠中LRNA9884 的表达 |
| 第二部分:原儿茶醛分别在IL-1β诱导的炎症和TGF-β1 诱导的纤维化微环境中对小鼠原代肾小管上皮细胞的作用 |
| 材料与方法 |
| 1.细胞培养 |
| 2.实验试剂与仪器 |
| 3.实验方法 |
| 4.统计学处理应用 |
| 结果 |
| 1.原代肾小管上皮细胞的鉴定 |
| 2.原儿茶醛对肾小管上皮细胞的干预浓度筛选 |
| 3.原儿茶醛改善了IL-1β诱导的肾小管上皮细胞促炎因子的蛋白表达 |
| 4.原儿茶醛改善了IL-1β诱导的肾小管上皮细胞促炎因子和LRNA9884的mRNA表达 |
| 5.原儿茶醛对IL-1β诱导的肾小管上皮细胞形态的影响 |
| 6.过表达LRNA9884 阻碍了PCA在 IL-1β诱导的肾小管上皮细胞中的抗炎作用 |
| 7.原儿茶醛抑制了TGF-β1 诱导的肾小管上皮细胞间质转化 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略词对照表 |
| 综述 肾纤维化的发病机制及研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（2）宋立群教授辨治糖尿病肾病Ⅲ-Ⅳ期验方的挖掘及其网络药理学机制探讨（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 一: 文献综述 |
| 1. 糖尿病肾病的研究进展 |
| 1.1 中医学对糖尿病肾病的研究进展 |
| 1.2 现代医学对糖尿病肾病的研究进展 |
| 2 数据挖掘及网络药理学在中医药领域的应用 |
| 2.1 数据挖掘在中医领域的运用情况 |
| 2.2 网络药理学在中医领域的运用情况 |
| 3. 技术路线 |
| 二: 基于中医传承计算平台探究宋立群教授治疗糖尿病肾病Ⅲ-Ⅳ期的组方规律及经验总结 |
| 1. 资料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.3 分析软件中医传承计算平台(V3.0)简介 |
| 2. 结果 |
| 2.1 基本信息统计分析 |
| 2.2 疾病分期及疗效判定分析 |
| 2.3 症候分析 |
| 2.4 方剂分析 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 宋立群教授学术经验及治学态度概述 |
| 3.2 宋立群教授辨治糖尿病肾病的经验采撷 |
| 3.3 数据挖掘统计分析结果讨论 |
| 3.4 验案举隅 |
| 三: 宋立群教授治疗糖尿病肾病经验方的网络药理学及分子对接研究 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 数据来源 |
| 1.2 宋师治疗DKD Ⅲ-Ⅳ期经验方的活性成分及作用靶点筛选 |
| 1.3 糖尿病肾病作用靶点筛选 |
| 1.4 药物-成分-靶点-疾病调控网络的构建 |
| 1.5 蛋白-蛋白互作网络图的构建 |
| 1.6 GO生物功能能富集分析及KEGG通路富集分析 |
| 1.7 分子对接 |
| 2 结果 |
| 2.1 宋师治疗DKDⅢ-Ⅳ期自拟经验方的活性成分筛选情况 |
| 2.2 自拟经验方的潜在作用靶点及DKD相关基因靶点 |
| 2.3 自拟经验方-糖尿病肾病共同靶点汇总 |
| 2.4 自拟经验方治疗糖尿病肾病的调控网络构建 |
| 2.5 自拟经验方治疗糖尿病肾病的功能蛋白互作网络 |
| 2.6 GO功能富集分析 |
| 2.7 KEGG通路富集分析 |
| 2.8 分子对接 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 创新点说明 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表论文 |
| 个人简历 |
（3）补肾活血祛湿化浊法治疗CKD4期伴高尿酸血症临床疗效观察（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 1 临床资料 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入和排除标准 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 分组方法 |
| 2.2 用药方法 |
| 2.3 观察指标 |
| 2.4 观察疗程 |
| 2.5 中西医疗效判定标准 |
| 3 统计学方法 |
| 4 研究结果与分析 |
| 4.1 基线资料 |
| 4.2 实验室检验指标分析 |
| 4.3 疗效分析 |
| 4.4 治疗前后两组患者安全性指标分析 |
| 4.5 不良反应 |
| 讨论 |
| 1 CKD与高尿酸血症 |
| 1.1 高尿酸血症与慢性肾脏病概述 |
| 1.2 高尿酸血症与CKD相关性研究 |
| 1.3 CKD对高尿酸血症的影响 |
| 1.4 尿酸在肾脏的代谢 |
| 1.5 高尿酸血症的肾损害 |
| 1.6 CKD伴高尿酸血症与多系统疾病关系的研究 |
| 1.7 非布司他对CKD伴高尿酸血症的治疗 |
| 1.8 CKD伴高尿酸血症的中医治疗特色 |
| 2 补肾活血祛湿化浊法立项依据 |
| 2.1 国医大师张大宁教授“肾虚血瘀论”及“补肾活血法” |
| 2.2 补肾活血法在慢性肾脏病中的应用 |
| 2.3 补肾活血法在高尿酸血症中的应用 |
| 2.4 湿浊邪气对高尿酸血症及CKD的影响 |
| 2.5 小结 |
| 3 治则治法及方药分析 |
| 3.1 治则治法 |
| 3.2 组方分析 |
| 3.3 主要药物的现代药理研究 |
| 结论 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 慢性肾脏病伴高尿酸血症中医药研究进展 |
| 1 CKD与高尿酸血症的流行病学调查 |
| 1.1 慢性肾脏病流行病学调查 |
| 1.2 高尿酸血症流行病学研究 |
| 2 CKD与 HUA的相关性研究 |
| 3 中医对CKD伴高尿酸血症的认识 |
| 3.1 中医对高尿酸血症的认识 |
| 3.2 中医对慢性肾脏疾病的认识 |
| 4 CKD和高尿酸血症的中医辩证治疗 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）益肾降糖饮对气阴两虚夹瘀型糖尿病肾脏病G3A2-3期患者的临床疗效观察以及对AIF-1的影响（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 资料与方法 |
| 1 研究资料 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 分组方法 |
| 1.3 诊断标准 |
| 1.4 纳入标准 |
| 1.5 排除标准 |
| 1.6 剔除标准、脱落标准及处理 |
| 1.7 洗脱期 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 治疗方法 |
| 2.2 观察方法 |
| 2.3 安全性评价和疗效判定标准 |
| 2.4 统计方法 |
| 研究结果 |
| 1.一般资料比较 |
| 2 疗效分析 |
| 2.1 临床总疗效比较 |
| 2.2 中医证候疗效比较 |
| 2.3 对照组与试验组相关指标及疗效比较 |
| 2.4 指标相关性分析 |
| 3 安全性评价 |
| 讨论 |
| 1 祖国医学对DKD的认识 |
| 1.1 对DKD病名的认识 |
| 1.2 对DKD病因病机的认识 |
| 1.3 对DKD治疗的认识 |
| 2 现代医学对DKD发病机制的认识 |
| 2.1 遗传因素 |
| 2.2 氧化应激 |
| 2.3 糖代谢异常 |
| 2.4 脂代谢紊乱 |
| 2.5 微炎症状态 |
| 3 现代医学治疗DKD的研究进展 |
| 3.1 RAAS系统抑制剂 |
| 3.2 钠葡萄糖共转运蛋白2抑制剂 |
| 3.3 肠促胰岛素疗法 |
| 4 AIF-1的相关意义 |
| 4.1 AIF-1概述 |
| 4.2 AIF-1与炎症的关系 |
| 4.3 AIF-1与肾脏病的关系 |
| 5 益肾降糖饮的方药特点及现代药理研究 |
| 5.1 益肾降糖饮的方药组成及配伍特点 |
| 5.2 益肾降糖饮的现代药理研究 |
| 6 研究结果分析 |
| 6.1 益肾降糖饮治疗糖尿病肾脏病的疗效分析 |
| 6.2 益肾降糖饮对肾功能的疗效分析 |
| 6.3 益肾降糖饮对微炎症状态改善的疗效分析 |
| 6.4 益肾降糖饮改善脂代谢的疗效分析 |
| 6.5 益肾降糖饮改善尿蛋白排泄的疗效分析 |
| 6.6 AIF-1与其他指标的相关性分析 |
| 6.7 小结 |
| 7 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 糖尿病肾病的中医药研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（5）沙库巴曲缬沙坦对心力衰竭患者肾脏保护作用的的Meta分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 资格标准和搜索策略 |
| 1.2 研究选择和数据提取 |
| 1.3 偏倚评估和研究质量考核 |
| 2 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 检索文献结果 |
| 3.2 肾功能改变的结果 |
| 3.3 敏感性分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 沙库巴曲缬沙坦与肾功能 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（6）老年慢性肾脏病病因演变及中西医结合治疗方法（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 慢性肾脏病中西医认知 |
| 参考文献 |
| 综述二 肾康注射液、前列地尔注射液治疗慢性肾功能不全的疗效及机制 |
| 参考文献 |
| 综述三 雷公藤制剂在治疗糖尿病肾病中的应用 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 糖尿病和高血压已经成为老年慢性肾脏病患者主要病因:单中心30年回顾性研究 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 1.4 诊断标准 |
| 1.5 临床资料统计 |
| 1.6 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 各时间段CKD患者一般资料 |
| 2.2 总体CKD患者病因构成及演变 |
| 2.3 老年和中青年CKD病因构成及演变 |
| 2.4 2018-2019年ESRD患者病因构成 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 雷公藤制剂联合ACEI/ARB类药物治疗早中期糖尿病肾病的META分析 |
| 1 临床资料与方法 |
| 1.1 纳入标准 |
| 1.2 排除标准 |
| 1.3 结局指标 |
| 1.4 疗效评价标准 |
| 1.5 检索策略 |
| 1.6 数据提取 |
| 1.7 纳入文献方法质量学评价 |
| 1.8 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 文献检索流程图及结果 |
| 2.2 纳入研究基本特征 |
| 2.3 纳入研究质量评价 |
| 2.4 meta分析结果 |
| 2.5 发表偏倚 |
| 3 讨论 |
| 第三部分 肾康注射液联合前列地尔治疗老年慢性肾脏病(CKD3-4期)患者疗效分析 |
| 1 临床资料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 样本量计算 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 分组及治疗方法 |
| 1.6 疗效评价方法 |
| 1.7 临床基线数据及观察指标 |
| 1.8 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 入选患者临床基线数据 |
| 2.2 治疗后肾功能改善情况 |
| 2.3 疗效评估 |
| 2.4 不良反应 |
| 3 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）STAT3调控的自噬在血管紧张素Ⅱ诱导的肾小管上皮细胞衰老过程中的作用及氯沙坦对其的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 自噬在血管紧张素Ⅱ诱导人肾小管上皮细胞衰老过程中的作用 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料与试剂 |
| 2.1.1 细胞来源 |
| 2.1.2 实验主要仪器 |
| 2.1.3 实验主要试剂及药品 |
| 2.1.4 实验主要试剂及药品配置 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 人肾小管上皮细胞培养 |
| 2.2.2 建立血管紧张素Ⅱ诱导的人肾小管上皮细胞衰老模型 |
| 2.2.3 实验分组 |
| 2.2.4 实验检测指标 |
| 2.2.5 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 血管紧张素Ⅱ可诱导人肾小管上皮细胞发生衰老 |
| 3.1.1 细胞周期检测结果 |
| 3.1.2 Western blot结果 |
| 3.1.3 β-半乳糖苷酶染色结果 |
| 3.2 血管紧张素Ⅱ诱导人肾小管上皮细胞衰老过程中自噬活性增强并介导其衰老 |
| 3.2.1 Western blot结果 |
| 3.2.2 电镜结果 |
| 3.2.3 LC3-GFP-mRFP自噬双标腺病毒转染结果 |
| 3.2.4 β-半乳糖苷酶染色结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 STAT3/PI3KC3调控的自噬在血管紧张素Ⅱ诱导的人肾小管上皮细胞衰老过程中的调控作用 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料与试剂 |
| 2.1.1 细胞来源 |
| 2.1.2 实验主要仪器 |
| 2.1.3 实验主要试剂及药品 |
| 2.1.4 实验主要试剂及药品配置 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 人肾小管上皮细胞培养 |
| 2.2.2 实验分组 |
| 2.2.3 siRNA-STAT3转染及STAT3基因沉默 |
| 2.2.4 实验检测指标 |
| 2.2.5 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 血管紧张素Ⅱ诱导人肾小管上皮细胞衰老过程中STAT3/PI3KC3通路激活 |
| 3.2 药物抑制和基因沉默STAT3表达,可抑制血管紧张素Ⅱ诱导的人肾小管上皮细胞自噬激活,减轻细胞衰老 |
| 3.2.1 S3I-201抑制STAT3表达后,AngⅡ诱导的人肾小管上皮细胞自噬激活被抑制,肾小管上皮细胞衰老减轻 |
| 3.2.2 siRNA-STAT3基因沉默STAT3表达后,Ang Ⅱ诱导的人肾小管上皮细胞自噬激活被抑制,肾小管上皮细胞衰老减轻 |
| 3.3 氯沙坦可通过抑制STAT3激活,进而抑制血管紧张素Ⅱ诱导的人肾小管上皮细胞自噬、减轻细胞衰老 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 氯沙坦可抑制血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠衰老过程中STAT3激活、并减轻小鼠肾小管上皮细胞衰老 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料与试剂 |
| 2.1.1 实验对象 |
| 2.1.2 实验主要仪器 |
| 2.1.3 实验主要试剂及药品 |
| 2.1.4 实验主要试剂及药品配置 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 动物饲养方法及分组 |
| 2.2.2 制备给药微渗透泵及皮下植入 |
| 2.2.3 小鼠血液、尿液及肾脏组织标本的留取 |
| 2.2.4 小鼠血压测量 |
| 2.2.5 实验检测指标 |
| 2.2.6 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 血管紧张素Ⅱ诱导小鼠肾脏衰老过程中小鼠血压、血尿素氮、血肌酐、24小时尿蛋白、尿NAG的变化及氯沙坦对其影响 |
| 3.2 血管紧张素Ⅱ可诱导小鼠肾小管上皮细胞发生衰老 |
| 3.3 氯沙坦可通过抑制STAT3激活,减轻自噬激活、延缓血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠肾小管上皮细胞肾小管上皮细胞衰老 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 衰老与肾脏疾病 |
| 参考文献 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（8）Adropin在高血压心肌重构中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 高血压左室肥厚患者外周血Adropin水平的变化及意义 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器、设备及试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 Adropin在高血压患者血清中的表达水平变化 |
| 3.2 高血压患者一般临床资料 |
| 3.3 Adropin水平与左室质量指数的相关性研究 |
| 3.4 Adropin水平在高血压左室肥厚中的诊断价值分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 重组Adropin对自发性高血压大鼠心肌重构的影响 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器、设备与试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 SHR大鼠心肌重构的发生及Adropin表达水平的下降 |
| 3.2 Adropin处理延缓高血压大鼠心肌重构的进展 |
| 3.3 Adropin处理抑制SHR大鼠心肌组织炎症水平的影响 |
| 3.4 Adropin处理降低SHR大鼠心肌组织氧化应激水平 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 Adropin在小鼠病理性心肌重构中的作用及机制 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器、设备与试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 小鼠病理性心肌重构的形成及Adropin表达水平的下降 |
| 3.2 Adropin处理延缓TAC诱导的小鼠病理性心肌重构 |
| 3.3 Adropin处理延缓Ang Ⅱ诱导的小鼠病理性心肌重构 |
| 3.4 Adropin敲除增加Ang Ⅱ诱导的小鼠病理性心肌重构 |
| 3.5 Nrf2 过表达减轻Adropin缺失加重Ang Ⅱ模型小鼠病理性心肌重构的程度 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第四部分 Adropin在 Ang Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用及其机制 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器、设备与试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 Ang Ⅱ对 CFs细胞Adropin表达的影响 |
| 3.2 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞Adropin蛋白表达变化的影响 |
| 3.3 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞增殖的影响 |
| 3.4 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞胶原合成的影响 |
| 3.5 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞氧化应激的影响 |
| 3.6 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞引起Nrf2/HO-1 信号通路变化的影响 |
| 3.7 Adropin增强Ang Ⅱ刺激CFs细胞中的Nrf2 转录活性 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 Adropin:一种新的心脏疾病生物标记物 |
| 参考文献 |
（9）益气养阴活血通络法治疗糖尿病肾病（G3A2期）合并动脉粥样硬化的临床研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词 |
| 引言 |
| 第一部分 理论回顾 |
| 综述一 中医药治疗糖尿病肾病的研究进展 |
| 1 DKD的病因病机 |
| 2 单味药及其提取物 |
| 3 中药多糖 |
| 4 中药复方 |
| 5 中药制剂注射液治疗DKD |
| 6 中医外治法 |
| 7 讨论及展望 |
| 综述二 现代医学治疗糖尿病肾病的研究进展 |
| 1 DKD的概念及流行病学 |
| 2 DKD的发病机制 |
| 3 糖尿病肾病的西医治疗进展 |
| 4 总结 |
| 第二部分:临床实验研究 |
| 1 试验对象与试验方法 |
| 1.1 临床资料 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 剔除及脱落标准 |
| 2 试验研究方法 |
| 2.1 研究对象分组 |
| 2.2 治疗方法 |
| 2.3 观察指标 |
| 2.4 疗效的判定 |
| 3 统计分析方法 |
| 4 流程图 |
| 5 结果 |
| 5.1 一般临床资料比较 |
| 5.2 两组治疗前比较 |
| 5.3 治疗后情况分析 |
| 6 安全性分析 |
| 第三部分:讨论与分析 |
| 1 立题依据 |
| 1.1 糖尿病肾病中西医病因病机探讨 |
| 1.2 动脉粥样硬化中西医病因病机探讨 |
| 1.3 糖尿病肾病与动脉粥样硬化关系 |
| 1.4 中医治疗糖尿病肾病合并动脉粥样硬化的理论探讨 |
| 2 益气养阴、活血通络汤方解及单味药物分析 |
| 2.1 益气养阴、活血通络方剂分析 |
| 2.2 益气养阴、活血通络方剂单味药物分析 |
| 3 疗效分析 |
| 3.1 益气养阴、活血通络方对G3A2 期糖尿病肾病合并动脉粥样硬化患者疗效分析 |
| 3.2 益气养阴、活血通络方对G3A2 期糖尿病肾病合并动脉粥样硬化患者Scr、GFR、及24h尿白蛋白的影响及分析 |
| 3.3 益气养阴、活血通络方对G3A2 期糖尿病肾病合并动脉粥样硬化患者血糖、血脂的影响及分析 |
| 3.4 益气养阴、活血通络方对G3A2 期糖尿病肾病合并动脉粥样硬化患者中医证候的分析 |
| 3.5 安全性分析 |
| 4 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简介 |
（10）原发性高血压患者肾功能影响因素及中医证候相关性分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 高血压肾损害的西医研究进展 |
| 1 流行病学 |
| 2 高血压肾损害的危险因素 |
| 3 高血压肾损害的治疗 |
| 参考文献 |
| 综述二 高血压肾损害的中医研究进展 |
| 1 中医对高血压的认识 |
| 2 中医对慢性肾脏病的认识 |
| 3 中医对高血压肾损害的认识 |
| 4 中医药治疗高血压肾病的机制 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 临床研究 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 中医辨证分型标准 |
| 1.4 纳排标准 |
| 1.5 研究方法 |
| 1.6 统计学方法 |
| 2 研究结果 |
| 2.1 原发性高血压患者肾功能分期情况 |
| 2.3 中医证候分布情况 |
| 2.4 原发性高血压患者肾功能影响因素探讨 |
| 3 讨论 |
| 3.1. 患者基本资料 |
| 3.2 中医证候分布 |
| 3.3 原发性高血压患者肾功能的相关因素 |
| 3.4 原发性高血压患者肾功能进展影响因素 |
| 4 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
四、抑制血管紧张素II药物在延缓肾脏病进展中的作用（论文参考文献）
- [1]原儿茶醛抑制lncRNA9884介导的炎症以改善肾脏纤维化的研究[D]. 杨洁珂. 西南医科大学, 2021(01)
- [2]宋立群教授辨治糖尿病肾病Ⅲ-Ⅳ期验方的挖掘及其网络药理学机制探讨[D]. 楚鎏慈. 黑龙江中医药大学, 2021(01)
- [3]补肾活血祛湿化浊法治疗CKD4期伴高尿酸血症临床疗效观察[D]. 聂闻达. 天津中医药大学, 2021(01)
- [4]益肾降糖饮对气阴两虚夹瘀型糖尿病肾脏病G3A2-3期患者的临床疗效观察以及对AIF-1的影响[D]. 刘海雯. 福建中医药大学, 2021(09)
- [5]沙库巴曲缬沙坦对心力衰竭患者肾脏保护作用的的Meta分析[D]. 李娟. 山西医科大学, 2021(01)
- [6]老年慢性肾脏病病因演变及中西医结合治疗方法[D]. 吴宇. 北京中医药大学, 2021(08)
- [7]STAT3调控的自噬在血管紧张素Ⅱ诱导的肾小管上皮细胞衰老过程中的作用及氯沙坦对其的影响[D]. 李慧敏. 中国医科大学, 2021
- [8]Adropin在高血压心肌重构中的作用及机制研究[D]. 胡欢. 南昌大学, 2021(01)
- [9]益气养阴活血通络法治疗糖尿病肾病（G3A2期）合并动脉粥样硬化的临床研究[D]. 肖红霞. 江西中医药大学, 2021(01)
- [10]原发性高血压患者肾功能影响因素及中医证候相关性分析[D]. 魏照晴. 北京中医药大学, 2021(08)